藿夏口服液對(duì)免疫功能低下小鼠的影響研究

謝旭華，謝仕源，楊斌

（廣西醫(yī)科大學(xué)，廣西南寧 530021）

藿夏口服液來(lái)源于民間驗(yàn)方，主要成分為淫羊藿、夏枯草等中藥的提取物。壯醫(yī)主要用于治療痰凝瘀血阻滯之癌癥[1]。夏枯草味辛，性寒，常用于軟堅(jiān)散結(jié)、消腫、抗腫瘤等；淫羊藿味甘，性溫和，活性成分效果拔群，尤其是淫羊藿苷成分應(yīng)用于抗腫瘤的研究獲得突破性進(jìn)展。本課題組前期對(duì)藿夏口服液進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其具有提高免疫低下小鼠免疫力的作用[2]。本研究擬通過(guò)注射環(huán)磷酰胺建立免疫抑制模型，研究藿夏口服液對(duì)免疫抑制小鼠免疫功能的影響，為后續(xù)的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，健康狀況良好，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK桂2020-0004。

1.2 試劑與儀器

藿夏口服液，批號(hào)：200602，某生物技術(shù)有限公司提供；鹽酸左旋咪唑片，批號(hào)：200202，仁和堂藥業(yè)有限公司；注射用環(huán)磷酰胺，批號(hào)：9E310A，德國(guó)Baxter Oncology GmbH；10%綿羊紅細(xì)胞，批號(hào)：20210128，北京百奧萊博科技有限公司；ELISA試劑盒，江蘇晶美生物科技有限公司。

ACB-4A1細(xì)胞培養(yǎng)超凈工作臺(tái)，新加坡Esco科技有限公司；BioTek Synergy H1酶標(biāo)儀，美國(guó)Molecular Devices公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 建模與給藥

48只健康SPF級(jí)昆明種小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2天，隨機(jī)分成空白組、模型組、左旋咪唑組（劑量為25 mg/kg）、藿夏口服液高劑量組（生藥量濃度3.6 g/kg）、中劑量組（生藥量濃度1.8 g/kg）、低劑量組（生藥量濃度0.9 g/kg）。在實(shí)驗(yàn)第1、4、7天腹腔注射給藥，空白組腹腔注射10 mL/kg生理鹽水，其余每組以50 mg/kg環(huán)磷酰胺腹腔注射給藥，建立環(huán)磷酰胺致免疫功能低下小鼠模型；之后除空白組外，各組均腹腔注射環(huán)磷酰胺（30 mg/kg)，每周一次，維持免疫抑制模型。實(shí)驗(yàn)第8天開(kāi)始，每天固定時(shí)間灌胃給藥1次，連續(xù)給藥14天，空白組和模型組灌胃0.2 mL生理鹽水，其余各組按劑量體積灌胃給藥。

1.3.2 稱重法測(cè)定小鼠免疫器官指數(shù)

末次給藥1 h后采集小鼠體重；頸椎脫臼法處死小鼠，收集肝臟、脾臟和胸腺并分別準(zhǔn)確稱重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。計(jì)算公式如（1）所示：

1.3.3 ELISA法測(cè)定免疫蛋白和細(xì)胞因子水平

各實(shí)驗(yàn)組眼眶取血，低溫高速離心取血漿。根據(jù)相應(yīng)的ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行小鼠血漿IgA、IgG、IgM和細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ含量測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果均以±s表示。多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠免疫器官指數(shù)測(cè)定結(jié)果

免疫功能低下是導(dǎo)致疾病發(fā)生的關(guān)鍵因素之一，免疫增強(qiáng)劑可明顯促進(jìn)免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育，保障免疫功能的正常發(fā)揮[3]。脾臟、胸腺、肝臟指數(shù)可以在一定程度上反映試劑對(duì)免疫低下小鼠的影響，因此常用臟器指數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱[4-5]。

如圖1所示，與空白組比較，各組肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)均顯著升高；與模型組對(duì)比，左旋咪唑組、藿夏口服液低劑量組、中劑量組肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)均有所降低（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，藿夏口服液低、中劑量對(duì)免疫低下小鼠的免疫功能有一定的改進(jìn)作用。

圖1 藿夏口服液對(duì)免疫低下小鼠免疫器官指數(shù)的影響

2.2 小鼠血漿免疫球蛋白及細(xì)胞因子水平測(cè)定

淋巴細(xì)胞反映機(jī)體特異性免疫功能，淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生和分泌的免疫球蛋白及血清細(xì)胞因子，能維持細(xì)胞功能的正常作用，并對(duì)細(xì)胞間的互相影響有重要意義[6]。細(xì)胞因子也是免疫應(yīng)答的重要參與者，IL-2不僅能夠激活淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞，同時(shí)能調(diào)節(jié)細(xì)胞毒性。IL-6是活化的T細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的淋巴因子，可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞的增殖、分化，使B細(xì)胞前體成為產(chǎn)生抗體的細(xì)胞，增強(qiáng)NK細(xì)胞的裂解功能，對(duì)機(jī)體免疫有重要調(diào)節(jié)作用。IFN-γ具有較強(qiáng)的免疫調(diào)控作用，可促進(jìn)NK細(xì)胞活性，介導(dǎo)細(xì)胞免疫的效應(yīng)過(guò)程。

免疫球蛋白是一種蛋白質(zhì)，具有抗體活性，有IgA、IgD、IgE、IgG和IgM五大類(lèi)（按化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗原性差異分類(lèi)）。IgA可介導(dǎo)吞噬作用，是抵抗微生物和抗原進(jìn)入體內(nèi)的第一道防線，同時(shí)也是機(jī)體黏膜免疫防御系統(tǒng)的重要成分。IgG是血清中最豐富的抗體，占抗體總量的70%～75%，是機(jī)體抗感染免疫的主力。IgG可中和細(xì)菌毒素的毒性，使有害物質(zhì)解毒。IgM是體內(nèi)最大的抗體，也稱為巨球蛋白，具有殺菌、激活補(bǔ)體、免疫調(diào)理等生物免疫活性，在機(jī)體抗感染免疫早期發(fā)揮先鋒作用。

如圖2和圖3所示，與空白組比較，模型組IgA、IgG、IgM、IL-2、IL-6濃度顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）；與模型組相比，左旋咪唑組、藿夏口服液低劑量組、中劑量組小鼠IgG、IgM含量水平顯著提高（P＜0.01），藿夏口服液高劑量組IgA、IL-2、IL-6、IFN-γ含量顯著提高（P＜0.05或P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，藿夏口服液對(duì)免疫低下小鼠血漿免疫球蛋白及細(xì)胞因子水平具有明顯的改善作用。

圖2 藿夏口服液對(duì)免疫功能低下小鼠免疫蛋白含量的影響（±s，n=8）

圖3 藿夏口服液對(duì)免疫功能低下小鼠細(xì)胞因子含量的影響（±s，n=8）

3 結(jié)論

綜上，藿夏口服液能夠在一定程度上增強(qiáng)免疫低下小鼠的細(xì)胞免疫和體液免疫功能，其機(jī)制可能與藿夏口服液提高小鼠血清免疫球蛋白含量水平有關(guān)。