趙穎 李文 陳宇

[摘要]目的綜合多項(xiàng)指標(biāo)評價活血散組方藥味黃柏質(zhì)量，全面提升活血散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法綜合黃柏的薄層鑒別結(jié)果及含量測定結(jié)果，評價黃柏的質(zhì)量;運(yùn)用指紋圖譜技術(shù)評價多批次制劑質(zhì)量、批間穩(wěn)定性，全過程控制活血散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果薄層斑點(diǎn)顯色清晰前五是S1、S2、S4、S12、S14;巴馬汀含量前五是S13、S1、S8、S14、S4;小檗堿含量前五是S3、S15、S12、S7、S10?；钛⒌闹讣y圖譜及含量測定方法各項(xiàng)方法學(xué)驗(yàn)證良好，平均相似度為0.901，相似度良好。結(jié)論黃柏質(zhì)量研究為活血散制劑的質(zhì)量控制提供了參考，建立了活血散HPLC指紋圖譜。

[關(guān)鍵詞]活血散;黃柏;小檗堿;巴馬汀;指紋圖譜技術(shù)

[中圖分類號]R286.0??? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A??? [文章編號]2095-0616（2022）05-0078-04

Study on the improvement of quality standard of hospital preparation of blood-quickening powder

ZHAO Ying1??? LI Wen2??? CHEN Yu3

1. Department of Pharmacy，Nanjing Hospital of Chinese Medicine，Jiangsu，Nanjing 210022，China;2. Department of Education，Nanjing Hospital of Chinese Medicine，Jiangsu，Nanjing 210022，China;3. Nanjing University of Chinese Medicine，Jiangsu，Nanjing 210046，China

[Abstract] Objective To evaluate the quality of medicinal ingredient of phellodendron chinense in prescription of blood-quickening powder by combining several indexes，so as to comprehensively improve the quality standard of the blood-quickening powder. Methods The quality of the medicinal ingredient of phellodendron chinense was evaluated by combining the results of thin-layer identification and content determination of phellodendron chinense. In addition，the fingerprint spectra technology was used to evaluate the batch-to-batch stability of the quality of multiple batches of the preparation and to control the quality standard of the blood-quickening powder in the whole process. Results The top five thin-layer spots with clear color development were S1，S2，S4，S12 and S14. The top five with palmatine content in order were S13，S1，S8，S14 and S4，and the top five with berberine content in order were S3，S15，S12，S7 and S10. The fingerprint spectra and content determination methods of blood-quickening powder were well-validated in all methods，with a good average similarity of 0.901. Conclusion The study of the quality of phellodendron chinense provides a reference for the quality control of the preparation of blood-quickening powder，and helps to establish high- performance liquid chromatography （HPLC）fingerprint spectra of blood-quickening powder.

[Key words] Blood-quickening powder;Phellodendron chinense;Berberine;Palmatine;Fingerprint spectra technology

醫(yī)院的制劑由于具有安全、有效等優(yōu)勢，因此在臨床治療中起到很大的作用。隨著我國經(jīng)濟(jì)社會的進(jìn)步、科技的發(fā)展，人民群眾對于藥品的使用要求也愈加嚴(yán)格。部分醫(yī)院的制劑還存在著產(chǎn)品質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)水平不高等問題，制約了醫(yī)院制劑的發(fā)展。本研究以醫(yī)院制劑活血散為例，通過系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)研究，確定組方藥味產(chǎn)地，全面提升醫(yī)院制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有一定的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益[1-11]?；钛⒂牲S柏、半枝蓮、土鱉蟲、地膚子等7味中藥組成，功效為活血化瘀、消腫止痛。用于骨折、骨裂、軟組織挫傷等跌打損傷諸癥。本研究對活血散品質(zhì)提升開展研究。

1??? 材料與儀器

1.1??? 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀（安捷倫公司）;KQ- 500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;sp-30e型全自動數(shù)控薄層液體光學(xué)液相色譜圖像測量點(diǎn)樣儀（北京上?？普苌萍加邢薰荆?KQ-300DE型數(shù)控超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司），MS205DU十萬分之一電子天平（梅特勒-托利多集團(tuán)）。

1.2??? 試藥

小巢堿（購自中國藥品質(zhì)量鑒定監(jiān)督研究院，批號：110713-201613）、巴馬汀（購自中國科學(xué)院附屬成都生物研究所，批號：must-20022610）。乙腈、甲醇為色譜純（TEDIA公司），石油醚、乙酸乙酯、乙醇、磷酸等為分析純，水為純凈水。

1.3??? 藥材

黃柏[12]藥材來源見表1?；钛⑺幉膩碓匆姳?。

2??? 方法與結(jié)果

2.1??? 原藥材黃柏實(shí)驗(yàn)研究

2.1.1??? 鑒別??? 取15批黃柏樣品的粉末各0.2 g，加入乙酸乙酯20 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至l ml，作為供試品溶液。將15批供試品溶液，點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，展開劑石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯為1：1，展開，取出，晾干，顯色，顯色劑為硫酸乙醇溶液（5.7 ml硫酸和94.3 ml 乙醇配制溶液），105℃加熱。15批黃柏薄層色譜見圖1，可以看出S1、S2、S4、S12、S14顯現(xiàn)斑點(diǎn)顏色最深;S3、S5、S6、S7、S8、S9、S10、S11、S13、S15 斑點(diǎn)辨識度低。

2.1.2??? 含量測定

2.1.2.1??? 色譜條件[13-14]??? 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙睛為流動相A，以0.1%磷酸溶液（加入磷酸二氫鈉使其達(dá)到0.02 mol/L的濃度）為流動相B，按表3進(jìn)行梯度洗脫;檢測波長為345 nm 理論板數(shù)按鹽酸小巢堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

2.1.2.2??? 對照品溶液的制備??? 精密稱取適量巴馬汀、小巢堿，用甲醇定容，巴馬汀、小巢堿濃度分別為0.112、0.067 mg/ml，作為對照品儲備溶液。

2.1.2.3??? 供試品溶液的制備??? 取15批黃柏粉末約0.2g，加入60%乙醇40～50 ml容量瓶中，超聲45 min，加60%乙醇至刻度，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.2.4??? 方法學(xué)考察??? ①線性關(guān)系考察：取巴馬汀、小巢堿對照品溶液，進(jìn)樣體積分別為1、2、5、10、15.20 μl，以濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），得回歸方程，見表4。

②精密度試驗(yàn)：分別取巴馬汀、小巢堿對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果表明，巴馬汀和小巢堿的峰面積RSD分別為2.32%和1.25% （n=5），具有較好的準(zhǔn)確性。

③重復(fù)性試驗(yàn)：取供試品溶液S1，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果表明，巴馬汀和小巢堿峰面積的RSD分別為1.12%和1.75%（n=5），重復(fù)性好。

④穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液S1，分別在0、2、4、8、16、24 h進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果表明，巴馬汀和小巢堿峰面積的RSD分別為1.84%和1.62%（n=6）表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性好。

⑤不同批次黃柏的含量測定：取15批次黃柏樣品，分別按上述供試品溶液得制備方法進(jìn)行制備，進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見表5。

根據(jù)含量數(shù)據(jù)得，S13、S1、S8、S14、S4以上5味樣品巴馬汀含量最高，S3、S15、S12、S7、S10以上5味樣品小巢堿含量最高。

2.2??? 活血散實(shí)驗(yàn)研究

2.2.1??? 鑒別??? 取15批活血散樣品粉末各1g，加入乙酸乙酯50 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至1 ml，作為供試品溶液。分別取上述15批次供試品溶液10 μl，點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，展開劑石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯為1：1，展開，取出，晾干，噴硫酸乙醇溶液（5.7 ml硫酸和94.3 ml 乙醇配制溶液），105℃加熱至顯色，結(jié)果見圖2，可以看出H4、H5、H10、H12、H13顯現(xiàn)斑點(diǎn)顏色最深;H1、H6、H7、H15顯現(xiàn)斑點(diǎn)但顏色較淺;H2、H3、H8、H9、H11、H14顯現(xiàn)斑點(diǎn)顏色適中。

2.2.2??? 活血散的含量測定

2.2.2.1??? 色譜條件??? 同2.1.2.1

2.2.2.2??? 對照品溶液的制備??? 精密稱取適量小巢堿，用甲醇定容，制成0.067 mg/ml小巢堿溶液，作為對照品儲備溶液。

2.2.2.3??? 供試品溶液的制備??? 取15批活血散粉末約0.28，加入60%乙醇40～50 ml容量瓶中，超聲45 min，加60%乙醇至刻度，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2.4??? 方法學(xué)考察??? ①精密度試驗(yàn)：取小巢堿對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果表明，小巢堿的峰面積RSD為2.01%（n=5），具有較好的準(zhǔn)確性。

②重復(fù)性試驗(yàn)：取供試品溶液H1，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果表明，小巢堿峰面積的RSD分別為1.52%（n=5），重復(fù)性好。

③穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液H1，分別在0、2、4、8、16、24 h進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果表明，小巢堿峰面積的RSD分別為1.98%（n=6），表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性好。

2.2.3??? 活血散的指紋圖譜建立

2.2.3.1??? 指紋圖譜的建立[13-14]??? 將之前制備好的15批活血散的供試品溶液樣品制成高效液相色譜圖，格式為AIA，然后導(dǎo)入軟件“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2012版”進(jìn)行指紋圖譜的制作，采用H1活血散色譜圖作為對照譜圖;時間窗寬度為0.10，15批樣品的指紋圖譜，見圖3～4。將指紋測定結(jié)束后所有捕獲15批指紋樣本的分析數(shù)據(jù)分別綜合采用了隨機(jī)指紋分析圖譜相似度綜合評價分析系統(tǒng)和隨機(jī)生成的指紋對照表和指紋分析圖譜分別對其進(jìn)行相似度分析評價，結(jié)果情況詳見參數(shù)表6。

2.2.3.2??? 色譜峰的指認(rèn)[15]??? 通過高效液相色譜儀測定活血散樣品和對照品的含量，記錄樣品的色譜時間圖，分析測定各色譜峰的平均值。指定了1個點(diǎn)的色譜峰，3號為小檗堿，見圖5。

3??? 討論

黃柏流動相的選擇：曾考察乙睛：磷酸溶液（1：1）（每100毫升加十二烷基磺酸鈉0.l g）為流動相的效果，由于流動相中含有離子對，配置過程中含有不溶性沉淀，極有可能損傷色譜柱，故最終未選擇該流動相?；钛⒌谋予b別：制備供試品溶液時，活血散取樣量偏少導(dǎo)致最終點(diǎn)樣時濃度偏低，得到的色譜圖不清晰。稀碘化鉍鉀顯色劑放置時間過長，容易導(dǎo)致顯色效果差。加熱時間太短，斑點(diǎn)顯色不清晰。

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