lncRNA TUG1吸附microRNA-144對狼瘡腎炎小鼠腎小球系膜細胞炎癥因子分泌與凋亡的影響及其機制研究

馬洪波，董燕嬌，孫琨，王碩，王洪云

（淄博市中心醫(yī)院 腎內(nèi)科，山東 淄博255036）

狼瘡腎炎是系統(tǒng)性紅斑狼瘡最常見的并發(fā)癥，臨床主要表現(xiàn)為血尿、蛋白尿、腎功能不全等，是由腎內(nèi)自身抗體與抗原結(jié)合形成的免疫復合物沉積在腎小球等不同部位造成的免疫損傷所致?，F(xiàn)階段狼瘡腎炎的病因尚未完全明確，也缺乏根治性的治療措施，新的靶向治療或免疫抑制劑的開發(fā)為狼瘡腎炎的治療提供了更多選擇[1-3]。

長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA, lncRNA）指的是長度＞200 個核苷酸、缺乏蛋白編碼能力的RNA，分子內(nèi)部二級空間結(jié)構(gòu)特定且復雜，有多個位點可與蛋白質(zhì)結(jié)合，還能夠通過堿基互補配對的原則與DNA、RNA 發(fā)生特異性的相互作用，使其適當?shù)氖Щ罨蚣せ?，參與各類生物學進程[4]。競爭內(nèi)源性RNA（ceRNA）可以通過競爭性地結(jié)合microRNA 來調(diào)節(jié)基因表達。有研究[5]發(fā)現(xiàn)，lncRNA就是作為ceRNA 競爭性結(jié)合細胞內(nèi)大量microRNA，調(diào)控其表達，進而調(diào)控下游基因并參與到多種生物學行為中。

lncRNA ?；撬嵘险{(diào)基因1（taurine upregulated gene 1, TUG1）位于染色體22q12，被證明與癌癥有關(guān)[6-8]。研究發(fā)現(xiàn)，TUG1 在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中表達降低[9]。MicroRNA-144（miR-144）與血紅素和自身限制性炎癥有關(guān)，血紅素通過上調(diào)miR-144-3p的表達延緩自身限制性炎癥的消退[10]。此外，一項關(guān)于IgA 腎病的研究[11]發(fā)現(xiàn)，來源于尿紅細胞的miR-144-3p 在IgA 腎病患者尿沉渣中表達升高，其可作為IgA 腎病的診斷標志物。但目前尚未明確miR-144 與狼瘡腎炎的進展是否有關(guān)。本研究從ceRNA 理論角度出發(fā)，通過生物信息學網(wǎng)站預(yù)測lncRNA TUG1 的下游靶點，并通過動物實驗探討其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及在狼瘡腎炎中的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、試劑與儀器

10 周齡雄性B6.MRL-FaslprNju 系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型小鼠20 只，體重（26.5±1.5）g；10 周齡C57BL/6健康雄性小鼠5 只，體重（26.5±1.6）g；均購自南京大學模式動物研究所[動物實驗許可證號：SYXK（蘇）2019-0056]。基礎(chǔ)培養(yǎng)液、Annexin-V-FITC/PI 雙標染色試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司，Trizol試劑盒、實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、裂解液均購自武漢默沙克生物科技有限公司， Ambion PARISTM試劑盒（AM1921）購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司，HEK-293T 細 胞、 TUG1-3'-UTR-WT 和TUG1-3'-UTR-MUT 質(zhì)粒購自湖南豐暉生物科技有限公司，雙熒光素酶檢測試劑盒購自上海漢恒生物科技有限公司，兔抗Ⅳ型膠原（Collagen Ⅳ, Col Ⅳ）抗體、纖連蛋白（Fibronectin, FN）抗體和GAPDH 抗體購自北京義翹神州科技有限公司，TBST 緩沖液購自大連美侖生物技術(shù)有限公司，酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒購自武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，噻唑藍（MTT）購自廣州銳博生物科技有限公司，Transwell 試劑盒購自江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司。流式細胞儀購自美國貝克曼庫爾特公司，酶聯(lián)免疫檢測儀、共聚焦顯微鏡均購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司，倒置顯微鏡（Axio Vert.A1）購自德國卡爾蔡司公司。

1.2 方法

1.2.1 實驗動物分組 B6.MRL-FaslprNju 系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型小鼠和C57BL/6 小鼠在適應(yīng)性條件下喂養(yǎng)5 d。每天收集B6.MRL-FaslprNju 系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型小鼠24 h 尿量，試紙測定尿蛋白濃度＞1 mg/L表明狼瘡腎炎發(fā)病，為狼瘡腎炎組（n=20）。C57BL/6 小鼠為正常組（n=5）。

1.2.2 腎小球系膜細胞分離純化 將正常組和狼瘡腎炎組小鼠麻醉后快速斷頸處死，每只小鼠取1 g腎臟組織保存?zhèn)溆?，同時分離腎小球系膜細胞并純化。細胞分離純化步驟：生理鹽水清洗腎組織，然后將腎皮質(zhì)剪碎，依次放入400 目、200 目、100 目共3 種不同孔徑的篩網(wǎng)中輕輕碾壓并用生理鹽水沖洗，在最底層的篩網(wǎng)吸出一部分組織鏡下觀察，在組織中加入膠原酶消化30 min，當有完整的細胞散出時加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基使消化終止。將沉淀物分散均勻然后加入基礎(chǔ)培養(yǎng)液置于37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每24 小時換新培養(yǎng)液，5 d 左右細胞傳1 代，4～6 代細胞為純化后的腎小球系膜細胞。

1.2.3 qRT-PCR 檢測正常組和狼瘡腎炎組小鼠腎小球系膜細胞中l(wèi)ncRNA TUG1 和miR-144 mRNA的相對表達量 Trizol 試劑盒提取正常組和狼瘡腎炎組小鼠腎小球系膜細胞的總RNA，紫外線吸收法檢測RNA 純度和濃度。將RNA 逆轉(zhuǎn)錄為樣品cDNA。依據(jù)qRT-PCR 試劑盒說明書擴增cDNA，將PCR 管置于DNA 擴增儀，94℃預(yù)變性5 min，94℃變性45 s，56℃退火30 s，72℃延伸30 s，共30 次循環(huán)，之后72℃延伸10 min。lncRNA TUG1 內(nèi)參為GAPDH，miR-144 內(nèi)參為U6。引物的設(shè)計和合成由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司完成，引物序列見表1。采用2－ΔΔCt法計算lncRNA TUG1 和miR-144 mRNA 的相對表達量。

表1 引物序列

1.2.4 lncRNA TUG1 亞細胞定位和雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?使用PSORT 亞細胞定位網(wǎng)站（https://www.genscript.com/psort.html）預(yù)測TUG1 在細胞中表達的位置。采用Ambion PARISTM（AM1921）試劑盒分離狼瘡腎炎組小鼠腎小球系膜細胞的細胞質(zhì)和細胞核，嚴格按照試劑盒說明書操作；采用qRT-PCR 檢測細胞質(zhì)和細胞核中l(wèi)ncRNA TUG1 mRNA 相對表達量，具體過程同1.2.3。通過RNA22 網(wǎng)站（https://cm.jefferson.edu/rna22/）預(yù)測lncRNA TUG1 和miR-144 的結(jié)合位點，之后通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測兩者的關(guān)系。狼瘡腎炎組小鼠腎小球系膜細胞的培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及分組：分離腎小球系膜細胞，將其置于37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 后進行轉(zhuǎn)染并分為NC 組（腎小球系膜細胞轉(zhuǎn)染陰性對照序列）、TUG1 過表達組（腎小球系膜細胞轉(zhuǎn)染TUG1）、sh-TUG1 組（腎小球系膜細胞轉(zhuǎn)染sh-TUG1）、miR-144 mimic 組（腎小球系膜細胞轉(zhuǎn)染miR-144 mimic）、TUG1 過表達+miR-144 mimic 組（腎小球系膜細胞轉(zhuǎn)染TUG1 和miR-144 mimic）。

1.2.5 ELISA 法檢測各組細胞培養(yǎng)液中炎癥因子的表達 NC 組、TUG1 過表達組、sh-TUG1 組、miR-144 mimic 組、TUG1過表達+miR-144 mimic組細胞轉(zhuǎn)染48 h 后，采用ELISA 法檢測培養(yǎng)液中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-6（IL-6）水平，實驗嚴格按照試劑盒說明書操作，使用酶聯(lián)免疫檢測儀測定450 nm 波長處的吸光度值。

1.2.6 Western blotting 法檢測各組細胞Col Ⅳ、FN蛋白相對表達量 收集NC 組、TUG1 過表達組、sh-TUG1 組、miR-144 mimic 組、TUG1 過表達+miR-144 mimic 組轉(zhuǎn)染后的腎小球系膜細胞，加入裂解液冰上裂解30 min，3 000 r/min 離心10 min，收取上清液，行SDS-PAGE 電泳，加熱使蛋白變性。轉(zhuǎn)膜加入兔抗Col Ⅳ、FN 和GAPDH 抗體，常溫搖床封閉過夜孵育后TBST 洗膜，再加入辣根酶標記山羊抗兔IgG。以GAPDH 抗體為內(nèi)參。常溫搖床孵育2 h，收集顯色發(fā)光圖像，采用Image J 軟件計算Col Ⅳ、FN 蛋白相對表達量。

1.2.7 MTT 實驗檢測各組細胞相對增殖活力 配置NC 組、TUG1 過表達組、sh-TUG1 組、miR-144 mimic 組、TUG1 過表達+miR-144 mimic 組單個細胞懸液，以每孔2×105個細胞接種到96 孔板，將培養(yǎng)基放置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于24 h、48 h、72 h取出培養(yǎng)板，每孔加入15 μL MTT 溶液，繼續(xù)在37℃環(huán)境中培養(yǎng)4 h。停止培養(yǎng)后，2 000 r/min 離心5 min，抽吸棄孔內(nèi)上清液。每個孔內(nèi)加150 μL 二甲基亞砜（DMSO），震蕩孵育10 min。最后使用酶聯(lián)免疫檢測儀檢測570 nm 波長處的吸光度值。

1.2.8 Transwell 實驗檢測各組細胞侵襲數(shù)將Transwell 小室置于24 孔板，PBS 沖洗，胰酶消化后收集NC 組、TUG1 過表達組、sh-TUG1 組、miR-144 mimic 組、TUG1 過表達+miR-144 mimic 組細胞，3 000 r/min 離心10 min。重懸細胞后取200 μL 細胞懸液，鋪板并培養(yǎng)。24 孔板下室加入500 μL 含趨化因子的培養(yǎng)基，常規(guī)培養(yǎng)24 h 后采用5%結(jié)晶紫染液染色2 min，采用光學顯微鏡觀察染色情況，拍照后采用Image J 軟件統(tǒng)計細胞侵襲數(shù)。

1.2.9 流式細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡率 采用Annexin-V-FITC/PI 雙標染色試劑盒，轉(zhuǎn)染后懸浮生長的細胞中加Annexin-V-FITC 結(jié)合液，避光孵育15 min 后低溫2 000 r/min 離心3 min，棄去上清液，再加入Annexin-V-FITC 結(jié)合液和配置好的PI染色液，暗室冰浴5 min，采用流式細胞儀檢測NC組、TUG1 過表達組、sh-TUG1 組、miR-144 mimic組、TUG1 過表達+miR-144 mimic 組細胞凋亡情況。液體配置和步驟按試劑盒說明書操作。細胞凋亡率=細胞早期凋亡率+細胞晚期凋亡率。

1.3 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）或中位數(shù)（上四分位數(shù)，下四分位數(shù)）[M（P25，P75）]表示，兩組間比較采用t檢驗或Wilcoxon 符號秩檢驗或Kruskal-Wallis 檢驗，多組間比較采用方差分析或重復測量設(shè)計的方差分析，進一步兩兩比較采用SNK-q檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 成功分離純化腎小球系膜細胞

使用倒置顯微鏡觀察腎小球系膜細胞的形態(tài)發(fā)現(xiàn)，細胞的體積大，形態(tài)為成纖維細胞狀，胞體多為不規(guī)則的梭形、多角形；胞質(zhì)具有多個突起，向四周延伸；胞核則位于細胞的中央，呈卵圓形或圓形。見圖1。

圖1 腎小球系膜細胞 （倒置顯微鏡×400）

2.2 狼瘡腎炎組小鼠腎小球系膜細胞中l(wèi)ncRNA TUG1表達被抑制而miR-144表達增強

正常組小鼠腎小球系膜細胞中l(wèi)ncRNA TUG1 mRNA 相對表達量為（1.00±0.09），miR-144 mRNA相對表達量為（1.00±0.07）；狼瘡腎炎組小鼠腎小球系膜細胞lncRNA TUG1 mRNA 相對表達量為（0.56±0.04），miR-144 mRNA 相對表達量為（1.62±0.20）。正常組和狼瘡腎炎組小鼠腎小球系膜細胞lncRNA TUG1 和miR-144 mRNA 相對表達量比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=9.526 和4.896，P=0.011 和0.008），狼瘡腎炎組小鼠腎小球系膜細胞lncRNA TUG1 mRNA相對表達量降低，miR-144 mRNA 相對表達量升高。見圖2。

圖2 正常組和狼瘡腎炎組小鼠腎小球系膜細胞lncRNA TUG1和miR-144 mRNA相對表達量比較 （±s）

2.3 lncRNA TUG1能夠作為ceRNA吸附miR-144

通過亞細胞定位網(wǎng)站發(fā)現(xiàn)，lncRNA TUG1主要定位于細胞質(zhì)中。細胞質(zhì)中l(wèi)ncRNA TUG1 mRNA 相對表達量為（1.42±0.13），細胞核為（1.00±0.09），兩者比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=4.601，P=0.010），細胞質(zhì)中l(wèi)ncRNA TUG1 mRNA 相對表達量較高。通過RNA22 網(wǎng)站發(fā)現(xiàn)lncRNA TUG1 和miR-144 存在結(jié)合位點，雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灠l(fā)現(xiàn)，兩者有靶向關(guān)系：TUG1-3'-UTR-WT 中，與NC 組（1.00±0.11）比較，miR-144 mimic 組（0.52±0.03）的HEK-293T 細胞熒光素酶活性顯著降低（t=7.292，P=0.002）；在TUG1-3'-UTR-MUT 中，NC 組與miR-144 mimic 組的HEK-293T 細胞熒光素酶活性比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見圖3。

圖3 lncRNA TUG1和miR-144的靶向關(guān)系

2.4 lncRNA TUG1抑制狼瘡腎炎組小鼠腎小球系膜細胞炎癥因子的分泌且能被miR-144阻斷

NC 組、TUG1 過表達組、sh-TUG1 組、miR-144 mimic組、TUG1過表達+miR-144 mimic組細胞TNF-α、IL-1β、IL-6 水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。進一步兩兩比較，結(jié)果：與NC 組比較，TUG1過 表達組的TNF-α、IL-1β、IL-6 水平 降低（q=4.087、4.380 和5.583，均P=0.000），sh-TUG1 組的TNF-α、IL-1β、IL-6 水平升高（q=4.065、9.432 和3.970，均P=0.000），miR-144 mimic 組的TNF-α、IL-1β、IL-6 水平升高（q=8.066、5.933 和8.840，均P=0.000）；TUG1 過表達+miR-144 mimic 組TNF-α、IL-1β、IL-6 水平與NC 組比較，差異無統(tǒng)計學意義（q=0.670、0.276 和0.310，均P＞0.05）。見表2。

表2 各組TNF-α、IL-1β、IL-6水平比較 （pg/mL，±s）

表2 各組TNF-α、IL-1β、IL-6水平比較 （pg/mL，±s）

組別NC組TUG1過表達組sh-TUG1組miR-144 mimic組TUG1過表達+miR-144 mimic組F 值P 值TNF-α 56.31±4.87 37.45±4.05 75.18±5.64 93.65±7.87 53.22±5.41 43.241 0.000 IL-1β 159.01±10.11 125.77±9.47 230.77±9.21 204.15±8.91 161.15±8.94 58.694 0.000 IL-6 85.61±6.54 49.05±4.25 110.62±8.64 142.05±10.28 83.41±8.62 56.927 0.000

2.5 lncRNA TUG1抑制狼瘡腎炎組小鼠腎小球系膜細胞Col Ⅳ、FN蛋白的表達且能被miR-144阻斷

NC 組、TUG1 過 表達組、sh-TUG1 組、miR-144 mimic 組、TUG1 過表達+miR-144 mimic 組的Col Ⅳ、FN 蛋白相對表達量比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。進一步兩兩比較，結(jié)果：與NC 組比較，TUG1 過表達組的Col Ⅳ、FN 蛋白相對表達量降低（P＜0.05），sh-TUG1 組和miR-144 mimic 組Col Ⅳ、FN 蛋白相對表達量升高（P＜0.05）；TUG1 過表達+miR-144 mimic 組Col Ⅳ、FN 蛋白相對表達量與NC組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表3和圖4。

圖4 各組腎小球系膜細胞Col Ⅳ與FN蛋白的表達

表3 各組Col Ⅳ與FN蛋白相對表達量的比較 （±s）

表3 各組Col Ⅳ與FN蛋白相對表達量的比較 （±s）

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2.6 lncRNA TUG1 抑制狼瘡腎炎組小鼠腎小球系膜細胞增殖、侵襲，促進細胞凋亡且能被miR-144 阻斷

各組不同時間點的腎小球系膜細胞增殖活力比較，采用重復測量設(shè)計的方差分析，結(jié)果：①不同時間點的腎小球系膜細胞增殖活力有差異（F=1 389.000，P=0.000）；②各組腎小球系膜細胞增殖活力有差異（F=148.300，P=0.000）；③各組的細胞增殖活力變化趨勢有差異（F=12.430，P=0.000）；進一步兩兩比較，與NC 組48 h 和72 h 比較，TUG1 過表達組48 h 和72 h 細胞增殖活力降低（q=4.687 和7.169，均P=0.000），sh-TUG1 組48 h 和72 h 細胞增殖活力增強（q=4.685 和8.823，均P=0.000），miR-144 mimic 組48 h 和72 h 細胞增殖活力增強（q=7.444 和12.130，均P= 0.000）（見表4）。各組腎小球系膜細胞侵襲數(shù)和細胞凋亡率比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；進一步兩兩比較，結(jié)果：與NC 組比較，TUG1 過表達組的細胞侵襲數(shù)減少（q=2.828，P=0.047），細胞凋亡率升高（q=13.450，P=0.000）；sh-TUG1 組細胞侵襲數(shù)增多（q=4.108，P=0.000），細胞凋亡率降低（q=2.781，P=0.000）；miR-144 mimic 組細胞侵襲數(shù)增多（q=4.768，P=0.000）、細胞凋亡率降低（q=3.252，P=0.006）；TUG1 過表達+miR-144 mimic 組的細胞侵襲數(shù)和細胞凋亡率與NC 組比較，差異無統(tǒng)計學意義（q=0.355 和1.318，P=0.682 和0.189）。見 表5 和圖5、6。

圖5 各組腎小球系膜細胞侵襲結(jié)果 （共聚焦顯微鏡×400）

表4 各組不同時間點的腎小球系膜細胞增殖活力比較（±s）

表4 各組不同時間點的腎小球系膜細胞增殖活力比較（±s）

組別NC組TUG1過表達組sh-TUG1組miR-144 mimic組TUG1過表達+miR-144 mimic組24 h 0.43±0.03 0.36±0.02 0.53±0.04 0.62±0.05 0.46±0.03 48 h 0.72±0.04 0.55±0.02 0.89±0.05 0.99±0.06 0.77±0.04 72 h 1.21±0.04 0.95±0.02 1.53±0.07 1.65±0.07 1.28±0.05

表5 各組腎小球系膜細胞侵襲數(shù)和細胞凋亡率比較 （±s）

表5 各組腎小球系膜細胞侵襲數(shù)和細胞凋亡率比較 （±s）

組別NC組TUG1過表達組sh-TUG1組miR-144 mimic組TUG1過表達+miR-144 mimic組F 值P 值細胞侵襲數(shù)/個204.23±19.14 162.35±17.08 285.11±29.32 298.15±32.07 211.33±20.26 16.803 0.000細胞凋亡率/%11.25±0.91 26.53±2.44 8.21±0.96 7.53±0.82 12.71±1.32 88.492 0.000

圖6 各組細胞凋亡實驗結(jié)果

3 討論

腎損傷并發(fā)癥仍被認為是繼感染位居第二的死亡原因，大約40%～70%的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者都會并發(fā)狼瘡腎炎，是系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者重要的死亡因素[12]。狼瘡腎炎主要病變特點為腎小球系膜細胞的過度增殖，系膜細胞的過度增殖可以釋放大量的炎癥因子，加劇炎癥和引起腎小球硬化[13]。

lncRNA 與人類疾病的發(fā)生、發(fā)展和防治都有著密切聯(lián)系[14]。TUG1 作為lncRNA 的一員，GU 等[15]的研究證實在慢性阻塞性肺疾病中上調(diào)TUG1可以調(diào)控細胞炎癥分子分泌；同樣CAO 等[16]證明在系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠腎組織中TUG1 表達降低；XU 等[17]也發(fā)現(xiàn)，在狼瘡腎炎中，TUG1 在抑制細胞損傷和誘發(fā)炎癥等方面起重要的調(diào)節(jié)作用。因此本研究關(guān)注TUG1 在狼瘡腎炎中的作用和具體調(diào)控機制并探究其下游調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。MicroRNA 是一種編碼長度約22 nt 的RNA，廣泛存在于真核細胞中，在許多生理和病理過程中，都發(fā)揮著重要的作用[18]。miR-144 以往被發(fā)現(xiàn)在IgA 腎病中表達增強并且可以在IgA 腎病的分子診斷中發(fā)揮作用[11]。而本研究進一步證實了miR-144 在狼瘡腎炎組小鼠腎組織中表達升高，表明miR-144 與狼瘡腎炎發(fā)病有很大關(guān)系。

腎小球系膜細胞是腎臟的主要功能細胞，腎小球系膜細胞炎癥因子大量分泌是狼瘡腎炎的重要病變表現(xiàn)，狼瘡腎炎發(fā)病時，TNF-α、IL-1β、IL-6 等炎癥因子分泌增強，進一步使腎組織其他細胞損傷，導致腎小球纖維化，而腎小球纖維化是腎臟由健康到損傷、最后到功能喪失的早期標志[19]。本研究通過ELISA 法檢測各組腎小球系膜細胞中TNF-α、IL-1β、IL-6 的水平，發(fā)現(xiàn)TUG1 過表達或抑制miR-144 表達都會使TNF-α、IL-1β、IL-6 的水平降低。FN 為一種高分子血漿糖蛋白，在腎臟中的主要功能是通過結(jié)合纖維蛋白、纖維蛋白原及膠原，使其他膠原沉積在腎小管和間質(zhì)。FN在腎損傷早期顯著增加，隨著疾病發(fā)展，后期呈現(xiàn)顯著升高趨勢，加劇腎臟纖維化病變，是腎臟纖維化病變的主要標志物之一[20]。Col Ⅳ是細胞外基質(zhì)的主要成分，構(gòu)成基膜并調(diào)控細胞黏附，可以作為檢測臟器纖維化的標志蛋白[21]。本研究發(fā)現(xiàn)纖維化因子標志蛋白FN 與Col Ⅳ的表達可以被TUG1 抑制且能被miR-144 逆轉(zhuǎn)。在健康狀態(tài)下，腎小球系膜細胞更新很緩慢，但在病理狀態(tài)下，系膜細胞增殖活躍，功能亢進，系膜細胞凋亡減少，過度增殖會導致腎小球纖維化，進一步導致腎小球硬化，影響腎臟功能[22-24]，本研究通過MTT、Transwell 法及流式細胞術(shù)對各組腎小球系膜細胞的增殖、侵襲及凋亡情況進行觀察，發(fā)現(xiàn)TUG1 過表達能夠抑制腎小球系膜細胞的增殖和侵襲，促進凋亡。

綜上所述，相對于正常健康小鼠，狼瘡腎炎小鼠腎小球系膜細胞中TUG1 表達低，miR-144 表達高，TUG1 能夠靶向調(diào)控miR-144 進而抑制腎小球系膜細胞炎癥因子水平及細胞增殖活性。TUG1和miR-144 為狼瘡腎炎的治療提供了新的靶點和依據(jù)，但需進一步研究證實更多的機制。