24%鹽酸嗎啉胍·甲噻誘胺懸浮劑高效液相色譜分析

許艷秋，王廣成，吳春先，陳丙坤，高立明

（四川省農(nóng)藥檢定所，成都 610041）

鹽酸嗎啉呱又名病毒靈，化學(xué)名為N-(2-胍基-乙亞胺基)-嗎啉鹽酸鹽，是一種在醫(yī)藥和農(nóng)藥領(lǐng)域常用的抗病毒制劑，通過抑制或破壞DNA和RNA聚合酶阻止病毒的復(fù)制，從而達到防治病毒的效果[1]，其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中可防治番茄病毒病、煙草病毒病等[1-2]。甲噻誘胺化學(xué)名稱為N-(5-甲基-1，3-噻唑-2-基)-4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-甲酰胺，是由南開大學(xué)創(chuàng)制，利爾化學(xué)股份有限公司開發(fā)的植物誘導(dǎo)抗病激活劑，通過誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)、廣譜的抗病活性，主要用于細菌、真菌及植物病毒等引起的多種植物病害的防治[3-4]。

目前，鹽酸嗎啉胍單劑和甲噻誘胺原藥的檢測方法已有相關(guān)文獻報道[5-6]，但2種藥劑混配的分析方法尚未見報道。本文采用高效液相色譜方法對鹽酸嗎啉胍·甲噻誘胺懸浮劑進行同時測定，在選定的色譜條件下，2種有效成分與雜質(zhì)可以完全分離。此方法簡便、快速、準確，能同時測定2種有效成分的含量，是一種較為理想的分析方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀（二極管陣列檢測器），美國安捷倫科技有限公司；symmetryshieldTMC18色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）、鹽酸嗎啉胍標準品（純度≥99.0%），國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心（北京）；甲噻誘胺標準品（純度≥99.0%），廣安利爾化學(xué)有限公司；24%鹽酸嗎啉胍·甲噻誘胺懸浮劑，廣安利爾化學(xué)有限公司；甲醇（色譜純），飛世爾科技公司；乙酸（分析純），四川西隴化工有限公司。

1.2 液相色譜分析條件

流動相：甲醇-0.3%乙酸溶液（55∶45，V/V）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：253 nm；進樣體積：3.0 μL。

1.3 溶液配制

標準溶液的配制。準確稱取鹽酸嗎啉胍標準品0.06 g、甲噻誘胺標準品0.03 g（精確至0.000 2 g），用甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中，經(jīng)0.5 μm有機濾膜過濾，備用。

樣品溶液的配制。準確稱取24%鹽酸嗎啉胍·甲噻誘胺懸浮劑樣品0.35 g（精確至0.000 2 g），用甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中，超聲10 min，經(jīng)0.45 μm有機濾膜過濾，備用。

1.4 有效成分測定

儀器于“1.2”所述條件下穩(wěn)定，待基線穩(wěn)定后，連續(xù)進標準品溶液數(shù)針至相鄰峰面積變化小于1.5%，按照標準品、樣品、樣品、標準品的順序進樣測定。

1.5 計算

按式（1）進行計算樣品中的有效成分鹽酸嗎啉胍和甲噻誘胺的質(zhì)量分數(shù)w。

式中：A1為標樣溶液中鹽酸嗎啉胍（甲噻誘胺）峰面積的平均值，mAU·min；A2為試樣溶液中鹽酸嗎啉胍（甲噻誘胺）峰面積的平均值，mAU·min；m1、m2分別為鹽酸嗎啉胍（甲噻誘胺）標樣、試樣質(zhì)量，g；P為標樣中鹽酸嗎啉胍（甲噻誘胺）的質(zhì)量分數(shù)，%。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測波長的確定

采用二極管陳列檢測器（DAD），對鹽酸嗎啉胍、甲噻誘胺標準品在200～400 nm波長下進行掃描，其紫外吸收圖如圖1所示。由圖1可知，鹽酸嗎啉胍的最大吸收波長為237 nm，甲噻誘胺的主吸收波長分別在265 nm和345 nm。因鹽酸嗎啉呱與甲噻誘胺的紫外曲線交叉點為253 nm，且在此波長條件下2種物質(zhì)均有較好的吸收，無雜質(zhì)干擾，故選擇253 nm為該方法的檢測波長。

圖1 鹽酸嗎啉胍和甲噻誘胺紫外掃描圖

2.2 流動相的選擇

甲噻誘胺在甲醇中的溶解度較好，優(yōu)先選擇甲醇為流動相。鹽酸嗎啉胍為鹽酸鹽化合物，采用甲醇-水為流動相時，出峰不對稱，峰形嚴重拖尾，當采用乙酸溶液為流動相，峰形對稱。因此，本文最終選擇的流動相為甲醇-0.3%乙酸溶液（55∶45，V/V）。此條件下鹽酸嗎啉胍與甲噻誘胺分離效果好，峰形對稱尖銳，保留時間適中（圖2、圖3）。

圖2 鹽酸嗎啉胍和甲噻誘胺標準品液相色譜圖

圖3 鹽酸嗎啉胍和甲噻誘胺樣品液相色譜圖

2.3 分析方法的線性關(guān)系

配制不同濃度的鹽酸嗎啉胍標準品溶液，濃度分別為0.678 5、1.030 6、1.180 7、1.366 9、2.017 6 mg/mL。每個濃度溶液按1.2節(jié)所述的色譜分析條件分別測定3次，取其平均值。以質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。鹽酸嗎啉胍線性回歸方程為y=3 869.4x＋473.95，R2=0.998 7。

配制不同濃度的甲噻誘胺標準溶液，濃度分別為0.341 3、0.518 4、0.687 8、1.014 9 mg/mL。根據(jù)同樣方法測定3次，取其平均值。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。甲噻誘胺線性回歸方程為y=3 603.3x-7.762 7，R2=9.998 9。

2.4 分析方法的精密度

在1.2色譜檢測條件下，取24%鹽酸嗎啉胍·甲噻誘胺SC樣品進行8次平行測定（表1）。鹽酸嗎啉胍質(zhì)量分數(shù)平均值為16.34%，標準偏差（RSD）為0.046 73%，變異系數(shù)（CV）為0.29%；甲噻誘胺質(zhì)量分數(shù)平均值為8.43%，RSD值為0.035 23%，CV值為0.42%。

表1 鹽酸嗎啉胍和甲噻誘胺精密度檢測（n=8）

2.5 分析方法的準確度

稱取24%鹽酸嗎啉胍·甲噻誘胺懸浮劑樣品5份，分別加入不同量的鹽酸嗎啉胍（甲噻誘胺）標準品，按照上述方法進行回收率測定，測定結(jié)果見表2。結(jié)果表明，鹽酸嗎啉胍平均回收率為100.28%；甲噻誘胺平均收回率為100.11%。

表2 鹽酸嗎啉胍和甲噻誘胺添加回收檢測結(jié)果（n=5）

3 結(jié) 論

本文建立了能夠同時對24%鹽酸嗎啉胍·甲噻誘胺懸浮劑中的有效成分鹽酸嗎啉胍和甲噻誘胺進行檢測的高效液相色譜分析方法，并對此方法進行合理的方法驗證。結(jié)果表明，鹽酸嗎啉胍和甲噻誘胺有效成分的分離效果較好，精密度較高，檢測方法重現(xiàn)性良好，高效，易操作，因此該方法可用于24%鹽酸嗎啉胍·甲噻誘胺懸浮劑產(chǎn)品的有效成分的定量分析。