劉少娟 彭湘明 巫楚媚 賴艷榕 鄧露露 劉瀚榆
[摘要]目的探討血培養(yǎng)直接藥敏試驗(yàn)對(duì)血流感染性疾病的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法選取血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本55例,運(yùn)用 K-B 法進(jìn)行直接藥敏試驗(yàn)和標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗(yàn),統(tǒng)計(jì)血培養(yǎng)革蘭陽(yáng)性球菌和革蘭陰性桿菌7 h 和16 h 直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)符合率并進(jìn)行比較。結(jié)果血培養(yǎng)革蘭陽(yáng)性球菌7 h 和16 h 的直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)符合率分別為78.261%和84.950%;血培養(yǎng)革蘭陰性桿菌7 h 和16 h 的直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)符合率分別為81.066%和91.912%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果兩個(gè)時(shí)間段之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,血培養(yǎng)革蘭陽(yáng)性球菌和革蘭陰性桿菌16 h 藥敏試驗(yàn)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)符合率均高于7 h 藥敏試驗(yàn)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)符合率( P <0.05)。結(jié)論血培養(yǎng)直接藥敏試驗(yàn)耗時(shí)短,操作簡(jiǎn)便,培養(yǎng)16 h 的結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率較高,臨床醫(yī)生可參考血培養(yǎng)直接藥敏結(jié)果為早期血流感染患者選取合適的抗生素治療。
[關(guān)鍵詞]血培養(yǎng);直接藥敏試驗(yàn);標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗(yàn);紙片擴(kuò)散法;菌液濃度
[中圖分類號(hào)] R446.1? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A?? [文章編號(hào)]2095-0616(2022)09-0142-05
Study on the clinical value of direct drug susceptibility testing of blood cultures for blood-borne infectious diseases
LIU 1Shaojuan??? PENG? Xiangming ??WU? Chumei( 2)?? LAI 1Yanrong??? DENG? Lulu( 1)?? LIU 1Hanyu
1. Department of Clinical Laboratory, Guangzhou Red Cross Hospital, Guangdong, Guangzhou 510220, China;2. Foshan Nanhai District Fifth People's Hospital, Guangdong, Foshan 528231, China
[Abstract] Objective To investigate the clinical value of direct drug susceptibility testing of blood cultures for blood-borne infectious diseases. Methods A total of 55 blood culture positive samples were selected for direct drug susceptibility testing and standard drug susceptibility testing by the K-B method. The standard coincidence rates of 7-hour and 16-hour direct drug susceptibility testing results for blood culture gram- positive cocci and gram-negative bacilli were counted and compared. Results The standard coincidence rates of 7-hour and 16-hour direct drug susceptibility testing results for blood culture gram-positive cocci were 78.261% and 84.950%, respectively; the standard coincidence rates of 7-hour and 16-hour direct drug susceptibility testing results for blood culture gram-negative bacilli were 81.066% and 91.912%, respectively. Upon statistical processing, there was a statistically significant difference between the two periods in the results of direct drug susceptibility testing. The standard coincidence rate of 16-hour drug susceptibility testing results for blood culture gram-positive cocci and gram-negative bacilli was higher than that of 7-hour drug susceptibility testing results (P <0.05). Conclusion The direct drug susceptibility testing of blood cultures is less time- consuming and easy to operate. The standard coincidence rate of the results for the 16-hour culture is relatively high. Clinicians can refer to the direct drug susceptibility testing results of blood cultures to select appropriate antibiotic therapy for patients with early blood stream infection.
[Key words] Blood culture; Direct drug susceptibility testing; Standard drug susceptibility testing; Disk diffusion method; Bacterial solution concentration
血流感染是極易引起機(jī)體中毒、感染及全身炎癥反應(yīng)的感染性疾病,起病急、病情兇險(xiǎn)、病死率高[1-3]。對(duì)于嚴(yán)重的血流感染,早期明確病原菌并給予有效的抗菌藥物治療至關(guān)重要,可顯著降低患者病死率[4-5]。按照傳統(tǒng)的方法,血培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn)需要3~5 d 才得到結(jié)果以指導(dǎo)臨床用藥[6]。但是直接藥敏試驗(yàn)用時(shí)較短,減少了細(xì)菌分離純化的步驟,縮短報(bào)告時(shí)間。本研究是通過(guò)計(jì)算直接藥敏試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)符合率,比較兩個(gè)時(shí)間段標(biāo)準(zhǔn)符合率的差異,探討能否運(yùn)用直接藥敏試驗(yàn)在較短的時(shí)間內(nèi)得出準(zhǔn)確的藥敏結(jié)果,為臨床提供用藥參考依據(jù)。
1.1儀器與試劑
BACTEC FX 全自動(dòng)血培養(yǎng)儀(美國(guó) BD 公司),比濁儀(美國(guó) BD 公司),血培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)需氧瓶(美國(guó) BD 公司,批號(hào):9239513),厭氧瓶(美國(guó) BD 公司,批號(hào):9281699),血平板(江門凱林,批號(hào):200320),營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(杭州濱和,批號(hào):210302),MH 平板(廣州迪景,批號(hào): MHP-200301D),藥敏紙片(英國(guó) OXOID,批號(hào):青霉素3184404,利奈唑胺2490427,四環(huán)素3230868,氯霉素3247319,萬(wàn)古霉素3195888,哌拉西林/他唑巴坦3190129,替考拉寧2203197,利福平2942763,左氧氟沙星3195900,慶大霉素2972738,復(fù)方磺胺3270612,克林霉素2972599,紅霉素2866326,頭孢西丁3001688,頭孢哌酮2422371,頭孢呋辛3250444,頭孢唑林3195880,美洛培南3207311,亞胺培南2993932,阿米卡星2968034,頭孢吡肟3184467,頭孢他啶2961052,環(huán)丙沙星3242763,氨芐西林2499343,氨曲南2897396)。
1.2操作方法
1.2.1鏡檢血培養(yǎng)瓶報(bào)陽(yáng)之后,首先將血瓶顛倒搖勻,然后用注射器抽取血瓶血液滴一滴在有磨砂玻璃玻片上,固定烘干之后進(jìn)行快速革蘭染色,在顯微鏡下觀察判斷為革蘭陽(yáng)性球菌還是革蘭陰性桿菌。
1.2.2直接藥敏試驗(yàn)直接用1 ml 注射器抽取血培養(yǎng)儀報(bào)警陽(yáng)性瓶中的血液4滴(約50μl)滴在 MH 平板上,用無(wú)菌棉簽蘸取無(wú)菌生理鹽水后,再將血液均勻涂布在 MH 藥敏平板,用紙片分配器貼上相應(yīng)的革蘭陽(yáng)性球菌或者革蘭陰性桿菌藥敏紙片,置35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng),在培養(yǎng)后的6~8 h 和16~18 h 分別量取抑菌環(huán)直徑。
1.2.3標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗(yàn)按照常規(guī)操作程序進(jìn)行,用血平板先進(jìn)行菌種的分離純化,培養(yǎng)后選取單個(gè)菌落配制為0.5個(gè)麥?zhǔn)蠞舛?,用無(wú)菌棉簽蘸取菌液后,均勻涂布在 MH 藥敏平板上,并貼上相應(yīng)的革蘭陽(yáng)性球菌或者革蘭陰性桿菌藥敏紙片,置35℃培養(yǎng)箱18~24 h 培養(yǎng)后量取抑菌環(huán)直徑。
1.2.4藥敏結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)[7] 按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn),①標(biāo)準(zhǔn)符合率(CA):標(biāo)準(zhǔn)藥敏和直接藥敏結(jié)果一致;②嚴(yán)重錯(cuò)誤(VME):標(biāo)準(zhǔn)藥敏耐藥 R,直接藥敏敏感 S;③重大錯(cuò)誤(ME):標(biāo)準(zhǔn)藥敏敏感 S,直接藥敏耐藥 R;④一般錯(cuò)誤(MIE):標(biāo)準(zhǔn)藥敏敏感 S 或耐藥 R,直接藥敏中度敏感 I,標(biāo)準(zhǔn)藥敏中度敏感 I,直接藥敏敏感 S 或耐藥 R。
采用 SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料用[n (%)]表示,采用χ2檢驗(yàn), P <0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
2.1藥敏試驗(yàn)中病原菌的種類
本實(shí)驗(yàn)菌株均來(lái)自臨床患者,共55例,革蘭陽(yáng)性球菌23例,革蘭陰性桿菌32例;其中革蘭陽(yáng)性球菌分別為金黃色葡萄球菌18例、凝固酶陰性葡萄球菌5例;革蘭陰性桿菌分別為大腸埃希菌20例、肺炎克雷伯菌5例、銅綠假單胞菌7例。
2.2藥敏結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率統(tǒng)計(jì)
血培養(yǎng)革蘭陽(yáng)性球菌7 h 和16 h 直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率分別為78.261%、84.950%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.456, P <0.05),見(jiàn)表1~2,可認(rèn)為16 h 的直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率更高,結(jié)果更可靠;革蘭陰性桿菌7 h 和16 h 藥敏試驗(yàn)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率分別為81.066%、91.912%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=27.380, P <0.001),見(jiàn)表3~4,可認(rèn)為16 h 的直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率更高,結(jié)果更可靠。
3討論
血流感染,是一種威脅生命的全身性感染疾病,用藥必須及時(shí)才能最大程度控制感染,所以,臨床醫(yī)生對(duì)血流感染往往首先考慮經(jīng)驗(yàn)用藥。但隨著抗生素的不規(guī)范使用,細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的耐藥性日趨嚴(yán)重,使感染性疾病的治療受到巨大挑戰(zhàn)[8-10]。為避免盲目使用抗生素,盡快有效控制感染,快速的直接藥敏試驗(yàn)的應(yīng)用價(jià)值越來(lái)越多被研究。采用直接藥敏試驗(yàn)?zāi)芸s短患者住院時(shí)間,降低罹患難辨梭菌相關(guān)腹瀉的風(fēng)險(xiǎn)、降低患者平均病死率與感染相關(guān)病死率[11]。直接藥敏試驗(yàn)跟傳統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗(yàn)相比,減少了第一步的菌種分離純化的步驟,但是由于血流感染多數(shù)情況下是單一菌種的感染,因此直接選用血培養(yǎng)瓶報(bào)警陽(yáng)性后的血液進(jìn)行 K-B 法藥敏試驗(yàn)也是可取的。相關(guān)研究[12-14]顯示,血培養(yǎng)直接藥敏試驗(yàn)比傳統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗(yàn)耗時(shí)短,兩種方法對(duì)抗菌藥物的敏感性和耐藥性方面無(wú)明顯差距,本研究也認(rèn)同此觀點(diǎn)。本研究革蘭陽(yáng)性球菌和革蘭陰性桿菌16 h 的直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果比7 h 的結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率更高,結(jié)果更可靠,主要原因可能是培養(yǎng)時(shí)間的不足,傳統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗(yàn)都是過(guò)夜培養(yǎng)18~24 h,細(xì)菌有充分時(shí)間進(jìn)行傳代、與藥物作用,而細(xì)菌只培養(yǎng)7 h 傳代次數(shù)不足、細(xì)菌生長(zhǎng)不好、與藥物未能充分作用,因此很多藥敏紙片的抑菌環(huán)直徑顯示不清晰,容易造成判讀結(jié)果時(shí)的誤差,出現(xiàn)較為嚴(yán)重的錯(cuò)誤。
革蘭陽(yáng)性球菌的直接藥敏試驗(yàn)中,培養(yǎng)7 h 和16 h,青霉素、利奈唑胺、四環(huán)素和氯霉素的標(biāo)準(zhǔn)符合率高達(dá)90%以上,但是也發(fā)現(xiàn)萬(wàn)古霉素、替考拉寧、頭孢西丁和左氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)符合率不太高,可能由于藥敏規(guī)則中萬(wàn)古霉素是培養(yǎng)24 h 才能判讀結(jié)果,另外,學(xué)者普遍認(rèn)為采用紙片擴(kuò)散法對(duì)萬(wàn)古霉素的藥物敏感性進(jìn)行測(cè)定是不可靠的[15],因?yàn)槠鋵?duì)某些金黃色葡萄球菌對(duì)萬(wàn)古霉素是敏感還是中介無(wú)法區(qū)分,應(yīng)該常規(guī)采用肉湯稀釋法來(lái)提高萬(wàn)古霉素藥物敏感度的準(zhǔn)確性。頭孢西丁跟萬(wàn)古霉素一樣,某些葡萄球菌也必須培養(yǎng)24 h 才能判讀抑菌環(huán)直徑大小,培養(yǎng)時(shí)間短、藥物未充分作用、菌種生長(zhǎng)不好,可能是導(dǎo)致兩個(gè)時(shí)間段藥敏符合率偏低的主要原因。另外,革蘭陽(yáng)性球菌還需要注意 D 試驗(yàn)陽(yáng)性的菌種,D 試驗(yàn)用于觀察葡萄球菌對(duì)紅霉素誘導(dǎo)克林霉素的耐藥情況[16]。在本研究直接藥敏試驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)有4例 D 試驗(yàn)陽(yáng)性,說(shuō)明進(jìn)行直接藥敏試驗(yàn)也可發(fā)現(xiàn) D 試驗(yàn)陽(yáng)性菌株,所以要特別注意紅霉素和克林霉素的藥敏結(jié)果,一旦發(fā)現(xiàn) D 試驗(yàn)陽(yáng)性,盡管紅霉素和克林霉素藥敏試驗(yàn)中抑菌環(huán)大小顯示其為敏感,報(bào)告臨床時(shí)均改為耐藥。
革蘭陰性桿菌的直接藥敏試驗(yàn)中,培養(yǎng)16 h,美洛培南、復(fù)方新諾明、亞胺培南和慶大霉素的標(biāo)準(zhǔn)符合率高達(dá)100%,另外多種藥物的標(biāo)準(zhǔn)符合率也高達(dá)90%以上;培養(yǎng)7 h,頭孢呋辛、左氧氟沙星、復(fù)方新諾明、慶大霉素和氨芐西林的標(biāo)準(zhǔn)符合率也高達(dá)90%以上,某些藥物7 h 和16 h 的標(biāo)準(zhǔn)符合率相差不是較大,分析原因可能因?yàn)楦锾m陰性桿菌的傳代間隔時(shí)間較短,傳代次數(shù)較多,在7 h 判讀結(jié)果時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)明顯的抑菌環(huán)直徑,提高肉眼判讀結(jié)果的準(zhǔn)確性。但是還存在有個(gè)別藥物的符合率相差甚遠(yuǎn),如哌拉西林/他唑巴坦、亞胺培南、頭孢西丁和頭孢他啶等藥物,原因可能也與細(xì)菌生長(zhǎng)周期和藥物的相互作用有關(guān)。
綜上所述,直接藥敏試驗(yàn)比標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗(yàn)耗時(shí)短,操作簡(jiǎn)便,革蘭陰性桿菌16 h 的直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果在臨床上具有較高的參考價(jià)值,革蘭陽(yáng)性球菌仍有幾類藥物(如利奈唑胺、四環(huán)素、氯霉素、慶大霉素、左氧氟沙星和復(fù)方磺胺等)符合率較高,臨床醫(yī)生可以直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果作為參考,及時(shí)給患者使用抗生素,降低患者病死率和避免抗生素的濫用造成細(xì)菌耐藥性的變異。
[參考文獻(xiàn)]
[1]王林,張昌峰,梁浩杰,等.某院2017-2018年血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本菌群分布及耐藥性分析[J].實(shí)用檢驗(yàn)醫(yī)師雜志,2020,12(3):153-156.
[2]張曉彤,國(guó)世星,邵青,等.多因子聯(lián)合檢測(cè)在診斷血流感染和指導(dǎo)抗菌藥物早期合理使用中的應(yīng)用價(jià)值[J].實(shí)用檢驗(yàn)醫(yī)師雜志,2020,12(1):37-41.
[3] 冒山林,葛梓,趙暉,等.急診社區(qū)發(fā)生血流感染的病原菌分布特點(diǎn)及耐藥性分析[J].中華危重病急救醫(yī)學(xué),2019,31(1):67-72.
[4]馬立艷,孫偉蘇,蘇建榮.MALDI-TOF MS 結(jié)合短時(shí)培養(yǎng)法在陽(yáng)性血培養(yǎng)病原菌鑒定中的臨床應(yīng)用[J].臨床和實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2020,19(2):223-225.
[5] Huang AM,Newton D,Kunapuli A,et al.Impact ofrapid organism identification via matrix - assisted laser desorption/ionization time-of-flight combined with antimicrobial stewardship tea m intervention in adult patients with bacteremia and candidemia [J].Clin Infect Dis,2013,57(9):1237-1245.
[6]陳秀娟,孫新,梁會(huì)營(yíng).應(yīng)用機(jī)器學(xué)習(xí)構(gòu)建細(xì)菌性膿毒癥的菌型預(yù)測(cè)模型[J].中國(guó)數(shù)字醫(yī)學(xué),2019,14(3):31-33.
[7]闕志文.兩種不同藥敏實(shí)驗(yàn)在血液細(xì)菌檢驗(yàn)中的對(duì)照研究[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué),2015,27(1),118-120.
[8] Aslam B,Wang W,Arshad MI,et al .Antibiolicresistance: a rundown of a global crisis[J].Infecl Drug Resist,2018,11:1645-1658.
[9] McGann P,Snesrud E,Maybank R,et al.Erratum forMcGann et al, Escherichia coli harboring mcr-1 and blacrx-m on a novel IncF plasmid: firsl report of mcr-l in the United States[J].Antimicrob Agents Chemother,2016,60(8):5107.
[10] Hernando-Amado S, Coque TM,Baquero F,et al.Defining and combaing antibiotic resistance from one health and global health perspecives[J].NalMicrobiol,2019,4(9):1432-1442.
[11] 答嶸,王偉,李芳,等.血培養(yǎng)陽(yáng)性培養(yǎng)物直接藥敏試驗(yàn)的評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2015,12(20):2971-2973.
[12] 王新,葛培.直接藥敏試驗(yàn)與常規(guī)藥敏試驗(yàn)在血液細(xì)菌鑒定檢驗(yàn)應(yīng)用價(jià)值[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2020,26(12): 121-122.
[13]黃劍芳 . 直接藥敏試驗(yàn)與常規(guī)藥敏試驗(yàn)在臨床血液細(xì)菌鑒定檢驗(yàn)中的效果研究 [J]. 中國(guó)醫(yī)藥科學(xué),2019,9(13):121-123.
[14]馬良,梁晶晶,張丹丹 . 直接藥敏試驗(yàn)在血液細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值分析 [J]. 中國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn),2017,8(1):98-99.
[15]萬(wàn)艷紅,葛銀,林李斌,等 . 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌耐藥機(jī)制和臨床耐藥研究的新進(jìn)展 [J]. 中國(guó)藥物與臨床,2013,13(9):1164-1167.
[16]羅小強(qiáng),龔雅利,張成,等 .159 例燒傷重癥監(jiān)護(hù)病房導(dǎo)管相關(guān)性血流感染患者病原菌分布及耐藥性分析 [J]. 中華燒傷雜志,2020,36(1):24-31.
(收稿日期:2021-09-30)