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      長鏈非編碼RNA DSCR8在胃癌中的表達及其與預(yù)后的關(guān)系

      2022-04-11 05:09:40曹強堅李欣欣黎小愛謝澳斯陳君填吳寶安
      關(guān)鍵詞:貨號試劑盒胃癌

      胃癌是除肝癌和肺癌外的第三大致命性癌癥,屬于胃部惡性腫瘤,病毒感染、飲酒史、性別、年齡等均可能是其發(fā)病的危險因素

      。因多數(shù)患者晚期才被確診,因此致使患者預(yù)后不佳現(xiàn)象嚴(yán)重,5年存活率僅約30%,而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤程度均是其危險致死因素

      。所以,尋找疾病和預(yù)后監(jiān)查標(biāo)志物對患者生命健康十分重要。已有研究表明,非編碼RNA(non-coding RNA,ncRNA)能夠通過調(diào)節(jié)基因表達來參與癌癥的發(fā)生和侵襲,而長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是其中的一部分,在腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡中具有重要作用

      。唐氏綜合征關(guān)鍵區(qū)域8(Down syndrome critical region 8,DSCR8)已被發(fā)現(xiàn)在黑色素瘤和子宮癌中表達失調(diào)

      。有研究報道稱,在卵巢癌中DSCR8表達增加,其可通過下調(diào)miR-98-5p表達來激活STAT3/HIF-1α途徑,以此促進卵巢癌的發(fā)生

      。信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)和微小RNA-98-5p(microRNA-98-5p,miR-98-5p)已被大量研究表明參與胃癌的增殖、侵襲及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

      。目前關(guān)于DSCR8在胃癌中的表達以及與患者預(yù)后的關(guān)系還未得到探究,因此本研究通過檢測lncRNA DSCR8、STAT3、miR-98-5p在胃癌患者胃癌組織中的表達情況,對DSCR8在胃癌中的作用機制與患者預(yù)后的關(guān)系進行探討,以期為胃癌的治療靶點提供新的研究方向。

      1 資料與方法

      選取2013年8月至2015年6月185例我院已確診收治的胃癌患者手術(shù)切除胃癌組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本,男90例,女95例;年齡32~79歲,其中<60歲102例,≥60歲83例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移96例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移89例;腫瘤低、高分化程度分別為75例、110例;TNM分期:Ⅰ~Ⅱ期70例,Ⅲ~Ⅳ期115例。

      其他藝術(shù)文化形式也是服裝面料再造設(shè)計的靈感,其中最明顯的技術(shù)繪畫藝術(shù)和建筑藝術(shù)。例如中國水墨畫,留白是中國水墨畫的特點,使人感受到空靈之美。正在服裝面料再造設(shè)計當(dāng)中利用水墨畫的表現(xiàn)手法,可以呈現(xiàn)出不同的魅力。服裝設(shè)計師借鑒各種文化藝術(shù)形式,并且在服裝面料再造設(shè)計當(dāng)中巧妙地利用,可以吸引消費者的注意。

      納入標(biāo)準(zhǔn):患者經(jīng)鏡檢、活檢等手段檢查確診,臨床資料完整;全部患者均進行手術(shù)切除治療,術(shù)前未進行其他輔助性治療;術(shù)前檢查未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重侵犯周圍器官;排除標(biāo)準(zhǔn):胃癌患者在近期進行過化療或手術(shù)等治療;未患其他免疫系統(tǒng)疾病;患者具有其他腫瘤病發(fā)史。本研究通過我院倫理委員會批準(zhǔn)(批號:LL-AF-20131018-02),經(jīng)患者和家屬知情并簽署同意書。

      實驗所用主要儀器:SIGMA希格瑪臺式高速離心機3K15(貨號:V118926)購自南京貝登醫(yī)療股份有限公司;Bio-Rad伯樂熒光定量PCR儀CFX Connect(貨號:CFX Connect)購自南京貝登醫(yī)療股份有限公司;BioTek全自動酶標(biāo)儀(貨號:26262060)購自北京安麥格貿(mào)易有限公司。

      實驗所用主要試劑:即用型熒光定量PCR試劑盒(貨號:XY-TE-0731)購自上海烜雅生物科技有限公司;QIAGEN反轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號:205311)購自上海科敏生物科技有限公司;TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、Biorab TaqMan miRNA定量PCR試劑盒(貨號:MT0006、MTTXXXXX-GIW)購自北京百奧萊博科技有限公司。

      為了提高模型的準(zhǔn)確度,Embedding 層使用的是經(jīng)過Word2vec在無標(biāo)簽數(shù)據(jù)上進行聚類訓(xùn)練后的詞向量模型。

      1.3.1 樣品采集及保存:在手術(shù)中獲取胃癌組織和癌旁組織樣本,取用生理鹽水清理組織樣本至-80 ℃冰箱待用。

      1.3.2 實時熒光定量PCR檢測各樣本中DSCR8、STAT3、miR-98-5p的表達:用液氮將組織樣本在研缽中進行研磨,加入Trizol或RNAiso for small RNA提取總mRNA及總miRNA后以此為模板,使用mRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒及TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA,再以此為模板,使用qRT-PCR試劑盒及Biorab TaqMan miRNA定量PCR試劑盒分別檢測STAT3、DSCR8、miR-98-5p在各樣本中的表達水平。以U6為內(nèi)參對miR-98-5p進行標(biāo)準(zhǔn)化,以GAPDH為內(nèi)參對DSCR8及STAT3進行標(biāo)準(zhǔn)化,使用2

      分析二者表達水平。用軟件Oligo 7和Primer 3.0設(shè)計引物(見表1),送生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

      經(jīng)過5年隨訪后,185例胃癌患者55例生存、130例死亡,總生存率為29.73%。DSCR8高表達組和低表達組生存率分別為19.35%、40.22%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Log-rank值為11.952,

      =0.001)(見圖1D)。

      將胃癌患者以DSCR8表達水平平均數(shù)1.38為標(biāo)準(zhǔn),分為高、低表達組,≥1.38為高表達組(

      =93),<1

      38為低表達組(

      =92)。由表2可知,胃癌組織中DSCR8的表達水平在性別、年齡、分化程度間比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(

      >0.05),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小和TNM分期中差異有統(tǒng)計學(xué)意義(

      <0.05)。

      與癌旁組織相比,胃癌組織中DSCR8的表達水平顯著增加(0.91±0.24

      1.38±0.43),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(

      =12

      982,

      =0.000)。

      2 結(jié)果

      Sheep hurry toward winter-pasture, it will heavily snow in the winter.

      對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤大小、DSCR8表達進行單因素Cox生存回歸分析,發(fā)現(xiàn)以上4個因素均對胃癌患者預(yù)后生存有影響(

      <0.05)。多因素分析發(fā)現(xiàn),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤大小、DSCR8表達均是影響胃癌患者預(yù)后生存的獨立危險因素(

      <0.05)(見表4)。

      在胃癌組織中,DSCR8與STAT3呈顯著正相關(guān)(

      =0

      484,

      =0.000),而與miR-98-5p呈顯著負(fù)相關(guān)(

      =-0

      487,

      =0.000)(見圖1B~1C)。

      中國的茶葉在國際茶葉銷售市場上的認(rèn)可度普遍偏低,西方發(fā)達國家對我國出口的茶葉標(biāo)準(zhǔn)尤為嚴(yán)苛。江西出口茶葉缺乏自有知名品牌,這不僅影響出口貿(mào)易的收益,也不利于出口茶葉的國際競爭力的提高,更不利于對外貿(mào)易的持續(xù)發(fā)展。

      對出院患者進行為期5年的隨訪,截止時間為死亡時間或截至2020年6月,以電話或復(fù)查形式記錄患者預(yù)后情況。

      聲發(fā)射能量是指事件信號檢波包絡(luò)線下的面積,它可以反映事件的相對能量和強度。將實驗中兩類傳感器采集的信號繪制成能量-時間-軸向力關(guān)系曲線,對比兩種傳感器的特點。通過對所有試件的實驗結(jié)果進行數(shù)據(jù)分析,每組試件的數(shù)據(jù)呈現(xiàn)出相同的規(guī)律,限于篇幅本文只選取了部分試樣的實驗研究結(jié)果作為代表。

      與癌旁組織相比,胃癌組織中STAT3的表達水平顯著增加,而miR-98-5p的表達水平則顯著降低(

      <0.05);二者在胃癌組織中呈顯著負(fù)相關(guān)(

      =-0

      477,

      =0.000)(見表3、圖1A)。

      3 討論

      胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的一種癌癥,具有高發(fā)病、高死亡、預(yù)后差的特點,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生命健康,因此,有必要繼續(xù)為尋找其腫瘤診斷標(biāo)志物、治療靶點以及研究其發(fā)生機制而不懈努力

      。盡管隨著醫(yī)療手段的不斷完善和科技的進步,患者治愈率有所增加,但其5年生存率仍不容樂觀,而且因患者多為晚期確診,胃癌患者常表現(xiàn)為預(yù)后不良,因此,找到胃癌的診斷標(biāo)志物以及關(guān)注患者預(yù)后至關(guān)重要

      。本研究通過檢測lncRNA DSCR8、STAT3、miR-98-5p在胃癌患者組織中的表達,對DSCR8在疾病中的作用機制及其與預(yù)后的相關(guān)性進行探討,以期為胃癌的治療靶點和預(yù)后檢測等相關(guān)研究提供新的依據(jù)。

      在美國的體制下,國家立法機關(guān)、行政機關(guān)以及司法機關(guān)等公共機構(gòu)有其各自的能力范圍。在管理人工智能方面,沒有哪一個機構(gòu)具有壟斷地位,需要不同機構(gòu)發(fā)揮各自職能,相互協(xié)調(diào)配合,以取得更好效果[24] 。

      研究已證實,lncRNA在癌癥的診斷和治療中起重要作用,能夠參與轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平的基因調(diào)節(jié)

      。有報道稱,lncRNA在參與調(diào)節(jié)miRNA的表達過程中起到競爭性內(nèi)源性核糖核酸(ceRNA)的作用,而ceRNA模式已被發(fā)現(xiàn)參與調(diào)節(jié)各種癌癥的發(fā)生發(fā)展

      。

      lncRNA DSCR8已被發(fā)現(xiàn)在肝癌細(xì)胞系中過度表達,其通過DSCR8/miR-485-5p/FZD7軸激活Wnt/β-catenin信號通路以此促進肝癌細(xì)胞的增殖和細(xì)胞周期,而抑制DSCR8表達則具有相反作用

      。研究發(fā)現(xiàn),DSCR8在卵巢癌中表達顯著增加,可通過miR-3192-5p/YY1軸促進癌癥的進展,而DSCR8表達沉默則能抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、遷移且促進細(xì)胞凋亡

      。Dong等

      研究報道稱,高表達的DSCR8在卵巢癌中可下調(diào)miR-98-5p表達,以此來激活STAT3/HIF-1α途徑從而促進卵巢癌的發(fā)生,調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和凋亡。miR-98-5p已被發(fā)現(xiàn)其高表達可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,還能促進其凋亡,其表達下調(diào)可緩解癌癥進展。該研究還發(fā)現(xiàn),miR-98-5p在不同胃癌細(xì)胞系中表達水平均顯著降低,上調(diào)miR-98-5p表達可抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化從而抑制胃癌細(xì)胞的侵襲

      。STAT3激活可促進癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生并抑制細(xì)胞分化,還有研究發(fā)現(xiàn),STAT3在胃癌組織中轉(zhuǎn)錄及翻譯水平顯著高于正常組織

      。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),與癌旁組織相比,胃癌組織中DSCR8、STAT3的表達水平顯著增加,而miR-98-5p的表達水平則顯著降低;STAT3與miR-98-5p的表達水平呈顯著負(fù)相關(guān);DSCR8與STAT3呈顯著正相關(guān),與miR-98-5p呈顯著負(fù)相關(guān)。該結(jié)果表明DSCR8可能通過調(diào)節(jié)STAT3與miR-98-5p的表達參與胃癌的發(fā)展。

      有研究表明,DSCR8與肝癌患者的腫瘤大小、TNM分期等臨床病理參數(shù)及5年預(yù)后生存情況密切相關(guān)

      。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),DSCR8表達與胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小和TNM分期有關(guān)。與DSCR8表達組相比,DSCR8低表達組預(yù)后生存率較高。且多因素分析發(fā)現(xiàn),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤大小、DSCR8表達均是影響預(yù)后生存的獨立危險因素。以上結(jié)果表明DSCR8可作為胃癌患者預(yù)后的評判指標(biāo),預(yù)測患者預(yù)后情況。

      綜上所述,DSCR8在胃癌組織中呈高表達,且與胃癌患者的臨床病理特征及預(yù)后密切相關(guān),提示高表達的DSCR8可能通過抑制miR-98-5p表達以及促進STAT3表達參與到胃癌的發(fā)生過程中。本研究為胃癌發(fā)生機制提供了新的依據(jù),對胃癌的靶向檢測、治療及預(yù)后具有重要參考價值。

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