枳實(shí)參與雄性訓(xùn)練神經(jīng)痛大鼠疼痛敏感性變化

汪燕 劉宏超 (中國民用航空飛行學(xué)院體育部，四川 廣漢 68307；山西師范大學(xué))

枳實(shí)為蕓香科小喬木柑橘屬植物，其果實(shí)晾干或低溫干燥之后，是我國較為常見的中藥，氣味清新香甜，味道較苦、含有微量的酸度，同時(shí)枳實(shí)外表是黑色與褐色相見的，表面較光滑，有細(xì)小的微粒狀突起〔1〕。其功效最開始記錄在我國早期中醫(yī)藥理學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》中，具有破除體內(nèi)積聚廢氣，大便不通順，氣管痰的阻礙，胸部麻痹，肝臟器官下垂等一些癥狀〔2,3〕。同時(shí)枳實(shí)，薤白和桂枝及人參配伍可治療心絞痛，枳實(shí)薤白桂枝湯可有效干預(yù)氧化應(yīng)激損傷，其對冠狀動(dòng)脈痙攣引起的心肌缺血具有一定的保護(hù)作用，可有效改善家兔心臟損傷〔4,5〕，而枳實(shí)梔子豉湯還具有潛在的抗抑郁作用〔6〕，枳實(shí)的黃酮提取物可以有效抑制6-羥基多巴胺(OHDA)誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的損傷〔7〕，枳實(shí)的揮發(fā)油還具有鎮(zhèn)咳喘消除腫脹等多種功能。枳實(shí)作為一種中藥功能廣泛。但至今尚未見對慢性痛，尤其是神經(jīng)性痛模型大鼠疼痛作用變化的研究。本實(shí)驗(yàn)觀察枳實(shí)水煮液對雄性訓(xùn)練神經(jīng)痛模型大鼠進(jìn)行行為學(xué)測痛，觀察其疼痛敏感性變化。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 本研究選用6只成年雄性大鼠，體重180～200 g。在實(shí)驗(yàn)期間單獨(dú)分籠飼養(yǎng)，并且提供12 h的光照、讓其自由進(jìn)食和飲水，飼養(yǎng)室內(nèi)的溫度保持在20～24℃。

1.1.2藥品與實(shí)驗(yàn)器材 枳實(shí)，購買于北京同仁堂大藥房，將枳實(shí)制成水煮液母液，并用母液配制成15.20、30.40、60.80 mg/ml的枳實(shí)水煮液，每只大鼠采用不同濃度灌胃，灌胃的量為3 ml枳實(shí)水煮液，生理灌胃針由深圳瑞沃德公司提供；熱板儀(型號(hào)：YLS-6B，濟(jì)南市益延科技發(fā)展有限公司)，電子壓痛儀(型號(hào)：YLS-3E，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)，微量進(jìn)樣器(上海曼普生物科技有限公司)，電子天平(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)等。

1.2方法

1.2.1訓(xùn)練大鼠 為了減小實(shí)驗(yàn)誤差并讓大鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)步驟及環(huán)境，在正式實(shí)驗(yàn)開始之前需要對大鼠進(jìn)行行為痛覺測試訓(xùn)練，包括熱板和壓板測試訓(xùn)練及灌胃的訓(xùn)練。根據(jù)王帥康等〔8〕給出的實(shí)驗(yàn)原理和方法，對大鼠進(jìn)行連續(xù)5 d、每天5輪、每輪3次的訓(xùn)練。經(jīng)過訓(xùn)練后的大鼠，其后爪縮爪潛伏期會(huì)維持在一個(gè)相對較穩(wěn)定的范圍。

1.2.2神經(jīng)痛模型的建立 神經(jīng)性痛敏模型建立，參照Bennett等〔9〕的方法進(jìn)行坐骨神經(jīng)結(jié)扎的方法建立神經(jīng)性痛敏模型。將大鼠用水合氯醛麻醉，暴露一側(cè)坐骨神經(jīng)后，以4號(hào)醫(yī)用手術(shù)線自中樞端向外周端將坐骨神經(jīng)每隔約1 mm做一個(gè)結(jié)扎，共4個(gè)。結(jié)扎之后將神經(jīng)復(fù)位，分層縫合肌肉層與皮膚層，連續(xù)注射3 d以上消炎藥物預(yù)防感染。向雄性訓(xùn)練神經(jīng)痛敏模型大鼠灌胃于枳實(shí)水煮液及生理鹽水等，觀察其對神經(jīng)痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用。

1.2.3行為學(xué)痛覺測試 壓力測試：用壓力測痛儀對大鼠進(jìn)行壓力測試。首先需控制開關(guān)，將有機(jī)玻璃壓在大鼠后爪的跗趾關(guān)節(jié)處，大鼠感覺到疼痛時(shí)后爪便會(huì)發(fā)生縮回現(xiàn)象，此時(shí)必須立即停止計(jì)時(shí)。分別記錄灌胃枳實(shí)水煮液和灌胃生理鹽水對照組神經(jīng)痛大鼠的后爪縮爪反應(yīng)潛伏期(HWL)。熱板測試：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求需要將熱板的溫度穩(wěn)定在52℃左右。待大鼠的后爪緊貼在熱板上后便開始計(jì)時(shí)，直到大鼠后爪感到疼痛主動(dòng)縮回并且離開熱板時(shí)立即停止計(jì)時(shí)。分別記錄灌胃枳實(shí)水煮液和灌胃生理鹽水對照組神經(jīng)痛大鼠的HWL。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

與灌胃生理鹽水相比，灌胃15.20 mg/ml的枳實(shí)水煮液左、右側(cè)熱板和壓板HWL均無明顯差異(均P>0.05)；而灌胃30.40 mg/ml的枳實(shí)水煮液后，左側(cè)后爪熱板和左、右側(cè)壓板HWL均有明顯差異(均P<0.05)，而右側(cè)熱板差異顯著(P<0.01)；同時(shí)灌胃60.80 mg/ml枳實(shí)水煮液時(shí)，左、右側(cè)熱板和壓板HWL差異均顯著(均P<0.01)，見表1。結(jié)果顯示，枳實(shí)水煮液明顯延長了雄性訓(xùn)練神經(jīng)痛大鼠的HWL，表明其具有鎮(zhèn)痛的功效，參與了雄性訓(xùn)練神經(jīng)痛大鼠疼痛敏感性變化的調(diào)節(jié)。

表1 灌胃正常大鼠15.20、30.40、60.80 mg/ml枳實(shí)水煮液的與對照組(生理鹽水)大鼠的

3 討 論

目前臨床上鎮(zhèn)痛藥物多采用嗎啡、哌替啶等阿片類藥物，雖然患者不再感覺疼痛，但是能引發(fā)抗藥和藥癮效果〔10〕。為了避免成癮性等不良反應(yīng)，我們把目光聚焦在中藥上，本實(shí)驗(yàn)濃度為30.40與60.80 mg/ml枳實(shí)水煮液具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，參與了雄性訓(xùn)練神經(jīng)痛模型大鼠疼痛敏感性變化的調(diào)節(jié)。但當(dāng)濃度逐漸升高時(shí)，其鎮(zhèn)痛效果也越加明顯，在灌胃時(shí)間為15 min時(shí)HWL達(dá)到最大值即鎮(zhèn)痛效果最明顯，且具有劑量依賴性。以往研究發(fā)現(xiàn)，枳實(shí)擁有消除身體胸部和肺部膨腫，疼痛感，痰聚集在肋骨之間，食物積累不順等作用〔11〕。枳實(shí)的有效成分主要有揮發(fā)油、黃酮苷、生物堿等幾類〔12〕，有實(shí)驗(yàn)證明枳實(shí)的揮發(fā)油具有一定程度的鎮(zhèn)痛和抗炎癥作用，枳實(shí)通降顆粒能顯著促進(jìn)術(shù)后腸梗阻大鼠模型小腸功能的恢復(fù)，并具有較好的抗炎作用〔13〕。枳實(shí)有效成分包括黃酮苷，揮發(fā)油及生物堿等，到底是哪種物質(zhì)起到了作用，需在以后的實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證，此研究結(jié)果為臨床中藥鎮(zhèn)痛的研究與開發(fā)提供理論依據(jù)。