蜜升麻配方顆粒的制備工藝和鑒別研究

張 鵬，馮佳怡，孫 浩，譚文紅，劉 錄

(1.云南中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，云南 昆明 650500; 2.華潤現(xiàn)代中藥(昆明)有限公司,云南 昆明 652200)

中藥升麻的記載最早見于漢代《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]，主產(chǎn)于四川、青海、陜西、云南、東北等地，是我國傳統(tǒng)中藥材.升麻又名綠升麻(湖北，云南)，為毛茛科升麻屬植物大三葉升麻CimicifugaheracleifoliaKom、興安升麻Cimicifugadahurica(Turcz.)Maxim或升麻CimicifugafoetidaL的干燥根莖.秋季采挖，除去泥沙，曬至須根干時，燎去或除去須根，曬干[2].其中除去酚酸類化合物及其衍生物外，升麻主要化學(xué)成分為三萜類化合物，還含有少量的色原酮、生物堿、揮發(fā)油及其他類成分[3-8].現(xiàn)代藥理研究表明升麻具有抗病毒、抗炎、抗腫瘤、抗骨質(zhì)疏松等藥理作用[9].升麻的炮制主要有炒制、蜜制、酒制及升麻炭等[10]，以升麻的蜜制最早在東晉時期《肘后備急方》[11]中有“蜜煎，并數(shù)數(shù)食之”的記載.升麻作為中藥“生熟異治”的代表品種，現(xiàn)代臨床應(yīng)用中多以生品和蜜炙品入藥，生品取其長于透疹解表、清熱解毒之功，蜜炙品常用于中氣虛弱的短氣乏力、倦怠、脫肛、子宮脫垂等癥狀[2]，在緩和散風(fēng)作用的同時增強(qiáng)提中氣作用，并減少對胃的刺激[12].目前，有關(guān)蜜升麻配方顆粒的研究文獻(xiàn)及期刊均較少，從臨床應(yīng)用范圍上看，其有效成分、性味、歸經(jīng)、主治、功效和傳統(tǒng)中藥飲片完全一致，保持了傳統(tǒng)中藥飲片的全部特征，既能保證中醫(yī)傳統(tǒng)的君、臣、佐、使和辨證論治、靈活加減的特點(diǎn)，優(yōu)于中成藥，又免去了病人傳統(tǒng)煎煮的麻煩，同時還可靈活的單味顆粒沖服，衛(wèi)生有效，大大地促進(jìn)中醫(yī)急癥醫(yī)學(xué)的發(fā)展.然而中藥配方顆粒[13-15]自問世以來，經(jīng)過十多年的研究改進(jìn)與臨床應(yīng)用，產(chǎn)品質(zhì)量不斷提高，并逐步趨于穩(wěn)定.

為更好地開發(fā)與利用蜜升麻，同時發(fā)揮配方顆粒使用方便的優(yōu)勢，本實(shí)驗(yàn)通過現(xiàn)代工藝技術(shù)與方法，篩選出蜜升麻配方顆粒的最佳的制備工藝，并優(yōu)化了提取、干燥等參數(shù)，利用TLC分析方法對蜜升麻提取物和配方顆粒進(jìn)行了鑒別研究，為蜜升麻的質(zhì)量控制提供依據(jù).

1 儀器與材料

1.1 儀器

分析天平(賽多利斯BSA124S)；天平(上海菁海儀器有限公司FA2104N)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(東京理華EYELA N-1100)；紫砂煎藥壺(潮州市潮安區(qū)康雅順45U2)；電子分析天平(島津 AUW120D)；PL202-S型電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；恒溫水浴鍋(HH-S24s數(shù)顯恒溫水浴鍋)；冷凍干燥機(jī)(北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司FD-1A-50)；循環(huán)水式真空泵(SHZ-D(Ⅲ) 鞏義市英裕予華儀器廠)；數(shù)顯恒溫水浴鍋(8002 北京水光明醫(yī)療儀器廠)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(101-2ABA 天津市泰斯特儀器有限公司)；FA2104N天平(上海菁海儀器有限公司)

1.2 試劑

蜜升麻藥材經(jīng)煎煮2次后合并濾液，濃縮干燥即得蜜升麻配方顆粒提取物.蜜升麻配方顆粒提取物(20200801、20200802、20200803)，蜜升麻配方顆粒(2008001Y、2008002Y、2008003Y)，對照藥材：升麻(興安升麻)(批號：121182-201102，中國食品藥品檢定研究院)，環(huán)己烷、乙酸乙酯、冰醋酸均為分析純，購自天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，水為超純水.

1.3 試藥

15批蜜升麻飲片由華潤現(xiàn)代中藥(昆明)有限公司提供，經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)楊竹雅博士鑒定為毛茛科升麻屬藥用植物CimicifugafoetidaL的干燥根莖.

2 蜜升麻標(biāo)準(zhǔn)湯劑

2.1 蜜升麻標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備

取蜜升麻飲片約 100 g，置砂鍋中，加入 1 000 mL 去離子水浸泡 30 min，先武火煮沸，再文火煎煮 30 min，200目濾布趁熱過濾，藥渣再加 800 mL 去離子水，武火煮沸后，再文火煎煮 25 min，200目濾布趁熱過濾，合并2次濾液，稱取濾液重量；經(jīng)減壓低溫(65 ℃)濃縮至料液比接近1∶1濃浸膏，置于冷凍干燥機(jī)中，冷凍干燥(-82 ℃，0 MPa)至干，取出，粉碎成粉末，稱重，即得蜜升麻飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑(凍干粉).

2.2 標(biāo)準(zhǔn)湯劑指標(biāo)檢測方法

2.2.1 出膏率

取水煎液約 20 g，精密稱定，置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴鍋蒸干，置 105 ℃ 電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥 3 h，移至干燥器中，冷卻 30 min，稱重.

計算水煎液含固量，并根據(jù)水煎液總重量和飲片重量換算出膏率.

2.2.2 浸出物

“標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉”為飲片經(jīng)水提取、濃縮、干燥制備而成，其多含極性大分子成分，計劃采用95%乙醇作為提取溶劑測定浸出物含量.參考《中國藥典》(2020年版四部)通則2201 進(jìn)行測定.

2.2.3 水分

檢測方法：參考中國藥典(2020年版四部) 通則0832 第二法.

2.3 標(biāo)準(zhǔn)湯劑應(yīng)用研究

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)湯劑檢測結(jié)果

將15批蜜升麻飲片制備成標(biāo)準(zhǔn)湯劑，每批飲片平行制備2份，測定15批次“標(biāo)準(zhǔn)湯劑”的得率，按“2.2.2 浸出物”測定浸出物，并按照《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》的要求，規(guī)定“標(biāo)準(zhǔn)湯劑”得率范圍.各批次飲片的得率以及浸出物，及規(guī)定的“標(biāo)準(zhǔn)湯劑”范圍如下表所示.

由表1可知，標(biāo)準(zhǔn)湯劑實(shí)測平均得率在14.8%～27.0%之間，平均得率為19.6%，SD為3.1%，得率平均值±30%的波動范圍為13.7%～25.4%.規(guī)定蜜升麻飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑(凍干粉)得率范圍為14.0%～25.0%；蜜升麻標(biāo)準(zhǔn)湯劑“凍干粉”實(shí)測平均浸出物含量在37.6%～53.6%之間，均值為44.8%，SD為3.9%.浸出物平均值±30%的波動范圍為31.3%～58.2%.規(guī)定蜜升麻標(biāo)準(zhǔn)湯劑(凍干粉)浸出物范圍為31.0%～58%，符合《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》要求.

表1 15批次蜜升麻飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑 %

3 蜜升麻配方顆粒研究

3.1 蜜升麻標(biāo)準(zhǔn)湯劑小試工藝

以蜜升麻飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性(出膏率，浸出物)為基準(zhǔn)，對中間體提取物和顆粒成品的不同制備工藝進(jìn)行全面評價，選擇出合適的制備工藝，使得到得蜜升麻配方顆粒和蜜升麻飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性基本一致.按照標(biāo)準(zhǔn)湯劑工藝選取20190517這一批次進(jìn)行加熱回流來模擬生產(chǎn)的封閉環(huán)境，將得到的數(shù)據(jù)列為表2.

表2 小試工藝 %

通過表2可知，模擬標(biāo)湯煎煮工藝標(biāo)準(zhǔn)湯劑與該批次標(biāo)準(zhǔn)湯劑得出膏率17.25%相比較沒有明顯提升，考慮到濃縮干燥的過程的損耗，需進(jìn)行煎煮時間考察.

3.2 蜜升麻煎煮時間考察

選取20190517批號地藥材進(jìn)行蜜升麻煎煮時間的研究，考察不同工藝下蜜升麻出膏率和浸出物含量(工藝1：60/60 min；工藝2：60/30 min).第1次加入飲片重量10倍的水，浸泡 30 min，之后開始加熱到達(dá)微沸，沸騰 60 min，用200目的紗布過濾得到的濾液；第2次加入飲片重量8倍的水進(jìn)行煎煮，達(dá)到沸騰，繼續(xù)煎煮不同時間，用紗布過濾合并2次濾液,得到的數(shù)據(jù)列為表3.

表3 煎煮時間考察 %

通過表3可知， 蜜升麻 60 min 的出膏率高于 30 min 的出膏率；浸出物含量也是 60 min 高于 30 min，所以可以將蜜升麻的煎煮時間定為1煎 60 min；2煎 60 min.

3.3 蜜升麻配方顆粒提取工藝驗(yàn)證

對確定的蜜升麻配方顆粒提取工藝(取蜜升麻飲片 100 g，加入10倍量去離子水浸泡 30 min，加熱提取 60 min，濾過，濾液備用，再加8倍量去離子水加熱提取 60 min，濾過，合并濾液)進(jìn)行驗(yàn)證，平行試驗(yàn)3次，并且檢測各樣品溶液出膏率、浸出物.檢測結(jié)果如下表所示.

由表4研究數(shù)據(jù)可知，同一批飲片通過平行試驗(yàn)3次，得到的溶液的出膏率、浸出物的結(jié)果基本一致，說明了該提取工藝穩(wěn)定可行，具有較好的重現(xiàn)性.

表4 提取工藝驗(yàn)證中樣品各指標(biāo)檢測結(jié)果 %

3.4 蜜升麻配方顆粒制備工藝

取蜜升麻飲片 3 000 g，加水煎煮2次，第1次加10倍水浸泡 30 min，煎煮 60 min，濾過，第2次加8倍水，煎煮 60 min，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度1.06～1.12 g/mL(65±5)℃的流膏，干燥(干浸膏出膏率為14.0%～25.0%)，加輔料適量，混勻，制粒，制成 1 000 g，分裝，即得.

3.5 蜜升麻配方顆粒干燥工藝考察

3.5.1 干燥輔料比例考察(流膏制備及檢測)

選取20190517批號的蜜升麻飲片 200 g，進(jìn)行煎煮；第1次加入飲片重量10倍的水，浸泡 30 min，之后開始加熱到達(dá)微沸，沸騰 60 min，用200目的紗布過濾得到的濾液；第2次加入飲片重量8倍的水進(jìn)行煎煮，達(dá)到沸騰，繼續(xù)煎煮 60 min，用紗布過濾合并2次濾液，濾液濃縮，取濃縮液，精密稱定，置已恒重蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，置 105 ℃ 烘箱中干燥 3 h，取出置干燥器中冷卻 0.5 h，迅速稱定重量.將得到數(shù)據(jù)列為表5.

表5 理論出膏率

3.5.2 不同干燥輔料比例考察

由于蜜升麻飲片流膏出膏率較高并且有一定含糖量，在干燥時必須添加一定的輔料才可以順利干燥，確保干燥出的配方顆粒提取物粉末的質(zhì)量.中藥配方顆粒制備工藝一般使用輔料麥芽糊精，因此對蜜升麻流膏干燥添加輔料量進(jìn)行考察.

將上述剩余的濃縮藥液平均分成3份，分別加入0 %、5 %、10 %的麥芽糊精，精密稱定，置已恒重蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，置105 ℃烘箱中干燥 3 h，取出置干燥器中冷卻 0.5 h，迅速稱定重量，將得到的數(shù)據(jù)列為表6；干燥過程檢測結(jié)果列為表7.

表6 干燥添加輔料量試驗(yàn)結(jié)果

表7 干燥輔料考察結(jié)果

由上表可知，添加輔料后浸出物含量不斷下降.結(jié)合干燥輔料考察結(jié)果，因此暫定干燥添加6.3%輔料.

3.5.3 干燥工藝驗(yàn)證考察

選取20190517批號的蜜升麻飲片，按照干燥工藝考察結(jié)果進(jìn)行3批驗(yàn)證.輔料添加比例為6.3%，具體結(jié)果見表8.

表8 蜜升麻配方顆粒干燥工藝驗(yàn)證濃縮液檢測數(shù)據(jù) %

由以上數(shù)據(jù)可知，干燥添加6.3%輔料，干粉狀態(tài)較好，出膏率和浸出物含量與考察結(jié)果基本一致，表明干燥工藝可行.

3.5.4 蜜升麻配方顆粒干燥工藝的確定

根據(jù)《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》，結(jié)合華潤三九醫(yī)藥股份有限公司以往配方顆粒生產(chǎn)的濃縮工藝參數(shù)，最終確定蜜升麻配方顆粒生產(chǎn)過程中，干燥方式為噴霧干燥，干燥過程中添加輔料比例為6.3%，即：流膏密度1.06～1.12 g/mL，噴霧干燥參數(shù)(噴霧干燥進(jìn)口溫度160～200 ℃，出口溫度80～110 ℃)

4 蜜升麻薄層鑒別

4.1 蜜升麻配方顆粒提取物薄層鑒別方法

結(jié)合文獻(xiàn)方法與《中國藥典》蜜升麻【鑒別】項(xiàng)下方法，建立蜜升麻配方顆粒提取物的薄層鑒別方法.方法如下：

取本品 0.2 g，加甲醇 50 mL，超聲處理 30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?1 mL 使溶解，作為供試品溶液.另取升麻對照藥材1 g，加水 50 mL，煮沸 30 min，濾過，濾液蒸干，同法制成對照藥材溶液.照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各 5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以(體積比)環(huán)己烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸=8∶4∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰.供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn).

4.2 溶液的配制

4.2.1 供試品的制備

取本品 0.2 g，加甲醇 50 mL，超聲處理 30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?1 mL 使溶解，作為供試品溶液.

4.2.2 參照物的制備

另取升麻對照藥材 1 g，加水 50 mL，煮沸 30 min，濾過，濾液蒸干，同4.2.1方法制成對照藥材溶液.

4.2.3 陰性對照溶液的制備

取麥芽糊精粉末 0.2 g，同4.2.1方法處理，作為陰性對照溶液.

4.2.4 不同點(diǎn)樣量考察和專屬性考察

按照上述薄層色譜條件，分別吸取蜜升麻配方顆粒提取物溶液1、3、5及 7 μL，對照藥材和陰性對照 5 μL，點(diǎn)于薄層板上，按上述薄層色譜展開、取出、晾干，置碘蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1.

由圖1可見，蜜升麻配方顆粒提取物供試品色譜中，在與升麻對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性無干擾.根據(jù)斑點(diǎn)的分離度及清晰度，確定蜜升麻配方顆粒提取物供試品溶液、升麻對照藥材溶液的點(diǎn)樣量均為 5 μL.

圖1 不同點(diǎn)樣量考察結(jié)果

4.2.5 不同溫度、濕度、廠家薄層板考察

分別吸取蜜升麻配方顆粒提取物供試品溶液、升麻對照藥材溶液各 5 μL，點(diǎn)于不同溫度、濕度、不同廠家的硅膠G薄層板上，按上述薄層色譜條件，考察本品在不同溫度、濕度、不同廠家條件下薄層展開情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3.

由圖3可見，不同溫度、濕度、廠家生產(chǎn)薄層硅膠板，蜜升麻配方顆粒提取物色譜在與蜜升麻對照藥材色譜相應(yīng)的位置顯相同顏色的斑點(diǎn)，且色譜斑點(diǎn)分離效果都較好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同溫度、濕度、廠家薄層板對蜜升麻配方顆粒提取物薄層鑒別無顯著影響，該薄層鑒別方法的耐用性良好.

4.3 蜜升麻配方顆粒薄層鑒別

參考蜜升麻配方顆粒提取物薄層方法，建立蜜升麻配方顆粒的薄層鑒別方法.

4.3.1 溶液的制備

1) 供試品溶液的制備 取本品 0.2 g，同4.2.1方法制備供試品溶液.

2) 參照物溶液的制備 另取升麻對照藥材 1 g，加水 50 mL，煮沸 30 min，濾過，濾液蒸干，同4.2.1方法制成對照藥材溶液.

3) 陰性對照溶液的制備 取麥芽糊精 0.2 g，加甲醇 50 mL，超聲處理 30 min，同4.2.1方法操作，作為陰性對照溶液.

圖2 蜜升麻不同溫度、濕度、廠家薄層板鑒別色譜圖

4.3.2 不同點(diǎn)樣量考察和專屬性考察

按照上述薄層色譜條件，分別吸取蜜升麻配方顆粒供試品溶液1、3、5及 7 μL，對照藥材和陰性對照 5 μL，點(diǎn)于薄層板上，按上述薄層色譜條件展開、取出、晾干，置碘蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰.實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3.

由圖3可見，蜜升麻配方顆粒供試品色譜中，在與升麻對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性無干擾.根據(jù)斑點(diǎn)的分離度及清晰度，確定蜜升麻配方顆粒供試品溶液、升麻對照藥材溶液的點(diǎn)樣量均為 5 μL.

圖3 不同點(diǎn)樣量考察結(jié)果

4.3.3 不同溫度、濕度、廠家薄層板考察

分別吸取蜜升麻配方顆粒供試品溶液、升麻對照藥材溶液各 5 μL；點(diǎn)于不同溫度、濕度、不同廠家的硅膠G薄層板上，按上述薄層色譜條件，考察本品在不同條件下薄層展開情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖4.

圖4 蜜升麻不同溫度、濕度、廠家薄層板鑒別色譜圖

由圖4可見，不同溫度、濕度、廠家生產(chǎn)薄層硅膠板，蜜升麻配方顆粒色譜在與蜜升麻對照藥材色譜相應(yīng)的位置顯相同顏色的斑點(diǎn)，且色譜斑點(diǎn)分離效果都較好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同溫度、濕度、廠家薄層板對蜜升麻配方顆粒薄層鑒別無顯著影響，該薄層鑒別方法的耐用性良好.

5 結(jié)語

本研究優(yōu)化了蜜升麻配方顆粒制備涉及的提取、干燥和制劑等工藝的參數(shù).得到了各操作的單元的最佳工藝條件，其中蜜升麻配方顆粒的制備的最佳工藝為：煎煮前浸泡30 min，連續(xù)煎煮2次，60 min/次，加水量為第1次 1 000 mL、第2次 800 mL，添加的輔料比例為6.3%，完成蜜升麻配方顆粒的制備.同時本研究是在《中國藥典》2020年版一部中升麻鑒別方法基礎(chǔ)上的改進(jìn)，在開展研究前，筆者對藥典方法進(jìn)行了反復(fù)驗(yàn)證，藥典方法中展開劑為(體積比)環(huán)己烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸=7∶2∶1，本研究方法中展開劑為(體積比)環(huán)己烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸=8∶4∶0.5，顯色劑為碘蒸氣，改善了薄層色譜分離效果，顯色后斑點(diǎn)清晰，無擴(kuò)散現(xiàn)象.在此基礎(chǔ)上，研究還考察了不同廠家的薄層板、不同的供試品點(diǎn)樣量、環(huán)境溫濕度對薄層色譜的影響.結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該鑒別對薄層板無選擇性，環(huán)境溫度以 25 ℃ 為宜，濕度控制在30%～60%均可.

本次實(shí)驗(yàn)對蜜升麻配方顆粒制備工藝的探索試驗(yàn)，并對蜜升麻配方顆粒進(jìn)行了TLC鑒別，有效控制了蜜升麻配方顆粒質(zhì)量.為進(jìn)一步更好地開發(fā)與利用蜜升麻配方顆粒，奠定了良好的研究基礎(chǔ).