張葉茹

摘要：牛副結(jié)核病在全球流行廣泛，嚴(yán)重影響著畜牧業(yè)的發(fā)展和人類的健康。本文通過對(duì)幾種牛副結(jié)核病診斷方法的研究，篩選出在生產(chǎn)中容易得到推廣與應(yīng)用的幾種方法，從而為控制和消滅副結(jié)核病發(fā)揮作用。應(yīng)用染色法檢測方法來檢測牛血清中的副結(jié)核分枝桿菌抗體具有快速、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，其結(jié)果與臨床檢查結(jié)果相一致。

關(guān)鍵詞：牛副結(jié)核；病原；檢測法

牛副結(jié)核?。≒TB）又名約翰氏病是由鳥分枝桿菌亞種肺結(jié)核（MAP）引起的慢性、進(jìn)行性、傳染性肉芽腫性腸炎，影響反芻動(dòng)物，特別是奶牛和多種家畜。臨床疾病和無癥狀動(dòng)物是主要感染源。傳染源是初級(jí)的，通過受感染動(dòng)物的初乳、乳汁含有糞便的飲用水、胎盤和精液垂直傳播。動(dòng)物的高密度、較差的衛(wèi)生條件和土壤質(zhì)量（酸性和潮濕土壤）有利于感染的傳播。牛副結(jié)核病是一種普遍存在的傳染病，在不利的環(huán)境因素具有較高的傳播力，構(gòu)成了疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)。

用于PTB鑒定的細(xì)菌學(xué)方法是染色法，它是基于分枝桿菌經(jīng)品紅染色后耐酸性酒精脫色的能力。結(jié)果是定性的。該方法具有簡單、快速、廉價(jià)的優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)糞便、初乳和牛奶樣品的靈敏度和特異性較低。在嚴(yán)重腹瀉的情況下，MAP濃度相對(duì)于糞便量降低，從而增加假陰性結(jié)果的可能性。類似的情況也發(fā)生在患有亞臨床PTB的動(dòng)物身上。在涂片或組織切片中糞便排泄率較低，尤其是在回盲瓣或有明顯病變的腸淋巴結(jié)上，病變內(nèi)巨噬細(xì)胞內(nèi)10～20個(gè)顏色鮮艷的桿菌群的可視化高度提示PTB，易于檢測。

通過細(xì)菌培養(yǎng)鑒定活菌圖譜被認(rèn)為是參考診斷試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)。糞便、初乳、牛奶或腸粘膜碎屑可用作樣本。為了降低成本，糞便培養(yǎng)可分為3～5個(gè)單獨(dú)的樣本進(jìn)行，而不損失活性。在奶牛場中，也可以從牛奶收集系統(tǒng)的過濾器、牛奶罐和/或同一動(dòng)物的糞便處收集樣品。由于受感染的?？梢耘判?0～12公斤的糞便并污染環(huán)境，因此還建議從糞便和/或排泄區(qū)培育牧場土壤樣品。由于副結(jié)核桿菌和其他細(xì)菌的生長速度不同，在接種到培養(yǎng)基之前對(duì)樣品進(jìn)行凈化，有可能殺死快速生長的競爭對(duì)手。有不同的方法可以做到這一點(diǎn)，但最流行的是十二烷基氯化吡啶。這種化學(xué)去污需要一天的工作，并且可以在的有效減少M(fèi)AP的數(shù)量。據(jù)估計(jì)，經(jīng)過去污程序后，細(xì)菌培養(yǎng)中的預(yù)期污染率為7%，組織培養(yǎng)中的預(yù)期污染率為0.2%（96）。糞便樣本的污染部分與取樣時(shí)動(dòng)物的喂養(yǎng)方式有關(guān)。

由于在糞便和/或牛奶中排泄的酸性磷酸酶的數(shù)量變異性，直接影響診斷試驗(yàn)的敏感性，因此樣品中微生物的濃度是分離方法的一個(gè)重要變量。一種細(xì)菌富集技術(shù)沉淀過濾法可以被用于檢測。沉淀過濾法技術(shù)部分提高了MAP的檢測，但增加了污染物的數(shù)量。在牛奶樣品中，離心可以得到3種不同濃度的MAP。在2500克離心15分鐘后，沉積物中MAP的濃度最高（69.4%），17.6%殘留在乳清中，13%殘留在脂肪中。聲稱MAP對(duì)牛奶的不同部分具有不同的親和力，這取決于它們的加工過程（27）。因此，在離心前經(jīng)過冷熱處理的牛奶中，最高濃度的MAP出現(xiàn)在沉積物部分，而在未經(jīng)處理的牛奶中，細(xì)菌主要出現(xiàn)在脂肪部分。在較低范圍內(nèi)的沉積物部分，乳清分離過濾是基于MAP形成比其他細(xì)菌和真菌更大的團(tuán)塊的趨勢，這允許良好的濃度差。