變應(yīng)性鼻炎患者miR-326、miR-155表達(dá)及甲基化干預(yù)研究①

姜孝芳 賈宏林 梁曉鷹 張 茹 高 麗 楊 清（新疆醫(yī)科大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830000）

變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是由免疫球蛋白（IgE）介導(dǎo)、鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophils，EOS）浸潤和Th2細(xì)胞因子分泌增加的鼻黏膜Ⅰ型變應(yīng)性炎癥性疾病，主要癥狀為鼻癢、鼻塞、流涕、打噴嚏，全球患病率逐年上升，影響了全球10%～40%成年人和2%～25%兒童，是世界范圍內(nèi)常見的變應(yīng)性疾病，嚴(yán)重影響人們生活質(zhì)量［1-3］。新疆是多民族聚集地，地處西北，干燥少雨，冷熱變化懸殊，特殊的地理環(huán)境及氣候致使AR成為新疆地區(qū)的常見病和多發(fā)?。?］。本課題組在南、北疆及烏魯木齊調(diào)查發(fā)現(xiàn)，烏魯木齊漢族AR患病率（33.36%）高于維吾爾族（19.19%），喀什、伊犁地區(qū)漢族AR患病率（26.1%）高于維吾爾族（12.8%），新疆維、漢民族患病率存在明顯差異［5］。維吾爾族為新疆常住民族，推測可隨環(huán)境壓力改變的基因表觀遺傳學(xué)差異與維吾爾族AR患病率較低有關(guān)。Th1和Th2細(xì)胞間免疫應(yīng)答失衡是AR的免疫學(xué)基礎(chǔ)。正常狀態(tài)下，Th1和Th2細(xì)胞均維持免疫穩(wěn)態(tài)，當(dāng)AR發(fā)作時會出現(xiàn)Th1細(xì)胞應(yīng)答抑制，Th2細(xì)胞應(yīng)答亢進(jìn)，即“Th2＞Th1免疫應(yīng)答”。

microRNA（miRNA）是一種小的非編碼單鏈RNA分子，含20～25個核苷酸，在進(jìn)化過程中高度保守，能夠靶向動植物中的RNA，阻止蛋白翻譯或降解mRNA，參與轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控［6-8］。miRNA與變應(yīng)性疾病的關(guān)系密不可分，參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖、分化及凋亡等過程［9］。本研究采用RT-PCR檢測AR患者miR-155、miR-326及IL-2、IL-4、IFN-γ mRNA表達(dá)，在動物及細(xì)胞水平研究甲基化干預(yù)對miR-155、miR-326及Th細(xì)胞因子的影響，探討其在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用，為新疆維吾爾族、漢族AR患者提供新的治療靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 研究對象選取2013年12月至2017年11月在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院確診為AR發(fā)作期的患者85例（鼻炎組），平均年齡（22.69±3.81）歲，其中維吾爾族32例，漢族53例，男39例，女46例，均在當(dāng)?shù)鼐幼?年以上，并排除COPD、過敏性皮炎、高血壓、糖尿病、孕婦及60歲以上患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合2009年中華醫(yī)學(xué)會耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)分會、鼻科學(xué)組武夷山會議變應(yīng)性鼻炎診治原則和推薦方案［10］；對照組選擇同期在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院及新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院的健康體檢者、新疆醫(yī)科大學(xué)健康志愿者97例，平均年齡（21.08±3.88）歲，其中維吾爾族40例，漢族57例，男50例，女47例，既往無哮喘病史、過敏性疾病史及心血管疾病史，體檢均正常。本研究經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)（20170214-185），所有受試者知情同意。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動物SPF級SD雄性大鼠，體質(zhì)量180～220 g，由新疆醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供，并在新疆醫(yī)科大學(xué)清潔屏障內(nèi)飼養(yǎng)。隨機(jī)分為3組：正常組、模型組、5-Aza組，每組10只。

1.1.3 主要試劑與儀器Jurkat細(xì)胞株（人外周血白血病T細(xì)胞）購自中科院細(xì)胞庫；5-Aza（A2385）、淋巴細(xì)胞分離液10771（RNBF2219）購自美國Sigma公司；磁珠抗體（557787）購自BD公司；TRIzol裂解液購自Lifetechnologies公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒miScriptⅡRT Kit（218161）、熒光定量試劑盒miScript SYBR Green PCR kit（1046470）購自凱杰公司；Hs-miR-155 miScript Primer Assay（MS00008778）、Hs-miR-326 miScript Primer Assay（MS00003948）、Rn-miR-326 miScript Primer Assay（MS00027342）購 自QIAGEN公司；胎牛血清購自BI公司；RPMI1640培養(yǎng)基購自Hyclone公司；IFN-γ抗體（BM4939，1∶500稀釋）購自Affinity公司；GAPDH抗體（ab8245，1∶10 000稀釋）購自Abcam公司；熒光定量RT-PCR儀購自ABI公司。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集及CD4+T細(xì)胞分離無菌條件下取外周血4～5 ml，采用淋巴細(xì)胞分離液10771進(jìn)行淋巴細(xì)胞分離，分離的淋巴細(xì)胞加入500μl RPMI 1640培養(yǎng)液，同時加入45μl磁珠抗體，混勻，分離CD4+T淋巴細(xì)胞，封口膜封存，-80℃液氮中凍存。

1.2.2 造模及干預(yù)采用經(jīng)典卵清蛋白致敏法構(gòu)建動物模型，模型組采用30 mg卵清蛋白作為抗原，氫氧化鋁粉末3 g作為佐劑，加入100 ml生理鹽水制備混懸液，腹腔注射（1 ml/只），隔天1次，共7次，為基礎(chǔ)致敏?；A(chǔ)致敏次日采用5%卵清蛋白（生理鹽水溶解）攻擊雙側(cè)鼻腔，50μl/側(cè)，1次/d，共10次。空白對照組采用等量生理鹽水代替卵清蛋白及氫氧化鋁腹腔注射和滴鼻攻擊，方法同上。給予5-Aza（5 mg/kg），連續(xù)7 d，每次給藥前30 min進(jìn)行滴鼻，干預(yù)結(jié)束后禁食12 h，2%戊巴比妥麻醉，取鼻黏膜。

1.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)正常培養(yǎng)Jurkat細(xì)胞，待細(xì)胞達(dá)到80%～90%融合時，收集細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，接種至6孔板，細(xì)胞密度為5×105個/孔。待細(xì)胞生長至對數(shù)生長期時，給予5-Aza干預(yù)，繼續(xù)孵育24 h，分別收取RNA及蛋白。

1.2.4 RNA提取TRIzol法提取總RNA，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.2.5 miRNA逆轉(zhuǎn)錄及cDNA合成加入1μg總RNA模板，逆轉(zhuǎn)錄試劑與總RNA為10μl，嚴(yán)格按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作。

1.2.6 RT-qPCR檢測miR-326、miR-155、IL-2、IL-4、IFN-γmRNA表達(dá)參照熒光定量試劑盒miScript SYBR Green PCR kit說明書，60℃退火，45個循環(huán)，采用熒光定量RT-PCR儀進(jìn)行RT-qPCR實(shí)驗(yàn)。引物序列：GAPDH正向引物5"-GACCTGACCTGCCGCTA-3"，反向 引 物5"-AGGAGGGGTGTCGCTGT-3"；IL-2正向引物5"-GCAACCCTGTCTTCATTG-3"，反向引物5"-TCTGGTGAGTTGGGATTC-3"；IL-4正向引物5"-AGCAGTCCACAGGCACAAG-3"，反向引物5"-CTGGGTGGCTTCCTTCACAG-3"；IFN-γ正向引物5"-AACTTAAAGATGACAGAGATCC-3"，反向引物5"-TCTGGTGAGTTGGGATTC-3"，以上引物由上海生工生物工程股份有限公司設(shè)計(jì)合成。2-ΔΔCt計(jì)算相對表達(dá)。

1.2.7 Western blot檢測IFN-γ蛋白表達(dá)取蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)至PVDF膜，5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，TBST洗膜3次，5 min/次，加入一抗4℃搖床孵育過夜。TBST洗膜3次，10 min/次，二抗室溫?fù)u床封閉1 h，TBST洗膜3次，10 min/次，顯影曝光，Image J軟件進(jìn)行灰度定量分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以±s表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鼻炎組與正常組miR-155、miR-326、IL-2、IL-4、IFN-γmRNA表達(dá)RT-qPCR結(jié)果顯示，與正常組相比，鼻炎組miR-155、miR-326表達(dá)升高（P＜0.05），分別是正常組的1.66、2.69倍；IFN-γ表達(dá)下降（P＜0.05），是正常組的0.59倍（表1）。

2.2 維吾爾族、漢族鼻炎組相關(guān)基因表達(dá)維吾爾 族 與 漢 族miR-155、miR-326、IL-2、IL-4、IFN-γ mRNA基因表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但維吾爾族患者Th2細(xì)胞因子IL-4表達(dá)低于漢族患者，是漢族患者的0.51倍（表2）。

2.3 維吾爾族、漢族正常組相關(guān)基因表達(dá)正常組維吾爾族miR-326表達(dá)是漢族的3.6倍，IL-4是漢族的0.53倍（P＜0.05，表3）。

2.4 鼻炎組miR-326與IFN-γ表達(dá)相關(guān)性分析Spearman相關(guān)性分析顯示，鼻炎患者miR-155、miR-326表 達(dá) 與IFN-γ表 達(dá) 呈 負(fù) 相 關(guān)（r=-0.205，r=-0.225，P=0.005，P=0.002）。

2.5 miRNA在動物模型鼻黏膜中的表達(dá)AR患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞miR-326、miR-155表達(dá)存在差異，與IFN-γ表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，其中AR患者miR-326表達(dá)是正常組的2倍以上，且與IFN-γ表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。為研究其在鼻黏膜中的表達(dá)及與甲基化的關(guān)系，本研究以甲基化酶抑制劑5-Aza干預(yù)AR大鼠模型，檢測大鼠鼻黏膜中miR-326、IFN-γ表達(dá)，發(fā)現(xiàn)模型組miR-326表達(dá)升高，干預(yù)后表達(dá)下降，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型組IFN-γ表達(dá)顯著下降，甲基化酶抑制劑干預(yù)后其表達(dá)顯著提高（表4）。

表1 鼻炎組和正常組miR-155、miR-326、IL-2、IL-4、IFN-γmRNA表達(dá)（±s）Tab.1 mRNA expressions of miR-155，miR-326，IL-2，IL-4 and IFN-γin rhinitis group and normal group（±s）

表1 鼻炎組和正常組miR-155、miR-326、IL-2、IL-4、IFN-γmRNA表達(dá)（±s）Tab.1 mRNA expressions of miR-155，miR-326，IL-2，IL-4 and IFN-γin rhinitis group and normal group（±s）

GroupsnmiR-155miR-326IL-2IL-4IFN-γ AR（△CT）856.68±1.285.93±1.079.53±3.3310.79±2.369.01±2.35 Norma（l△CT）977.41±1.987.36±2.319.43±3.8410.69±2.018.25±2.29 AR/Norma（l2-ΔΔCt）1.662.690.930.950.59 t 2.8985.249-0.179-0.288-2.195 P 0.0040.0000.8570.7740.029

表2 維吾爾、漢族鼻炎組miR-155、miR-326、IL-2、IL-4、IFN-γmRNA表達(dá)（±s）Tab.2 mRNA expressions of miR-155，miR-326，IL-2，IL-4 and IFN-γin Uygur and Han rhinitis groups（±s）

表2 維吾爾、漢族鼻炎組miR-155、miR-326、IL-2、IL-4、IFN-γmRNA表達(dá)（±s）Tab.2 mRNA expressions of miR-155，miR-326，IL-2，IL-4 and IFN-γin Uygur and Han rhinitis groups（±s）

GroupsnmiR-155miR-326IL-2IL-4IFN-γ Han（△CT）Uygur（△CT）Uygur/Han（2-ΔΔCt）t P 53 32 6.84±1.31 6.43±1.23 1.33 1.423 0.158 5.95±1.06 5.89±1.10 1.04 0.253 0.798 9.42±3.53 9.70±3.01 0.82-0.382 0.703 10.42±2.30 11.39±2.37 0.51-1.859 0.067 8.97±2.68 9.01±1.72 0.97-0.165 0.870

表3 維、漢民族正常組miR-155、miR-326、IL-2、IL-4、IFN-γmRNA表達(dá)（±s）Tab.3 mRNA expressions of miR-155，miR-326，IL-2，IL-4 and IFN-γin normal group of Uggur and Han nationality（±s）

表3 維、漢民族正常組miR-155、miR-326、IL-2、IL-4、IFN-γmRNA表達(dá)（±s）Tab.3 mRNA expressions of miR-155，miR-326，IL-2，IL-4 and IFN-γin normal group of Uggur and Han nationality（±s）

Groups Han（△CT）Uygur（△CT）Uygur/Han（2-ΔΔCt）t P n 56 41 miR-155 7.63±2.27 7.11±1.46 1.43 1.272 0.206 miR-326 8.14±2.55 6.29±1.36 3.60 4.230 0.000 IL-2 9.65±4.66 9.13±2.33 1.43 0.656 0.513 IL-4 10.31±1.98 11.22±1.96 0.53-2.262 0.026 IFN-γ 7.96±2.56 8.65±1.82 0.61-1.481 0.142

表4 5-Aza干預(yù)AR大鼠模型miR-326及IFN-γmRNA表達(dá)（±s）Tab.4 mRNA expressions of miR-326 and IFN-γin AR rat model after 5-Aza intervention（±s）

表4 5-Aza干預(yù)AR大鼠模型miR-326及IFN-γmRNA表達(dá)（±s）Tab.4 mRNA expressions of miR-326 and IFN-γin AR rat model after 5-Aza intervention（±s）

Note：1）P＜0.05 vs normal group.

Groups Normal AR 5-Aza intervention miR-326 1.04±0.42 1.28±0.91 1.06±0.65 IFN-γ 1.02±0.24 0.22±0.061）1.36±0.17

表5 5-Aza干預(yù)后Jurkat細(xì)胞miR-326、miR-155及IFN-γ mRNA、蛋白表達(dá)（±s）Tab.5 mRNA and protein expressions of miR-326，miR-155 and IFN-γin Jurkat cells after 5-Aza intervention（±s）

表5 5-Aza干預(yù)后Jurkat細(xì)胞miR-326、miR-155及IFN-γ mRNA、蛋白表達(dá)（±s）Tab.5 mRNA and protein expressions of miR-326，miR-155 and IFN-γin Jurkat cells after 5-Aza intervention（±s）

Note：1）P＜0.05，2）P＜0.01 vs normal group.

Groups Normal 5-Aza（0.25μm/ml）5-Aza（1μm/ml）miR-326 1.04±0.34 1.96±0.401）1.34±0.33 miR-155 1.05±0.40 4.30±2.012）2.22±0.82 IFN-γ mRNA 1.00±0.11 1.34±0.21 1.55±0.321）IFN-γ protein 1.09±0.16 0.45±0.042）0.89±0.09

2.6 Jurkat細(xì) 胞miR-326表 達(dá) 為探討miR-326差異表達(dá)及甲基化干預(yù)在鼻黏膜和T細(xì)胞中的作用，本研究以甲基化酶抑制劑5-Aza干預(yù)外周血Jurkat細(xì)胞，檢測miR-326及IFN-γ表達(dá)，發(fā)現(xiàn)甲基化酶抑制劑干預(yù)后miR-326表達(dá)呈上升趨勢，隨著甲基化酶抑制劑干預(yù)濃度上升而下降；IFN-γmRNA表達(dá)略有上升，但其蛋白表達(dá)下降，這種下降趨勢隨著甲基化酶抑制劑干預(yù)濃度上升有所減弱，說明甲基化酶抑制劑干預(yù)可上調(diào)miR-326及IFN-γmRNA表達(dá)，下調(diào)IFN-γ蛋白表達(dá)。5-Aza（0.25μm/ml）干預(yù)組中，miR-326表達(dá)上調(diào)時，IFN-γ蛋白表達(dá)明顯下降，5-Aza（1μm/ml）組，miR-326表達(dá)下降時，IFN-γ蛋白表達(dá)上升，與課題組在鼻炎患者中發(fā)現(xiàn)miR-326表達(dá)與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)結(jié)論一致。5-Aza干預(yù)后，Jurkat細(xì)胞IFN-γmRNA表達(dá)略有上升與其蛋白表達(dá)下降結(jié)論相反，提示5-Aza干預(yù)后存在轉(zhuǎn)錄后修飾（表5、圖1）。

圖1 5-Aza干預(yù)后Jurkat細(xì)胞miR-326、miR-155及IFN-γ mRNA、蛋白表達(dá)Fig.1 Expressions of miR-326，miR-155，IFN-γmRNA and protein in Jurkat cells interfered by 5-Aza

3 討論

AR是特定個體接觸抗原后，在多種炎癥因子趨化作用下，以Th2型免疫應(yīng)答為基礎(chǔ)的變應(yīng)性炎癥性疾病，是目前世界上常見的非傳染性慢性上呼吸道疾病之一［11］。T細(xì)胞在免疫應(yīng)答中具有重要作用，按照CD分子表達(dá)不同可分為CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞。CD4+T細(xì)胞也稱T輔助細(xì)胞（T helper cell，Th），可協(xié)調(diào)免疫應(yīng)答并參與細(xì)胞活化信號傳遞。根據(jù)Th0分泌的細(xì)胞因子不同，Th細(xì)胞可分為Th1、Th2、Th17及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）4個亞群。Th1參與細(xì)胞免疫，主要分泌IL-2、IL-12及IFN-γ等細(xì)胞因子，抑制Th2類細(xì)胞特征因子產(chǎn)生；Th2參與體液免疫，主要分泌IL-4、IL-5、IL-9、IL-13等細(xì)胞因子，IL-4是特異性細(xì)胞因子，誘導(dǎo)IgE生成及嗜酸性細(xì)胞、肥大細(xì)胞成熟。正常情況下，Th1/Th2類細(xì)胞因子互相依存和制約，保持動態(tài)平衡，當(dāng)機(jī)體受到外來異?？乖碳r，上述平衡被打破，Th1、Th2細(xì)胞中Th2亞群功能升高，Th1亞群功能降低，引起異常免疫應(yīng)答。本研究中鼻炎組Th1細(xì)胞因子IFN-γ mRNA表達(dá)低于對照組（P＜0.05），但I(xiàn)l-2及IL-4表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明在本研究病例中Th1/Th2細(xì)胞平衡失調(diào)主要表現(xiàn)為Th1亞群功能降低。鼻炎組及正常組維吾爾族IL-4 mRNA表達(dá)是漢族的0.51和0.53倍（P＜0.05），其余各基因表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示IL-4在維吾爾族正常人群低表達(dá)可能是其AR患病率低的因素之一。

研究表明，差異表達(dá)的miRNA及其靶基因功能包括參與氧化應(yīng)激反應(yīng)、釋放炎癥遞質(zhì)、免疫細(xì)胞功能和反應(yīng)調(diào)控等［12］。miRNA在AR中表現(xiàn)出特定特征，具有重要調(diào)控作用［13］。miR-155目前研究較多，在適應(yīng)性免疫細(xì)胞（包括效應(yīng)T細(xì)胞亞群）發(fā)育和激活中發(fā)揮作用，參與造血細(xì)胞分化、免疫、血管重塑以及炎癥信號通路等調(diào)控，被認(rèn)為參與AR發(fā)?。?1，14］。鼻炎組miR-155表 達(dá)高于對照組（P＜0.05），與艾宏輝等［15］在鼻炎中的研究結(jié)論一致，miR-155影響CD4+T細(xì)胞向Th1/Th2細(xì)胞分化的平衡，miR-155缺乏將引起Th1細(xì)胞分化受阻，Th2細(xì)胞誘導(dǎo)增加［16］。本研究也發(fā)現(xiàn)AR組miR-155呈高表達(dá)，IFN-γ呈低表達(dá)，且二者呈負(fù)相關(guān)。

miR-326差異表達(dá)在AR中的研究較少，但與腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病密切相關(guān)［17-18］。鼻炎組外周血CD4+T細(xì)胞miR-326表達(dá)是對照組的2.69倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與IFN-γmRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。正常組中維吾爾族miR-326水平是漢族的3.5倍（P＜0.05），提示miR-326在AR發(fā)病機(jī)制中可能起重要調(diào)控作用。自身免疫性疾病研究發(fā)現(xiàn)，miR-326表達(dá)與Treg/Th17有關(guān)，可促進(jìn)Th17細(xì)胞分化，導(dǎo)致炎癥發(fā)生［19-20］。鼻炎組CD4+T細(xì)胞miR-326高表達(dá)，在正常組維吾爾族表達(dá)高于漢族，且與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)。為進(jìn)一步研究這種表達(dá)差異與甲基化的關(guān)系，本研究以甲基化酶抑制劑5-Aza干預(yù)AR模型大鼠，檢測大鼠鼻黏膜miR-326、INF-γ表達(dá)，發(fā)現(xiàn)模型組miR-326表達(dá)上升，與在人群中研究一致，但這種增高趨勢隨著甲基化酶抑制劑干預(yù)后下降，模型組IFN-γ表達(dá)顯著下降（P＜0.05），甲基化酶抑制劑干預(yù)后其表達(dá)顯著提高。甲基化酶抑制劑干預(yù)培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞后，miR-326表達(dá)呈上升趨勢，但隨著甲基化酶抑制劑干預(yù)濃度上升而下降；IFN-γ蛋白表達(dá)下降，這種下降趨勢隨著甲基化酶抑制劑干預(yù)濃度上升有所減弱，說明甲基化酶抑制劑干預(yù)可上調(diào)miR-326及IFN-γmRNA表達(dá)，下調(diào)IFN-γ蛋白表達(dá)。本研究分別在人、動物模型及培養(yǎng)的外周血淋巴細(xì)胞中檢測了miR-326表達(dá)，分析甲基化酶抑制劑干預(yù)對其的影響，結(jié)果顯示miR-326在鼻炎患者外周血CD4+T高表達(dá)，甲基化酶抑制劑干預(yù)Jurkat細(xì)胞后miR-326表達(dá)呈上升趨勢，AR模型中也發(fā)現(xiàn)miR-326在大鼠鼻黏膜中表達(dá)上升，與在患者外周血淋巴細(xì)胞中的研究一致。

綜上，新疆維吾爾族鼻炎患病率低于漢族，這種差異可能受長期環(huán)境因素與表觀遺傳學(xué)（如miRNA表達(dá)及甲基化等改變）有關(guān)，表現(xiàn)為維吾爾族人群miR-326高表達(dá)與IL-4低表達(dá)，病例組IFN-γ呈低表達(dá)，甲基化干預(yù)可調(diào)控T細(xì)胞miR-326及IFN-γ表達(dá)，但在鼻黏膜差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。miR-326表達(dá)與IFN-γmRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示miR-326可能通過影響Th2細(xì)胞因子產(chǎn)生導(dǎo)致Th1/Th2失衡，最終導(dǎo)致AR發(fā)生。AR發(fā)病率逐年升高，新疆漢族鼻炎患病率高于維吾爾族，嚴(yán)重影響患者日常生活及學(xué)習(xí)，本研究顯示新疆維吾爾族和漢族AR患者miR-326高表達(dá)主要發(fā)生于CD4+T淋巴細(xì)胞，這種高表達(dá)的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。