飼糧添加核黃素對(duì)1～21日齡馬岡鵝生長性能、血清生化指標(biāo)、抗氧化能力及腸道發(fā)育的影響

張 藝 汪 珩 陳建穎 劉書鋒 尹亞紅 趙玉潔 李 勝 王文策 朱勇文* 楊 琳*

(1. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東省動(dòng)物營養(yǎng)調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州510642；2.金錢飼料(東莞)有限公司，東莞523147)

核黃素，又稱為維生素B2，作為輔酶黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)和黃素單核苷酸(FMN)的前體發(fā)揮其生化功能，禽類飼料中的核黃素主要以FAD和FMN的形式存在。飼糧中添加核黃素不僅有助于促進(jìn)禽類生長發(fā)育[1]，同時(shí)對(duì)腸道發(fā)育和抗氧化性能也有積極作用[2-3]。在肉雞方面，Leiber等[4]推薦肉種雞及生長前期肉雞飼糧核黃素含量分別為6和8 mg/kg；阮棟等[5]發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)飼糧中添加3.0 mg/kg核黃素時(shí)，43～63日齡黃羽肉雞的生長性能及抗氧化性能最佳。在肉鴨方面，唐靜[6]以平均日增重為評(píng)定指標(biāo)，依據(jù)折線模型，估算出1～21日齡北京鴨核黃素需要量為10.59 mg/kg，且公鴨核黃素需要量略高于母鴨；張博[7]以種蛋孵化率等為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用直線-折線模型估測(cè)出種鴨核黃素需要量為3.92～7.84 mg/kg。NRC(1994)關(guān)于0～4周齡鵝核黃素的推薦量是3.8 mg/kg。目前國內(nèi)關(guān)于核黃素需要量的研究主要集中于雞、鴨上，而對(duì)于鵝核黃素需要量的研究相對(duì)缺乏，且不同品種肉鵝不同生長階段核黃素的需要量可能存在一定差異。因此，本研究以1～21日齡馬岡鵝為研究對(duì)象，通過在飼糧中添加不同水平的核黃素，探究其對(duì)馬岡鵝生長性能、血清生化指標(biāo)及腸道發(fā)育的影響，以期獲得生長前期馬岡鵝核黃素需要量，為肉鵝精準(zhǔn)飼糧配制提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

飼養(yǎng)試驗(yàn)在揭陽市華南農(nóng)業(yè)大學(xué)科研合作基地——金錢飼料(東莞)有限公司進(jìn)行。試驗(yàn)采用隨機(jī)分組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用體重相近、健康的1日齡馬岡鵝公鵝720只，隨機(jī)分成6組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只。6組試驗(yàn)鵝飼喂添加不同水平核黃素的飼糧，其中對(duì)照組肉鵝飼喂不添加核黃素的基礎(chǔ)飼糧(核黃素含量為2.48 mg/kg)，5個(gè)試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加2.6、5.2、10.4、20.8、41.6 mg/kg的核黃素(飼糧核黃素含量分別為5.08、7.68、12.88、23.28、44.08 mg/kg)。試驗(yàn)鵝采用籠養(yǎng)方式，按照常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫，自由采食和飲水。試驗(yàn)期為21 d(1～21日齡)。

1.2 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)所用基礎(chǔ)飼糧為玉米-大麥-豆粕型飼糧，參照NRC(1994)家禽營養(yǎng)需要推薦量及當(dāng)前我國馬岡鵝生產(chǎn)實(shí)際進(jìn)行配制。基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 生長性能指標(biāo)

于21日齡當(dāng)天08:00對(duì)試驗(yàn)鵝以重復(fù)為單位空腹稱重，試驗(yàn)期間以重復(fù)為單位記錄耗料量及增重，計(jì)算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3.2 血清生化指標(biāo)

于21日齡時(shí)，每個(gè)重復(fù)按平均體重選取1只試驗(yàn)鵝，采血前禁食12 h，頸靜脈采血，靜置30 min后，3 000 r/min離心10 min分離血清，-20 ℃保存。采用維生素B2酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒測(cè)定血清核黃素含量，試劑盒購于上海酶聯(lián)生物科技有限公司。血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量與天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定，參照說明書進(jìn)行操作。

1.3.3 血清抗氧化指標(biāo)

采用試劑盒測(cè)定血清中總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量、總超氧化物歧化酶(T-SOD)與谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，試劑盒均購于南京建成生物工程研究所，參照說明書進(jìn)行操作。

1.3.4 腸道發(fā)育及形態(tài)結(jié)構(gòu)

將十二指腸、空腸、回腸和盲腸中內(nèi)容物和脂肪剔除干凈后稱重，重量與活重之比即為該腸段的相對(duì)重量(g/kg)；將各腸段平鋪?zhàn)匀簧熘?，測(cè)量各腸段長度，長度與活重之比即為該腸段的相對(duì)長度(cm/kg)。

取十二指腸、空腸、回腸腸段中部相同位置約1.5 cm，用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗干凈，置于4%甲醛固定液中。蘇木精-伊紅(HE)染色切片及鏡像結(jié)果由武漢賽維爾生物科技有限公司提供。測(cè)量十二指腸、空腸、回腸絨毛高度和隱窩深度，并計(jì)算絨毛高度/隱窩深度(V/C)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

采用SAS 9.2軟件的GLM程序?qū)υ囼?yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，然后采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果以平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧添加核黃素對(duì)1～21日齡馬岡鵝生長性能的影響

由表2可知，飼糧核黃素添加水平對(duì)1～21日齡馬岡鵝的平均末重、平均日增重、平均日采食量和料重比均無顯著影響(P>0.05)。

表2 飼糧添加核黃素對(duì)1～21日齡馬岡鵝生長性能的影響

2.2 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝血清生化指標(biāo)的影響

2.2.1 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝部分血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，飼糧核黃素添加水平對(duì)21日齡馬岡鵝血清核黃素、ALB含量以及ALT、AST活性與AST/ALT均無顯著影響(P>0.05)。隨著飼糧核黃素添加水平的升高，馬岡鵝血清TP含量呈先降低后升高的趨勢(shì)，對(duì)照組血清TP含量最高，各試驗(yàn)組血清TP含量均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

2.2.2 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝血清脂質(zhì)代謝指標(biāo)的影響

由表4可知，飼糧核黃素添加水平對(duì)21日齡馬岡鵝血清HDL-C、LDL-C和TC含量均無顯著影響(P>0.05)。隨著飼糧核黃素添加水平的升高，血清TG含量呈先升高后降低的趨勢(shì)，核黃素添加水平為10.4及20.8 mg/kg時(shí)血清TG含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；對(duì)照組血清TG與LDL-C含量最低。

表3 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝部分血清生化指標(biāo)的影響

表4 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝血清脂質(zhì)代謝指標(biāo)的影響

2.3 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知，飼糧核黃素添加水平對(duì)21日齡馬岡鵝血清T-AOC、MDA含量、T-SOD與GSH-Px活性均無顯著影響(P>0.05)。隨著飼糧核黃素添加水平的升高，血清GSH-Px活性呈先上升后下降的趨勢(shì)，以對(duì)照組血清GSH-Px活性最低，MDA含量最高。

表5 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝腸道發(fā)育及形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

2.4.1 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝腸道發(fā)育的影響

由表6、表7可知，飼糧核黃素添加水平對(duì)21日齡馬岡鵝各腸段相對(duì)長度及空腸、盲腸和直腸相對(duì)重量均無顯著影響(P>0.05)。核黃素添加水平為2.6、5.2、20.8及41.6 mg/kg時(shí)十二指腸相對(duì)重量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。核黃素添加水平為20.8、41.6 mg/kg時(shí)回腸和總腸道相對(duì)重量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

表6 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝腸道相對(duì)長度的影響

表7 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝腸道相對(duì)重量的影響

2.4.2 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表8可知，飼糧核黃素添加水平對(duì)21日齡馬岡鵝十二指腸隱窩深度、空腸絨毛高度及回腸形態(tài)結(jié)構(gòu)均無顯著影響(P>0.05)。核黃素添加水平為20.8和41.6 mg/kg時(shí)十二指腸絨毛高度、絨毛高度/隱窩深度均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)?？漳c隱窩深度在10.4 mg/kg組最高，顯著高于其他各組(P<0.05)。空腸絨毛高度/隱窩深度在20.8 mg/kg組最高，顯著高于其他各組(P<0.05)。

表8 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

3 討 論

3.1 飼糧添加核黃素對(duì)1～21日齡馬岡鵝生長性能的影響

飼糧核黃素缺乏會(huì)影響家禽的生長性能。在肉雞方面，當(dāng)飼糧中添加適量的核黃素時(shí)，有助于提高肉雞的生長性能，隨著核黃素添加水平的升高，肉雞生長性能呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)[1,8]，但低水平的核黃素(2.5 mg/kg)并不影響肉雞生長，也不會(huì)表現(xiàn)出核黃素缺乏癥狀[4]。在肉鴨方面，唐靜[6]的研究表明，飼糧中核黃素缺乏會(huì)顯著降低1～21日齡北京鴨的生長性能；而Zhang等[9]的研究則發(fā)現(xiàn)，核黃素缺乏對(duì)14周齡種鴨的體重和生產(chǎn)性能無顯著影響。由此可見，核黃素對(duì)家禽生長性能的影響與動(dòng)物日齡、基礎(chǔ)飼糧核黃素含量及其添加水平有關(guān)。目前關(guān)于生長前期肉鵝核黃素需要量的研究較少，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧核黃素添加水平對(duì)1～21日齡馬岡鵝終末均重、平均日增重、平均日采食量及料重比均無顯著影響。而研究表明，肉鵝盲腸絕對(duì)長度及重量均大于肉雞和肉鴨[10]，肉鵝盲腸相對(duì)于肉雞和肉鴨更發(fā)達(dá)。并且，除飼糧來源外，腸道菌群是核黃素的另一重要來源，研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)物腸道中擬桿菌門、厚壁菌門以及變形菌綱中存在大量可以合成核黃素的微生物[11]，因此推測(cè)基礎(chǔ)飼糧中含有的核黃素以及腸道菌群所提供的核黃素可能已經(jīng)滿足了馬岡鵝雛鵝階段生長所需。上述結(jié)果提示，相對(duì)肉雞和肉鴨來說，生長前期肉鵝對(duì)于核黃素營養(yǎng)缺乏相對(duì)不敏感。本試驗(yàn)條件下，飼喂不同添加水平核黃素飼糧的馬岡鵝生長性能無顯著差異，說明額外添加核黃素可能對(duì)鵝生長發(fā)育沒有產(chǎn)生影響。

3.2 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝血清生化指標(biāo)的影響

研究發(fā)現(xiàn)，飼糧核黃素水平顯著影響蛋鴨血漿核黃素含量[12]，而本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧添加不同水平核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝血清核黃素含量無顯著影響，這可能是由于肉鵝的卵黃囊較大，能夠依靠內(nèi)源性卵黃囊營養(yǎng)維持前期營養(yǎng)需要[13]。血清生化指標(biāo)中的ALT和AST活性可在一定程度上反映機(jī)體肝臟生理功能和營養(yǎng)代謝狀況。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧添加不同水平核黃素后，21日齡馬岡鵝血清ALT、AST活性沒有發(fā)生顯著變化，說明血漿ALT和AST活性可能不是反映鵝核黃素需要量的敏感標(biāo)志物。研究表明，飼糧核黃素水平對(duì)生長育肥豬血漿AST活性無顯著影響[14]，Bian等[15]的試驗(yàn)也表明，小鼠血清ALT和AST活性在核黃素缺乏時(shí)沒有顯著升高，與本研究結(jié)果一致。TP由ALB和球蛋白(GLB)組成，在機(jī)體中發(fā)揮重要的生理功能[16]。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著飼糧核黃素添加水平的升高，馬岡鵝血清TP含量呈先降低后升高的趨勢(shì)，對(duì)照組血清TP含量最高，說明核黃素缺乏可能影響了蛋白質(zhì)的代謝。血清HDL-C、LDL-C、TC和TG含量能反映血清脂質(zhì)代謝情況，核黃素添加水平可能會(huì)影響機(jī)體脂質(zhì)代謝[17]。Bian等[15]研究發(fā)現(xiàn)，核黃素缺乏(飼糧核黃素含量為3 mg/kg)顯著降低了大鼠血漿中LDL-C和TG含量。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著飼糧核黃素添加水平的升高，血清TG含量呈先上升后下降的趨勢(shì)，但對(duì)血清TC、LDL-C、HDL-C含量均無顯著變化。上述結(jié)果說明馬岡鵝血清中不同脂質(zhì)代謝指標(biāo)對(duì)于飼糧核黃素添加水平呈現(xiàn)不同的劑量效應(yīng)。

3.3 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝血清抗氧化指標(biāo)的影響

核黃素具有抗氧化和抑制脂質(zhì)過氧化的作用[18]，其機(jī)制可能歸因于谷胱甘肽氧化還原循環(huán)機(jī)制[3]。核黃素可以提高超氧化物歧化酶(SOD)活性，通過激活SOD發(fā)揮抗氧化作用[19]。Wang等[20]對(duì)大鼠和唐靜[21]對(duì)21日齡北京鴨的研究均表明，核黃素能增強(qiáng)血清SOD活性，降低血清脂質(zhì)過氧化水平，減少脂質(zhì)過氧化物MDA的形成。Zhang等[22]研究發(fā)現(xiàn)，未添加核黃素組蛋鴨血漿MDA含量最高，GSH含量、T-SOD活性和T-AOC最低。而王爽等[12]的研究表明，隨著籠養(yǎng)蛋鴨飼糧核黃素水平的升高，血清GSH-Px活性呈先升高后下降的趨勢(shì)，但各組差異不顯著。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧核黃素添加水平對(duì)21日齡馬岡鵝血清抗氧化指標(biāo)無顯著影響，說明飼糧核黃素添加水平對(duì)馬岡鵝機(jī)體的抗氧化性能沒有產(chǎn)生顯著影響，基礎(chǔ)飼糧中所含核黃素可能已經(jīng)滿足了肉鵝發(fā)揮抗氧化能力的需要。

3.4 飼糧添加核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝腸道發(fā)育及形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

腸道的主要功能是攝取、消化和吸收營養(yǎng)物質(zhì)，以支持動(dòng)物的生長和生理功能，同時(shí)保護(hù)有機(jī)體免受腸腔內(nèi)有害化合物的侵害[23]。小腸是營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的主要場(chǎng)所，各腸段長度及重量反映了腸段的生長發(fā)育程度[24]。在本試驗(yàn)條件下，與對(duì)照組相比，飼糧中添加不同水平核黃素對(duì)21日齡馬岡鵝空腸、盲腸和直腸相對(duì)重量無顯著影響，但降低了十二指腸、回腸和總腸道相對(duì)重量，具體原因有待進(jìn)一步研究。腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)可以反映小腸消化吸收功能的強(qiáng)弱，絨毛高度、隱窩深度及絨毛高度/隱窩深度反映腸道組織形態(tài)，與腸道營養(yǎng)物質(zhì)的吸收密切相關(guān)，而絨毛高度可以反映腸道與營養(yǎng)物質(zhì)接觸的面積，較高的絨毛高度通常被認(rèn)為能夠更好地吸收可用的營養(yǎng)物質(zhì)[25]。本試驗(yàn)中，隨著飼糧核黃素添加水平的升高，除個(gè)別組外，十二指腸與空腸的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度整體呈先升高后下降的趨勢(shì)，20.8 mg/kg組顯著高于對(duì)照組，腸道絨毛高度增加、絨毛高度與隱窩深度提高表明近端小腸的消化和吸收能力普遍增加[26]。因此，飼糧添加適量核黃素能夠改善馬岡鵝的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，促進(jìn)腸道發(fā)育。

4 結(jié) 論

綜上所述，飼糧添加核黃素對(duì)1～21日齡馬岡鵝的生長性能及抗氧化能力無顯著影響，但可改善21日齡馬岡鵝的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。因此，本試驗(yàn)中，在籠養(yǎng)條件下，1～21日齡馬岡鵝玉米-大麥-豆粕型飼糧中無需額外添加核黃素，即飼糧核黃素含量不低于2.48 mg/kg即可。