胃液病原微生物核酸檢測在早產(chǎn)兒早期感染診斷中的價值

劉瑾，龍運峰，羅勇，彭新平

(邵陽學(xué)院附屬第一醫(yī)院 新生兒科，湖南 邵陽，422000)

病原微生物感染是新生兒重癥監(jiān)護病房最常見的疾病之一[1]。早產(chǎn)兒感染病原微生物后通常病情發(fā)展快，很容易變成重癥感染，加之治療后易出現(xiàn)各種后遺癥，對新生兒的身心健康產(chǎn)生了嚴重的威脅[2]。血液病原微生物培養(yǎng)是早產(chǎn)兒感染的金標準，但是其存在陽性率低和結(jié)果滯后的缺點[3]。目前還沒有理想的診斷方法應(yīng)用在早產(chǎn)兒早期病原微生物感染上，急需尋找新的方法對早產(chǎn)兒早期病原微生物感染進行診斷并及時給予治療，提高早產(chǎn)兒病原微生物感染的治愈率。近年來，早產(chǎn)兒胃液病原微生物檢查對診斷早產(chǎn)兒是否有早發(fā)型病原微生物感染備受關(guān)注[4-5]。伴隨分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，PCR技術(shù)被引入到病原微生物學(xué)檢測中[6-7]。本研究分析胃液病原微生物核酸檢測在早產(chǎn)兒早期病原微生物感染中的檢測效果，比較早產(chǎn)兒胃液病原微生物核酸檢測與血液病原微生物培養(yǎng)的靈敏度和特異性，探討胃液病原微生物核酸檢測在早產(chǎn)兒早期感染診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

從2020年8月至2021年4月在邵陽學(xué)院附屬第一醫(yī)院新生兒重癥監(jiān)護病房中收集147例早產(chǎn)兒(胎齡<37周)，根據(jù)患兒的圍生期病史、住院后的臨床表現(xiàn)以及實驗室檢測結(jié)果分為感染組(92例)和非感染組(55例)。兩組胎齡、出生體重以及性別沒有明顯差異。兩組早產(chǎn)兒在出生1 h內(nèi)未開奶前收集胃液和血液進行病原微生物核酸檢測，同時進行血液病原菌培養(yǎng)與鑒定檢查，并記錄相對應(yīng)結(jié)果。參與者其父母對所有樣本的收集和檢查均知情并簽署知情同意書。本研究經(jīng)邵陽學(xué)院附屬第一醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 早產(chǎn)兒胃液收集方法

早產(chǎn)兒在出生后的1 h內(nèi)開奶前，將無菌胃管小心地置入早產(chǎn)兒胃部，用注射器收集胃液0.5 mL用于病原微生物核酸檢測。

1.3 血液病原微生物培養(yǎng)與鑒定

在無菌條件下進行操作，采集出生后1 h內(nèi)開奶前早產(chǎn)兒的股靜脈血1 mL，置于無菌培養(yǎng)瓶中，應(yīng)用全自動血培養(yǎng)儀器及相應(yīng)配套的血培養(yǎng)瓶(生物梅里埃)，對采集后的血液進行培養(yǎng)，若5 d內(nèi)檢測到細菌株則為陽性，5 d內(nèi)未檢測到細菌株則為陰性。同時采用法國梅里埃公司的API病原微生物鑒定系統(tǒng)對不同病原微生物株進行分析鑒定。菌株的培養(yǎng)、分離、鑒定均參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程(第4版)》的標準實施[8]。

1.4 胃液病原微生物核酸檢測

病原微生物基因分型檢測采用呼吸道病原體核酸檢測試劑盒(湖南圣湘生物科技股份有限公司)進行檢測，采用ABI7500熒光定量PCR(美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司，ABI)進行擴增定檢測。按照儀器和試劑盒說明書規(guī)范進行所有操作。為了保證檢測結(jié)果的準確性，每批實驗均設(shè)置陰、陽性對照。該病原微生物基因分型檢測試劑盒可對以下25種病原微生物核酸進行定性檢測：流感病毒、結(jié)核桿菌核酸、副流感病毒Ⅰ、人鼻病毒核酸、呼吸道腺病毒核酸、乙型流感病毒核酸、甲型流感病毒通用型核酸、金黃色葡萄球菌核酸、銅綠假單胞菌核酸、流感嗜血桿菌核酸、嗜肺軍團菌核酸、肺炎支原體核酸、百日咳桿菌核酸、肺炎克雷伯桿菌核酸、肺炎鏈球菌核酸、巨細胞病毒核酸、白色念珠菌核酸、鮑曼不動桿菌核酸、肺炎衣原體核酸、人偏肺病毒核酸、博卡病毒核酸、EB病毒核酸、耶氏肺孢子蟲核酸、呼吸道合胞病毒核酸、副流感病毒Ⅱ核酸。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料采用例(%)表示，比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 非感染組和感染組中病原微生物結(jié)果

采用血液病原微生物培養(yǎng)和胃液病原微生物核酸檢測，發(fā)現(xiàn)92例感染組樣本中分別有39例和58例陽性，55例非感染組樣本中分別有5例和2例陽性。檢測結(jié)果表明，感染組病原微生物感染比非感染組高，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(病原微生物培養(yǎng)：χ2=16.67，P<0.001；病原微生物核酸檢測：χ2=48.70，P<0.001)，見表1。

2.2 病原微生物核酸檢測的診斷價值

與臨床診斷相比，病原微生物核酸檢測的靈敏度和特異度為63.04%和96.36%；假陽性率和陽性率分別為3.64%和36.96%，見表2。與臨床診斷相比，病原微生物培養(yǎng)的靈敏度和特異度為42.39%和90.09%；假陽性率和陽性率分別為57.61%和9.09%，見表3。在非感染組中，病原微生物培養(yǎng)和病原微生物核酸檢測陽性樣本差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.610，P=0.435)。與病原微生物培養(yǎng)相比，感染組病原微生物核酸檢測發(fā)現(xiàn)的陽性樣本高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.37，P=0.004)。結(jié)果表明，病原微生物核酸檢測的效果要好于病原微生物培養(yǎng)的檢測效果。

表2 早產(chǎn)兒臨床診斷與核酸檢測對比

表3 早產(chǎn)兒臨床診斷與病原微生物培養(yǎng)對比

2.3 發(fā)生感染的早產(chǎn)兒病原微生物分布情況

92例早產(chǎn)兒中病原微生物培養(yǎng)有39例出現(xiàn)陽性感染，病原微生物核酸檢測也均為陽性，而病原微生物培養(yǎng)為陰性但是病原微生物核酸檢測為陽性的有19例。兩組病原微生物分布情況結(jié)果見表4。感染組中病原微生物以巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯桿菌和金黃色葡萄球菌為主。

表4 早產(chǎn)兒感染組中病原微生物分布情況

3 討論

早產(chǎn)兒早期感染一般發(fā)生在出生后的3 d之內(nèi)，且病情發(fā)展較為迅速，癥狀隱匿，可能危及多個器官和系統(tǒng)，臨床中早產(chǎn)兒早期感染病死率相當高[9-10]。因此，越早確定早產(chǎn)兒的帶病原微生物情況，越能對圍生期高危因素與新生兒早期病原微生物感染關(guān)系進行準確評估，從而合理進行早期干預(yù)，降低早產(chǎn)兒早期病原微生物感染的發(fā)病率，改善其預(yù)后[11-12]。然而，目前臨床上對于早產(chǎn)兒早期病原微生物感染的診斷尚無理想的方法，早產(chǎn)兒胃液在未開奶之前為無菌狀態(tài)，若早產(chǎn)兒在宮內(nèi)出現(xiàn)感染，吞咽羊水，那么早產(chǎn)兒未開奶之前的胃液檢測具有一定臨床應(yīng)用價值，所以，胃液檢查越來越受到臨床醫(yī)師的重視[13-14]。血液細菌培養(yǎng)是臨床診斷菌血癥的“金標準”，但血培養(yǎng)陽性報警后，需分離純化病原微生物進行鑒定，因而存在易污染、結(jié)果滯后、假陰性率高、病原微生物種譜類窄(如病毒)等不足，加之血液采集屬于有創(chuàng)收集，對采血量有要求，沒辦法為早期臨床快速診斷提供參考[15-16]。

近年來，分子診斷技術(shù)飛速發(fā)展，病原微生物診斷中也引入了核酸PCR檢測技術(shù)，該檢測方法靈敏度高、特異性好、耗時少，從基因組抽提到PCR擴增整個過程只需3至4 h，為臨床早產(chǎn)兒早期病原微生物感染診斷提供了更加方便快捷的手段[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，病原微生物核酸檢測的效果(靈敏度和特異度分別為63.04%和96.36%)要顯著好于病原微生物培養(yǎng)的檢測效果(靈敏度和特異度分別為42.39%和90.09%)，表明早產(chǎn)兒胃液病原微生物核酸檢測在早產(chǎn)兒早期細菌感染診斷中效果更好。同時病原微生物核酸檢測也能對病原微生物進行分型，感染組中病原微生物以巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯桿菌和金黃色葡萄球菌為主。因此，胃液的病原微生物核酸檢測具有很大的應(yīng)用前景。加之該方法屬于無創(chuàng)操作，相較于血液培養(yǎng)，對早產(chǎn)兒來說可減輕反復(fù)穿刺痛苦，減少早產(chǎn)兒醫(yī)源性失血；對其家長來說減輕醫(yī)療費用的支出；對臨床來說可以快速得到相應(yīng)病原學(xué)檢測結(jié)果，為臨床使用抗菌或抗病毒藥物提供指導(dǎo)依據(jù)；可以避免早產(chǎn)兒出現(xiàn)嚴重敗血癥、顱內(nèi)感染等重癥感染性疾病，改善早產(chǎn)兒的預(yù)后，提高其生命質(zhì)量。但是本檢測手段主要針對存在宮內(nèi)感染暫未進行喂養(yǎng)的早產(chǎn)兒，對于晚期感染的新生兒不適用。

研究證實，與血液病原微生物培養(yǎng)檢測相比，早產(chǎn)兒胃液病原微生物核酸檢測在早產(chǎn)兒早期病原微生物感染診斷中具有良好的效果，具有無創(chuàng)、快速的特點，在早產(chǎn)兒早期感染中具有一定的診斷價值，可以為臨床使用抗菌或抗病毒藥物提供指導(dǎo)。