◎ 崔 誠，史文青

（1.陜西普恩檢測技術(shù)有限公司，陜西 西安 710000；2.陜西省農(nóng)村科技開發(fā)中心，陜西 西安 710000）

我國是農(nóng)藥使用大國，而有機(jī)磷農(nóng)藥是農(nóng)藥中的主要類別之一，同時也是我國使用量較大的一類殺蟲劑。毒蟲畏是一種有機(jī)磷農(nóng)藥，又名殺螟威，廣泛應(yīng)用于水果、蔬菜以及谷物中。毒蟲畏常以(Z)-和(E)-兩種異構(gòu)體的混合物形式存在，低劑量的毒蟲畏通過食物鏈進(jìn)入人體會引起慢性中毒，對人體肝、腎、肺等重要器官造成損傷。近年來，由蔬菜、水果等農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留引發(fā)的食物中毒事件屢有發(fā)生，同時頻繁使用農(nóng)藥導(dǎo)致害蟲產(chǎn)生了抗藥性，也不可避免地造成土壤污染[1-2]。因此，加強(qiáng)對農(nóng)藥殘留檢測方法的研究具有非常重要的意義。

目前，農(nóng)藥殘留的檢測方法主要有氣相色譜法和液相色譜法，且主要是對水果、蔬菜和谷物中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測[3-6]。陳其勇等[7]采用QuEChERSUPLC-MS/MS法測定食品中毒蟲畏(Z)-和(E)-殘留，回收率在72.7%～105.2%。而關(guān)于茶葉中毒蟲畏檢測方法的報道較少，本文對茶葉中毒蟲畏殘留進(jìn)行提取、凈化和濃縮，采用氣相色譜方法進(jìn)行定量分析，并用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行定性確認(rèn)。該方法的檢測靈敏度、定量和定性的準(zhǔn)確性都能滿足食品安全管理的 要求。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

氯化鈉：分析純；丙酮：色譜純；二氯甲烷：色譜 純；乙酸乙酯：色譜純；石墨化炭黑固相萃取柱： 500 mg/6 mL；毒蟲畏標(biāo)準(zhǔn)品：1 000 μg·mL-1，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司。

PerkinElmer Clarus 580型氣相色譜儀，配有FPD檢測器；PerkinElmer Clarus 580-CLARUS SQ8S型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；凝膠色譜：凈化柱700 mm× 25 mm，Bio Beads S-X3；氮 吹 儀：MTN-2800D； 渦旋儀：MS 3-digitel；低速離心機(jī)：TDL-40B。

1.2 樣品測定方法

（1）提取。稱樣5 g，加5 mL水混勻后放置30 min， 加15 mL丙酮、渦旋振搖5 min。以4 000 r·min-1離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至濃縮瓶中；在殘渣中繼續(xù)加 15 mL丙酮重復(fù)提取一次，合并上清液，于40 ℃濃縮至約5 mL，待凈化。

（2）液-液分配凈化。將提取濃縮液倒入50 mL離心管中，并用2×5 mL二氯甲烷分2次洗滌濃縮后合并到50 mL離心管中，加入10 mL氯化鈉溶液和 10 mL二氯甲烷，渦旋振搖5 min。以4 000 r·min-1離心5 min，收集二氯甲烷層，經(jīng)無水硫酸鈉柱洗脫后，收集于150 mL濃縮瓶中。水相再用2×10 mL二氯甲烷重復(fù)提取2次，合并二氯甲烷相。于40 ℃濃縮至近干，加入10 mL環(huán)己烷-乙酸乙酯（1+1，體積比）渦旋溶解殘渣。

（3）凝膠色譜凈化。取5 mL上述待凈化液過凝膠色譜，合并餾分收集器中的收集液于150 mL濃縮瓶中，于40 ℃濃縮至近干，加入2 mL乙酸乙酯溶解，待凈化。

（4）固相萃取凈化。用6 mL乙酸乙酯預(yù)淋洗石墨化炭黑固相萃取柱，將上述樣液傾入柱中，用2 mL乙酸乙酯洗活性炭柱，用6 mL乙酸乙酯洗脫。收集洗脫液，于40 ℃濃縮至近干，加入1 mL丙酮以溶解殘渣供氣相色譜定量測定，氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀做定性確認(rèn)。

樣品中毒蟲畏的含量計算如下：

式中：ω為樣品中毒蟲畏的含量，mg·kg-1；c為從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的樣品中毒蟲畏的濃度，μg·mL-1；v為樣品的定容體積，mL；f為稀釋倍數(shù)；m為樣品的質(zhì)量，g。

1.3 儀器條件

1.3.1 氣相色譜條件

色譜柱：非極性Elite-1701色譜柱（30 m×250 μm， 0.2 μm）；進(jìn)樣口溫度：230 ℃；流速：1.2 mL·min-1；不分流進(jìn)樣；檢測器溫度：280 ℃；升溫程序：80 ℃保持1 min，以15 ℃·min-1升至180 ℃，10 ℃·min-1升至260 ℃，保持5 min，再以10 ℃·min-1升到280 ℃，保持1 min。

1.3.2 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀條件

（1）色譜條件。色譜柱：非極性DB-5色譜柱 （30 m×250 μm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；流速：1.2 mL·min-1；不分流進(jìn)樣；升溫程序：50 ℃保持 1 min，以15 ℃·min-1升至170 ℃，10 ℃·min-1升至 280 ℃，保持3 min，再以10 ℃·min-1升到280 ℃，保持1 min。

（2）質(zhì)譜條件。電離方式：EI源；載氣：氦氣；離子源溫度：250 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；流速 1.2 mL·min-1；掃描模式：SIM；定量離子：323m/z；定性離子：267m/z、269m/z。

1.3.3 凝膠色譜條件

凈化柱：700 mm×25 mm，Bio Beads S-X3，或相當(dāng)；流動性：環(huán)己烷-乙酸乙酯（1+1體積比）；流速：5.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：5.0 mL；預(yù)淋洗時間： 0～20 min；收集時間：20～40 min。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制和工作曲線的建立

吸取濃度1 000 μg·mL-1的毒蟲畏標(biāo)準(zhǔn)品1 mL，用丙酮定容至10 mL，配制成濃度為100 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，分別準(zhǔn)確吸取不同體積的標(biāo)準(zhǔn)使用液，配制成濃度為0.02 μg·mL-1、0.08 μg·mL-1、0.15 μg·mL-1、 0.20 μg·mL-1、0.40 μg·mL-1和0.80 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列，按照儀器條件進(jìn)行分析，以毒蟲畏的濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

在上述儀器條件下，得到定量方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1，線性回歸方程為y=277 385x-3 134.3，相關(guān)系數(shù)R2=0.998 4。表明試樣溶液濃度在0.02～0.80 μg·mL-1線性關(guān)系良好。從圖2中可以看出，毒蟲畏(E)-和(Z)-兩種異構(gòu)體分離度較好。

2.2 方法的檢出限

分別稱取茶葉樣品10份，每份5 g，每份樣品中均加入0.01 mg·kg-1的毒蟲畏，按樣品前處理方法，制得供試品溶液，按上述儀器條件進(jìn)行測定，計算其標(biāo)準(zhǔn)偏差，以3倍的標(biāo)準(zhǔn)偏差作為檢出限，得到方法的檢出限為0.001 mg·kg-1。

2.3 方法的準(zhǔn)確度

稱取茶葉樣品18份，每份5 g，進(jìn)行濃度為 0.01 mg·kg-1、0.02 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1的3個 水平加標(biāo)回收實驗，每個水平重復(fù)測定6次。結(jié)果如表1所示。由表可知，3個水平的加標(biāo)回收率分別為92.8%～103.8%、99.6%～105.8%、88.1%～96.3%，可滿足一般實驗的要求。

2.4 方法的精密度

稱取茶葉樣品18份，每份5 g，進(jìn)行濃度為 0.01 mg·kg-1、0.02 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1的3個水平加標(biāo)，每個水平重復(fù)測定6次，結(jié)果如表1所示。3個水平的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.2%、2.3%、3.2%，說明該方法具有良好的精密度。

表1 加標(biāo)回收率和精密度實驗表（n=6）

2.5 定性驗證

將加標(biāo)量為0.01 mg·kg-1、0.02 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1的3個水平樣品按照前處理方法制得供試品溶液，使用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行定性確認(rèn)。結(jié)果如表2， 圖3～圖10，從表中的數(shù)據(jù)可以得到，樣品中毒蟲畏的保留時間和標(biāo)準(zhǔn)溶液中基本一致，且特征離子269、323的相對豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液中的相對豐度比偏差滿足定性要求，因此該方法的定性驗證準(zhǔn)確。

表2 加標(biāo)樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液中特征離子的相對豐度比表

3 結(jié)論

本文建立了一種氣相色譜法定量分析茶葉中毒蟲畏殘留量和氣相色譜-質(zhì)譜法定性確認(rèn)的方法，通過對茶葉中毒蟲畏殘留量提取、凈化、濃縮和測定，發(fā)現(xiàn)該方法的檢測限、準(zhǔn)確性和精密度都能滿足檢測的要求，可用于茶和種毒蟲畏殘留量的分析。