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      孕早期稽留流產(chǎn)絨毛細胞遺傳學分析

      2022-09-14 01:40:24孫詩雨陳小麗王曉婭劉彩玉藍信強
      檢驗醫(yī)學與臨床 2022年17期
      關鍵詞:細胞培養(yǎng)孕早期核型

      孫詩雨,陳小麗,王曉婭,劉彩玉,藍信強

      1.青島大學附屬威海市立第二醫(yī)院/山東省威海市婦幼保健院醫(yī)學遺傳科,山東威海 264200;2.廣東省東莞市宜安科技股份有限公司,廣東東莞 523662

      孕早期流產(chǎn)是婦產(chǎn)科常見的一種疾病,也是女性在孕早期容易出現(xiàn)的并發(fā)癥之一。孕早期流產(chǎn)包括了自然流產(chǎn)和稽留流產(chǎn)兩大類,其中稽留流產(chǎn)是指胚胎已死亡但滯留在宮腔內(nèi)未及時排出的一種流產(chǎn)疾病,也是孕早期流產(chǎn)中一種較特殊的流產(chǎn)類型[1]。醫(yī)學研究表明,造成孕早期流產(chǎn)的原因包括遺傳因素,細菌和病毒引起的宮內(nèi)感染,內(nèi)分泌異常,免疫因素等[2]。其中遺傳因素被認為是最常見的誘發(fā)孕婦孕早期流產(chǎn)的因素,其致病機制主要包括染色體數(shù)目異常和染色體結構異常[3-4]。因此,本研究擬對本院孕早期稽留流產(chǎn)絨毛染色體檢測結果作回顧性分析,為臨床上研究遺傳因素對孕早期稽留流產(chǎn)的影響提供參考。

      1 資料與方法

      1.1一般資料 選取2020年1月至2021年6月于本院行清宮術和絨毛染色體檢查的166例孕早期稽留流產(chǎn)孕婦為研究對象,年齡22~47歲,平均年齡31.09歲;B超提示孕婦胚胎停止發(fā)育。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會批準,孕婦均已知情同意并簽署知情同意書。

      1.2方法

      1.2.1標本和絨毛培養(yǎng) 采用B超定位經(jīng)宮頸絨毛吸取法獲得其絨毛標本,將生理鹽水中的絨毛組織去除血凝塊和其他非絨毛組織,采用滅菌的眼科剪將絨毛剪碎,加入0.25%的胰酶消化。加入1 mL培養(yǎng)基終止消化,以1 500 r/min離心10 min,去除上清液。加入培養(yǎng)基混勻后置于37 ℃,含5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

      1.2.2絨毛細胞培養(yǎng)和染色體制備 細胞培養(yǎng)5~7 d后,于倒置顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)并進行換液。待細胞生長狀態(tài)適中時加入秋水仙素,阻斷細胞周期于中期,繼續(xù)培養(yǎng)4 h后收集細胞,并制備染色體玻片。利用G顯帶法對玻片進行顯帶,使用Leica染色體分析系統(tǒng)拍照保存。計數(shù)至少20個分裂象,分析5個細胞核型。

      1.3統(tǒng)計學處理 采用SPSS22.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理和分析。計數(shù)資料以例數(shù)和百分率表示,組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

      2 結 果

      2.1絨毛細胞培養(yǎng)結果 在166例孕婦的流產(chǎn)絨毛中,細胞培養(yǎng)成功159例,占總例數(shù)的95.78%。細胞培養(yǎng)失敗7例,其中5例細胞培養(yǎng)存在污染,2例細胞無法培養(yǎng)貼壁。

      2.2絨毛染色體核型分析結果 在159例成功進行絨毛染色體核型分析的孕婦中,核型正常有54例,核型異常有105例,其中包括染色體數(shù)目異常98例,占異常核型的93.33%。染色體數(shù)目異常中,單體45,X核型異常有6例、三體核型異常有63例。三體核型異常中16-三體有18例、22-三體有12例、7-三體有6例、15-三體有5例、21-三體有4例、2-三體有3例;復合三體有3例,包括48,XX,+5,+9、48,XX,+7,+8、48,XY,+20,+21;三倍體有16例,其中69,XXX有4例、69,XXY有8例、69,XYY有1例、70,XXXY有1例、70,XXY,+21有1例、71,XXXX,-11有1例;四倍體有5例,其中92,XXXX有3例、92,XXYY有1例、90,XXYY,-13,-13有1例;嵌合體有3例,分別是45,X/46,XX、46,XX/46,XY和47,XX,+16/94,XXXX,+16,+16。此外,染色體結構異常有7例。見表1。

      表1 絨毛染色體核型分析結果

      2.3絨毛染色體異常核型與孕婦年齡的關系 結果發(fā)現(xiàn)30~34歲的孕婦異常核型占比為71.11%;35~39歲的孕婦異常核型占比為70.94%;40~47歲的孕婦異常核型占比為63.64%;22~24歲的孕婦異常核型占比最低,為50.00%。30~47歲的孕婦異常核型占比為70.11%,與正常核型占比比較(29.89%),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);22~29歲的孕婦異常核型占比為61.11%,與正常核型占比比較(38.89%),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

      表2 絨毛染色體核型與孕婦年齡的關系

      2.4絨毛染色體核型與流產(chǎn)胚胎性別的關系 159例成功進行絨毛染色體核型分析的孕婦中,男胎75例,其中異常核型胚胎52例,異常核型占比為69.33%;女胎84例,其中異常核型胚胎53例,異常核型占比為63.10%。見表3。

      表3 絨毛染色體核型與流產(chǎn)胚胎性別的關系

      2.5不同孕產(chǎn)史孕婦絨毛染色體狀況 159例成功進行絨毛染色體核型分析的孕婦中,生育過健康孩子的孕婦24例,其中絨毛染色體異常核型10例,絨毛染色體正常核型14例;未生育過健康孩子的孕婦135例,其中絨毛染色體異常核型95例,絨毛染色體正常核型40例。見表4。

      表4 不同孕產(chǎn)史孕婦絨毛染色體狀況

      3 討 論

      研究表明女性在妊娠期間發(fā)生流產(chǎn)的概率約為15%,流產(chǎn)不僅會給孕婦帶來身體損傷,還會給孕婦及其家屬造成精神上的傷害[5]。在所有導致孕婦出現(xiàn)稽留流產(chǎn)的原因中,胚胎染色體異常是最主要的原因[5-6]。因此,對胚胎染色體異常情況進行分析和研究,對幫助有流產(chǎn)史的育齡期女性成功妊娠具有重要意義。本研究對166例稽留流產(chǎn)孕婦采用B超定位經(jīng)宮頸絨毛吸取法獲得其絨毛標本,進行流產(chǎn)絨毛染色體檢查,采用絨毛細胞培養(yǎng)法進行絨毛染色體培養(yǎng)和制備,其中培養(yǎng)成功159例,培養(yǎng)成功率為95.78%。

      本研究培養(yǎng)成功的159例絨毛細胞標本中,染色體異常占66.04%,其中染色體數(shù)目異常占異常核型的93.33%。本研究表明染色體數(shù)目異常是導致孕早期稽留流產(chǎn)的主要原因。然而,染色體數(shù)目異常形成的主要原因是由于配子形成時或受精卵卵裂時出現(xiàn)染色體不分離,從而導致染色體的單體、三體、復合三體、三倍體及四倍體的產(chǎn)生[7-11]。關于非整倍體異常的產(chǎn)生機制,主要是由染色體的減數(shù)分裂時期,染色體不分離或染色體缺失導致[12]。本研究發(fā)現(xiàn)16-三體、69,XXX/XXY/XYY、22-三體、7-三體、45,X、15-三體、21-三體占主要異常核型,其中16-三體和22-三體是孕早期稽留流產(chǎn)常見的三體核型。已有研究報道,16-三體是稽留流產(chǎn)絨毛細胞中常見的染色體核型[13],然而關于16號染色體高度致死的原因是否與其著絲粒的位置相關需要進一步研究證實[14]。對于多倍體染色體核型形成的原因,主要是由于雙雌受精和雙雄受精[15]。然而,絨毛分析結果為多倍體核型的胎兒父母,進行外周血染色體檢查結果大多正常[15]。

      本研究發(fā)現(xiàn)不同年齡段孕婦絨毛染色體結果存在明顯差異。30~47歲的孕婦,其絨毛染色體核型異常的發(fā)生率明顯高于22~29歲的孕婦。其中30~34歲的孕婦異常核型占比為71.11%,35~39歲的孕婦異常核型占比為70.97%,40~47歲的孕婦異常核型占比為63.64%,然而,22~24歲的孕婦異常核型占比僅為50.00%。同時,30~47歲的孕婦異常核型占比(70.11%)與正常核型占比(29.89%)比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果說明胚胎染色體異常的占比隨著女性年齡增長而逐漸增加。這是因為隨著女性生育年齡的逐漸增長,生殖系統(tǒng)會逐漸老化,卵巢周圍的微環(huán)境改變,以及卵母細胞凋亡速度增加,導致卵細胞發(fā)生異常,從而導致形成非整倍體的卵細胞概率增加[16-18]。因此,建議高齡孕婦進行羊水細胞產(chǎn)前診斷檢測,對降低新生兒的出生缺陷比例具有重要的意義。

      關于孕婦稽留流產(chǎn)的研究,除了與絨毛細胞染色體異常和孕婦年齡有關外,是否與胎兒性別存在關系需要進行深入探討。本研究發(fā)現(xiàn),159例成功進行絨毛染色體核型分析的孕婦中,女胎84例,占稽留流產(chǎn)胎兒的52.83%,其中女胎正常核型占比為36.90%,高于男胎正常核型的占比(30.67%)。然而在異常核型中,男胎占比為69.33%,較高于女胎的63.10%。此外,絨毛細胞三倍體核型的研究發(fā)現(xiàn),69,XXY是三倍體的主要核型。因此,關于胎兒性別與稽留流產(chǎn)的傾向性,以及與絨毛細胞核型的相關性尚無明顯結論,還需要長期的研究證實[9,19]。

      本研究中,按照孕婦孕產(chǎn)史,將孕婦分成生育過健康孩子的孕婦和未生育過健康孩子的孕婦,結果發(fā)現(xiàn)已生育過健康孩子的孕婦,其絨毛染色體正常核型占比為58.33%。然而,未生育過健康孩子的孕婦(包括有復發(fā)性流產(chǎn)、死胎及懷畸形胎兒等異常孕產(chǎn)史),絨毛染色體異常核型占比為70.37%。該結果進一步表明,對于多年未避孕或有不良孕產(chǎn)史等原因而未生育過健康孩子的部分孕婦,其流產(chǎn)原因可能與胎兒染色體核型異常相關。

      綜上所述,絨毛染色體核型異常是導致孕早期稽留流產(chǎn)的主要原因,且染色體異常核型主要為染色體數(shù)目異常,其中常染色體三體核型最為常見。此外,染色體畸變與孕婦年齡等有關,因此,高齡孕婦孕期行羊水穿刺產(chǎn)前診斷檢查尤為重要[20]。通過對孕早期稽留流產(chǎn)絨毛染色體的核型進行分析,可為孕婦再次妊娠,以及為育齡期女性的優(yōu)生優(yōu)育提供重要的理論依據(jù)。

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