薛貴民，趙晨光，薛金鳳，星貴福，趙珍珠，杜 錕，司盈盈，孫彥君，馮衛(wèi)生*

艾草種子的化學成分研究

薛貴民1, 2，趙晨光1, 2，薛金鳳1, 2，星貴福1, 2，趙珍珠1, 2，杜 錕1, 2，司盈盈1, 2，孫彥君1, 2，馮衛(wèi)生1, 2*

1.河南中醫(yī)藥大學藥學院，河南 鄭州 450046 2.河南省中藥開發(fā)工程技術研究中心，河南 鄭州 450046

研究艾草種子部位的化學成分。利用現(xiàn)代色譜分離技術包括大孔樹脂、C18-ODS、Sephadex LH-20及制備型HPLC進行分離純化，根據(jù)NMR、MS等波譜數(shù)據(jù)及化合物的理化性質鑒定化合物結構。從艾葉種子95%乙醇提取物中分離得到18個化合物，分別鑒定為desacetylmatricarin（1）、3-methoxytanapartholide（2）、3α-chloro- 8α-acetoxy-4β,10α-dihydroxy-1β,2β-epoxy-5α,7α-guai-11(13)-en-12,6α-olide（3）、1α,6α,8α-trihydroxy-5α,7β-guaia-3,10(14), 11(13)-trien-12-oic acid（4）、11α,13-二氫魃蒿內(nèi)酯（5）、魃蒿內(nèi)酯（6）、tuberiferin（7）、8-acetylrupicolin B（8）、lirioresinol A（9）、丁香樹脂酚（10）、dehydroleucodine（11）、leukodin（12）、matricarin（13）、8-acetylrupicolin A（14）、methyl-4-6α- hydroxy-3-oxoeudesma-1,11(13)-dien-12-oate（15）、濱蒿內(nèi)酯（16）、異東莨菪素（17）、8-羥基-6,7-二甲氧基香豆素（18）。化合物4為首次從該屬植物中分離得到，化合物2、3、5、8～12、14～16、18首次從艾草中分離得到?；衔?～8、11、15在10 μmol/L時對胃癌細胞MGC-803抑制率為61.8%～67.5%，具有顯著的抑制活性。

艾草；倍半萜；木脂素；香豆素；濱蒿內(nèi)酯；8-羥基-6,7-二甲氧基香豆素；抗腫瘤活性

艾草Lévl.et Vant.菊科蒿屬植物，別名蘄艾、艾蒿、蓬藁﹑灸草﹑醫(yī)草﹑黃草等，是一種常見的傳統(tǒng)中藥。藥用部位是其曬干或陰干的葉子，多是在春夏之季葉茂盛未開花時進行采摘[1]。其為多年生草本或略成半灌木狀，植株有濃烈香氣。在我國除了極干旱與高寒地區(qū)外，在各省幾乎均有分布。艾葉關于其藥物的描述要追溯到戰(zhàn)國時期的醫(yī)書《黃帝內(nèi)經(jīng)》。其作為傳統(tǒng)中藥開始廣泛使用出現(xiàn)在陶弘景的著作《名醫(yī)別錄》中，并正式記載了其功效。中醫(yī)學在長期的實踐中總結認為艾葉性味苦、溫、辛，有逐寒濕、溫經(jīng)、理氣血、止血、安胎等功效，在臨床上主要應用于出血癥、內(nèi)科、婦科、各類殺蟲止癢等疾病[2-5]。艾葉作為治病的藥物大概已有2000年以上的歷史，近年來，特別是對艾葉的研究逐漸深入，其應用范圍也逐漸拓展。

現(xiàn)代化學成分研究表明，艾草主要化學成分為揮發(fā)油，其次還有黃酮類、倍半萜類、三萜類、鞣質類及多糖類等化學成分[6-8]。其中除揮發(fā)油外，倍半萜及其二聚體是艾草中特征性化學成分，尤其是其中的倍半萜二聚體類化學成分因其獨特藥理活性和新穎的結構骨架被廣泛的研究，這些二聚體主要由倍半萜單體通過Diels-Alder加成方式聚合而成[9-12]。本課題組在對艾葉前期研究過程中發(fā)現(xiàn)了多個1,10-裂環(huán)愈創(chuàng)木烷參與的Diels-Alder加成形成的倍半萜二聚體，其中包括骨架新穎的結構，另外還分離得到了通過酯鍵連接的結構新穎的倍半萜二聚體，這些倍半萜及二聚體多具有較好的抗腫瘤及抗炎活性[13-16]。為了對艾草的化學成分進行進一步的研究，選取其與之前研究不同且很少被報道的種子部位，最終通過用二氯甲烷冷浸提取，綜合利用大孔吸附樹脂色譜、C18-ODS柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、制備液相等分離純化手段對其進行化學成分的研究，共分離得到18個單體化合物，分別為desacetylmatricarin（1）、3-methoxytanapartholide（2）、3α-chloro-8α-acetoxy-4β,10α-dihydroxy-1β,2β- epoxy-5α,7α-guai-11(13)-en-12,6α-olide（3）、1α,6α,8α-trihydroxy-5α,7β-guaia-3,10(14),11(13)- trien-12-oic acid（4）、11α,13-二氫魃蒿內(nèi)酯（11α,13- dihydroyomogin，5）、魃蒿內(nèi)酯（yomogin，6）、tuberiferin（7）、8-acetylrupicolin B（8）、lirioresinol A（9）、丁香樹脂酚（syringaresinol，10）、dehydroleucodine（11）、leukodin（12）、matricarin（13）、8-acetylrupicolin A（14）、methyl-4-6α- hydroxy-3-oxoeudesma-1,11(13)-dien-12-oate（15）、濱蒿內(nèi)酯（scoparone，16）、異東莨菪素（isoscopoletin，17）、8-羥基-6,7-二甲氧基香豆素（8-hydroxy-6,7-dimethoxycoumarin，18）。其中，化合物4為首次從該屬植物中分離得到，化合物2、3、5、8～12、14～16、18首次從艾草中分離得到?；衔?～8、11、15對胃癌MGC-803細胞具有顯著的抑制活性。

1 儀器與材料

預制硅膠薄層G板（10～40 μm青島海洋化工廠）；大孔樹脂 Diaion HP-20（日本三菱化學）；ODS（40～60 μm，YMC）；Sephadex LH-20（40～70 μm，Amersham Pharmacia Biotech AB，Uppsala，瑞士）；LC-52型高壓制備液相色譜儀[賽譜銳思（北京）科技有限公司]；Bruker AVANCE 500核磁共振儀（TMS為內(nèi)標）；Bruker maxis HD型飛行時間質譜儀（德國Bruker公司）；SCIEX Qtrap 5500質譜儀（美國應用生物系統(tǒng)公司），所用分析純和色譜純試劑為天津恒興和天津四友精細化學有限公司生產(chǎn)。

人胃癌MGC-803、MKN-45、HGC-27和AGS細胞株均購買自中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心。

艾草種子2018年7月19日購買自于江蘇省宿遷市，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學董誠明教授鑒定為艾草Lévl.et Vant.的種子，標本（20180719）收藏于河南中醫(yī)藥大學天然產(chǎn)物研究室。

2 提取與分離

艾草的種子部位3.0 kg，用95%乙醇超聲提取，濃縮得總浸膏（211.0 g）。總浸膏與水混懸后依次用石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇萃取得到相關部位。其中取二氯甲烷部位（43.0 g）過大孔吸附樹脂色譜柱，依次用水及30%、60%、75%、90%、100%乙醇系統(tǒng)梯度洗脫，所得洗脫溶劑分別濃縮合并得6個組分，依次為Fr.A～F。其中組分Fr.C（13.0 g）經(jīng)過Sephadex LH-20凝膠色譜分離合并后得到3個部位，分別為Fr.C1～C3。Fr.C2（5.6 g）進一步過凝膠柱色譜，得Fr.C2I（0.1 g）、Fr.C2II（1.1 g）、Fr.C2III（1.3 g）、Fr.C2V（1.8 g）。其中Fr.C2III過反相C18-ODS柱色譜依次用10%～100%甲醇梯度洗脫，得15個部位Fr.C2III-1～15。Fr.C2III-5通過半制備HPLC，以20%乙腈（體積流量10 mL/min）等度洗脫，得到化合物1（11.0 mg，R＝37.4 min）、2（3 mg，R＝47.7 min）、3（4.5 mg，R＝50.3 min）。Fr.C2III-6以25%乙腈（體積流量10 mL/min）等度洗脫，采用半制備HPLC分離純化得化合物4（5.3 mg，R＝27.0 min）。Fr.C2III-7段以25%乙腈（體積流量10 mL/min）等度洗脫，進一步制備分離得化合物5（8.6 mg，R＝51.3 min）、6（7.6 mg，R＝57.3 min）。Fr.C2III-8以30%乙腈（體積流量10 mL/min）等度洗脫，采用半制備HPLC分離純化得化合物8（3.3 mg，R＝51.7 min）和10（3.0 mg，R＝31.7 min）。Fr.C2III-9采用制備HPLC，以45%乙腈（體積流量10 mL/min）梯度洗脫，得到3個部位Fr.C2III-9-1～3。Fr.C2III-9-1通過半制備HPLC以34%乙腈（體積流量3 mL/min）等度洗脫分離純化得化合物9（8.0 mg，R＝26.8 min）。Fr.C2III-9-2通過半制備HPLC以50%～65%甲醇（體積流量3 mL/min）梯度洗脫,分離純化得化合物7（4.0 mg，R＝31.0 min）。Fr.C2III-9-3通過半制備HPLC以50%～65%甲醇（體積流量3 mL/min）梯度洗脫分離純化得化合物11（1.8 mg，R＝33.7 min）和12（2.1 mg，R＝42.6 min）。Fr.C2III-10采用制備HPLC，以27%～43%乙腈（體積流量3 mL/min）梯度洗脫，最后分離純化得化合物13（2.5 mg，R＝22.1 min）、14（1.9 mg，R＝28.7 min）和15（2.1 mg，R＝35.4 min）。Fr.C2III-11段采用制備HPLC，以30%～43%乙腈（體積流量3 mL/min）梯度洗脫，最后分離純化得化合物16（2.7 mg，R＝45.4 min）。Fr.C2V段用反相C18-ODS柱色譜分離，依次用10%～100%甲醇梯度洗脫，最后得6個組分Fr.C2V-1～C2V-6。其中Fr.C2V-6采用半制備HPLC，以甲醇-水（20%～80%）梯度洗脫（體積流量10 mL/min），得到化合物16（7.8 mg，R＝48.3 min）、17（5.4 mg，R＝56.5 min）和18（6.7 mg，R＝63.2 min）。

3 結構鑒定

化合物1：白色粉末，ESI-MS/: 269.29 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 6.78 (1H, s, H-3), 3.38 (1H, d,= 10.0 Hz, H-5), 3.65 (1H, t,= 10.0 Hz, H-6), 2.13 (1H, m, H-7), 3.74 (1H, m, H-8), 2.36 (1H,= 14.0, 2.0 Hz, H-9a), 2.80 (1H,= 14.0, 11.0 Hz, H-9b), 2.55 (1H, dq,= 14.0, 7.0 Hz, H-11), 1.46 (3H, d,= 7.0 Hz, H-13), 2.43 (3H, s, H-14), 2.30 (3H, s, H-15)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 133.0 (C-1), 195.1 (C-2), 135.5 (C-3), 170.1 (C-4), 51.7 (C-5), 81.3 (C-6), 61.5 (C-7), 69.8 (C-8), 41.3 (C-9), 145.5 (C-10), 41.5 (C-11), 175.2 (C-12), 15.9 (C-13), 21.7 (C-14), 19.9 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[17]，故鑒定化合物1為desacetyl- matricarin。

化合物2：白色粉末，ESI-MS/: 315.32 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 2.67 (1H, dd,= 18.0, 6.0 Hz, H-2a), 2.32 (1H, dd,= 18.0, 2.0 Hz, H-2b), 4.30 (1H, d,= 6.0 Hz, H-3), 4.98 (1H, t,= 5.0 Hz, H-6), 3.06 (1H, m, H-7), 1.96 (1H, m, H-8a), 1.87 (1H, m, H-8b), 2.56 (2H, m, H-9), 6.35 (1H, d,= 2.5 Hz, H-13a), 5.66 (1H, d,= 2.5 Hz, H-13b), 2.13 (3H, s, H-14), 2.15 (3H, s, H-15), 3.41 (3H, s, 3′-OCH3)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 202.5 (C-1), 40.3 (C-2), 79.8 (C-3), 138.9 (C-4), 171.3 (C-5), 75.4 (C-6), 43.3 (C-7), 27.0 (C-8), 39.3 (C-9), 207.2 (C-10), 138.1 (C-11), 170.0 (C-12), 122.8 (C-13), 29.7 (C-14), 14.2 (C-15), 56.6 (3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[18]，故鑒定化合物2為3-methoxytanapartholide。

化合物3：白色粉末，ESI-MS/: 395.79 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 3.90 (1H, brs, H-2), 4.09 (1H, brs, H-3), 2.91 (1H, d,= 11.0 Hz, H-5), 4.38 (1H, t,= 10.0 Hz, H-6), 3.99 (1H, dt,= 10.0, 9.4 Hz, H-7), 5.28 (1H, m, H-8), 2.28 (1H, dd,= 17.0, 6.0 Hz, H-9a), 1.98 (1H, d,= 17.0 Hz, H-9b), 6.24 (1H, d,= 3.5 Hz, H-13a), 5.53 (1H, d,= 3.5 Hz, H-13b), 1.59 (3H, s, H-14), 1.20 (3H, s, H-15), 2.17 (3H, s, 2′-COCH3)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 72.7 (C-1), 63.8 (C-2), 64.0 (C-3), 79.7 (C-4), 50.1 (C-5), 74.5 (C-6), 47.7 (C-7), 72.2 (C-8), 42.3 (C-9), 71.4 (C-10), 137.7 (C-11), 169.0 (C-12), 121.4 (C-13), 24.3 (C-14), 27.6 (C-15), 170.3 (C-1′), 21.5 (C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道對照基本一致[19]，故鑒定化合物3為3α-chloro-8α-acetoxy-4β,10α- dihydroxy-1β,2β-epoxy-5α,7α-guai-11(13)-en-12,6α- olide。

化合物4：白色粉末，ESI-MS/: 303.31 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 2.88 (1H, d,= 17.1 Hz, H-2a), 2.88 (1H, brd,= 17.0 Hz, H-2a), 2.33 (1H, brd,= 17.0 Hz, H-2b), 5.53 (1H, brs, H-3), 2.67 (1H, d,= 10.5 Hz, H-5), 3.83 (1H, dd,= 10.3, 9.4 Hz, H-6), 2.94 (1H, m, H-7), 3.89 (1H, m, H-8), 2.62 (1H, dd,= 13.8, 5.7 Hz, H-9a), 2.52 (1H, dd,= 13.8, 4.7 Hz, H-9b), 6.26 (1H, d,= 3.0 Hz, 13a), 6.16 (1H, d,= 3.0 Hz, 13b), 5.43 (1H, s, H-14a), 5.43 (1H, s, H-14b), 1.92 (3H, s, H-15)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 84.7 (C-1), 46.3 (C-2), 124.5 (C-3), 141.1 (C-4), 65.8 (C-5), 79.3 (C-6), 51.5 (C-7), 72.6 (C-8), 40.5 (C-9), 145.0 (C-10), 137.7 (C-11), 169.9 (C-12), 123.3 (C-13), 116.5 (C-14), 17.7 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道對照基本一致[20]，故鑒定化合物4為1α,6α,8α-trihydroxy-5α,7β-guaia- 3,10(14),11(13)-trien-12-oic acid。

化合物5：白色粉末，ESI-MS/: 269.29 [M＋Na]+，1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 6.78 (1H, d,= 10.0 Hz, H-1), 6.24 (1H, d,= 10.0 Hz, H-2), 2.81 (1H, dd,= 14.0, 6.0 Hz, H-6a), 2.08 (1H, t,= 13.5 Hz, H-6b), 2.49 (1H, m, H-7), 4.49 (1H, m, H-8), 2.49 (1H, m, H-9a), 1.60 (1H, dd,= 15.0, 4.5 Hz, H-9b), 2.93 (1H, m, H-11), 1.31 (3H, d,= 9.0 Hz, H-13), 1.32 (3H, s, H-14), 1.96 (3H, s, H-15)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 155.5 (C-1), 126.2 (C-2), 185.8 (C-3), 131.3 (C-4), 155.5 (C-5), 24.7 (C-6), 42.0 (C-7), 76.5 (C-8), 39.1 (C-9), 39.0 (C-10), 42.3 (C-11), 178.5 (C-12), 9.6 (C-13), 25.4 (C-14), 10.9 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[21]，故鑒定化合物5為11α,13-二氫魃蒿內(nèi)酯。

化合物6：白色粉末，ESI-MS/: 267.27 [M＋Na]+，1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 6.83 (1H, d,= 10.0 Hz, H-1), 6.28 (1H, d,= 10.0 Hz, H-2), 3.02 (1H, dd,= 14.0, 6.0 Hz, H-6a), 2.33 (1H, t,= 13.0 Hz, H-6b), 3.12 (1H, m, H-7), 4.53 (1H, m, H-8), 2.48 (1H, dd,= 15.5, 2.5 Hz, H-9a), 1.72 (1H, dd,= 15.5, 4.5 Hz, H-9b), 6.30 (1H, brs, H-13a), 5.77 (1H, brs, H-13b), 1.36 (3H, s, H-14), 2.00 (3H, s, H-15)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 155.1 (C-1), 126.4 (C-2), 185.5 (C-3), 131.1 (C-4), 154.8 (C-5), 29.7 (C-6), 42.0 (C-7), 75.3 (C-8), 38.9 (C-9), 38.4 (C-10), 140.1 (C-11), 169.5 (C-12), 121.6 (C-13), 25.3 (C-14), 10.5 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[22]，故鑒定化合物6為魃蒿內(nèi)酯。

化合物7：白色粉末，ESI-MS/: 269.29 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 6.71 (1H, d,= 10.0 Hz, H-1), 5.91 (1H, d,= 10.0 Hz, H-2), 2.58 (1H, m, H-4), 2.13 (1H, m, H-5), 3.98 (1H, t,= 10.0 Hz, H-6), 2.58 (1H, m, H-7), 2.01 (1H, m, H-8a), 1.79 (1H, m, H-8b), 1.66 (2H, m, H-9), 6.12 (1H, d,= 3.0 Hz, H-13a), 5.44 (1H, d,= 3.0 Hz, H-13b), 1.16 (3H, s, H-14), 1.41 (3H, d,= 7.0 Hz, H-15)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 157.9 (C-1), 127.0 (C-2), 200.3 (C-3), 42.3 (C-4), 52.5 (C-5), 82.2 (C-6), 50.4 (C-7), 21.4 (C-8), 37.4 (C-9), 38.5 (C-10), 138.5 (C-11), 170.1 (C-12), 117.6 (C-13), 19.5 (C-14), 14.8 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[23]，故鑒定化合物7為tuberiferin。

化合物8：白色粉末，ESI-MS/: 327.33 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 2.89 (1H, d,= 17.0 Hz, H-2a), 2.32 (1H, d,= 17.0 Hz, H-2b), 5.55 (1H, brs, H-3), 2.68 (1H, m, H-5), 3.88 (1H, t,= 10.0 Hz, H-6), 3.28 (1H, m, H-7), 4.92 (1H, m, H-8), 2.68 (1H, m, H-9a), 2.56 (1H, dd,= 13.8, 4.7 Hz, H-9b), 6.23 (1H, d,= 3.2 Hz, H-13a), 5.64 (1H, d,= 3.0 Hz, H-13b), 5.41 (1H, brs, H-14a), 5.14 (1H, s, H-14b), 1.92 (3H, s, H-15), 2.16 (3H, s, 2′-COCH3)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 84.6 (C-1), 46.0 (C-2), 124.8 (C-3), 140.6 (C-4), 65.0 (C-5), 79.3 (C-6), 48.1 (C-7), 74.4 (C-8), 36.4 (C-9), 144.0 (C-10), 137.0 (C-11), 169.4 (C-12), 122.7 (C-13), 117.7 (C-14), 17.7 (C-15), 170.3 (C-1′), 21.3 (C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[24]，故鑒定化合物8為8-acetylrupicolin B。

化合物9：白色粉末，10%硫酸-乙醇顯墨綠色。三氯化鐵反應呈陽性，提示該化合物含有酚羥基。ESI-MS/: 441.43 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 2.60 (2H, s, H-2，H-6), 4.42 (1H, d,= 7.0 Hz, H-7), 2.91 (1H, m, H-8), 3.86 (1H, m, H-9a), 4.14 (1H, d,= 9.5 Hz, H-9b), 2.59 (2H, s, H-2′, 6′), 4.85 (1H, d,= 5.0 Hz, H-7′), 3.34 (1H, m, H-8′), 3.34 (1H, m, H-9′a), 3.86 (1H, m, H-9′b)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 134.5 (C-1), 102.9 (C-2, 6), 147.3 (C-3, 5), 133.8 (C-4), 132.3 (C-6), 88.1 (C-7), 54.7 (C-8), 71.1 (C-9), 129.6 (C-1′), 102.5 (C-2′, 6′), 147.2 (C-3′, 5′), 141.7 (C-4′), 64.2 (C-5′), 79.2 (C-6′), 82.2 (C-7′), 50.2 (C-8′), 69.8 (C-9′), 56.5 (4×-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[25]，故鑒定化合物9為lirioresinol A。

化合物10：白色粉末，10%硫酸-乙醇顯墨綠色。三氯化鐵反應呈陽性，提示該化合物含有酚羥基。ESI-MS/: 441.43 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 4.73 (2H, m, H-9, 9′), 3.09 (2H, m, H-8, 8′), 4.28 (2H, m, H-7, 7′), 6.59 (4H, s, H-2, 6, 2′, 6′)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 54.5 (C-7, 7′), 71.9 (C-9, 9′), 86.2 (C-7, 7′), 102.8 (C-2, 6, 2′, 6′), 132.3 (C-1, 1′), 134.4 (C-4, 4′), 147.3 (C-3, 5, 3′, 5′), 56.5 (4×-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[26]，故鑒定化合物10為丁香樹脂酚。

化合物11：白色粉末，ESI-MS/: 267.27 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 6.18 (1H, s, H-3), 3.51 (1H, d,= 10.0 Hz, H-5), 3.62 (1H, t,= 10.0 Hz, H-6), 1.96 (1H, m, H-7), 1.44 (1H, m, H-8a), 2.21 (1H, m, H-8b), 2.38 (1H, dd,= 14.0, 5.5 Hz, H-9a), 2.51 (1H, t,= 14.0 Hz, H-9b), 6.18 (1H, d,= 3.0 Hz, H-13a), 5.46 (1H, d,= 3.0 Hz, H-13b), 2.44 (3H, s, H-14), 2.33 (3H, s, H-15)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 132.1 (C-1), 195.9 (C-2), 135.7 (C-3), 169.3 (C-4), 52.9 (C-5), 84.1 (C-6), 53.0 (C-7), 24.3 (C-8), 37.2 (C-9), 151.9 (C-10), 138.5 (C-11), 169.0 (C-12), 119.1 (C-13), 21.7 (C-14), 19.7 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[27]，故鑒定化合物11為dehydroleucodine。

化合物12：白色粉末，ESI-MS/: 269.29 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 6.16 (1H, s, H-3), 3.41 (1H, d,= 10.0 Hz, H-5), 3.62 (1H, t,= 10.0 Hz, H-6), 1.96 (1H, m, H-7), 1.35 (1H, m, H-8a), 2.00 (1H, m, H-8b), 2.34 (1H, m, H-9a), 2.42 (1H, m, H-9b), 2.24 (1H, m, H-11), 1.27 (3H, d,= 7.0 Hz, H-13), 2.45 (3H, s, H-14), 2.32 (3H, s, H-15)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 132.0 (C-1), 195.7 (C-2), 135.5 (C-3), 169.9 (C-4), 52.6 (C-5), 84.1 (C-6), 56.3 (C-7), 26.0 (C-8), 37.1 (C-9), 152.1 (C-10), 41.3 (C-11), 177.5 (C-12), 12.2 (C-13), 21.5 (C-14), 19.5 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[17]，故鑒定化合物12為leukodin。

化合物13：白色粉末，ESI-MS/: 327.33 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 6.19 (1H, s, H-3), 3.40 (1H, d,= 10.0 Hz, H-5), 3.71 (1H, t,= 10.0 Hz, H-6), 2.33 (1H, m, H-7), 4.84 (1H, td,= 10.5, 1.5 Hz, H-8), 2.38 (1H, dd,= 13.5, 2.0 Hz, H-9a), 2.72 (1H, dd,= 13.5, 11.0 Hz, H-9b), 2.49 (1H, m, H-11), 1.34 (3H, d,= 7.0 Hz, H-13), 2.44 (3H, s, H-14), 2.30 (3H, s, H-15), 2.12 (3H, s, 2′-COCH3)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 133.2 (C-1), 195.3 (C-2), 135.7 (C-3), 169.8 (C-4), 51.5 (C-5), 81.4 (C-6), 59.0 (C-7), 70.0 (C-8), 44.5 (C-9), 145.2 (C-10), 40.4 (C-11), 176.5 (C-12), 15.2 (C-13), 21.1 (C-14), 19.9 (C-15), 169.9 (C-1′), 21.2 (C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[17]，故鑒定化合物13為matricarin。

化合物14：白色粉末，ESI-MS/: 327.33 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 2.62 (2H, q,= 16.0 Hz, H-2), 5.48 (1H, brs, H-3), 2.82 (1H, d,= 10.5 Hz, H-5), 3.94 (1H, t,= 10.0 Hz, H-6), 3.50 (1H, m, H-7), 5.32 (1H, m, H-8), 5.49 (1H, m, H-9), 6.29 (1H, d,= 3.0 Hz, H-13a), 5.69 (1H, d,= 3.0 Hz, H-13b), 5.41 (1H, brs, H-14a), 51.94 (1H, s, H-14b), 1.94 (3H, s, H-15), 2.16 (3H, s, 2′-COCH3)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 83.3 (C-1), 46.3 (C-2), 123.3 (C-3), 141.7 (C-4), 64.2 (C-5), 79.2 (C-6), 46.1 (C-7), 78.4 (C-8), 123.4 (C-9), 141.0 (C-10), 137.0 (C-11), 169.4 (C-12), 123.0 (C-13), 24.6 (C-14), 17.7 (C-15), 170.4 (C-1′), 21.3 (C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[28]，故鑒定化合物14為8-acetylrupicolin A。

化合物15：白色粉末，ESI-MS/: 301.33 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 6.73 (1H, d,= 10.0 Hz, H-1), 5.91 (1H, d,= 9.6 Hz, H-2), 2.94 (1H, m, H-4), 1.58 (1H, m, H-5), 3.97 (1H, td,= 10.5, 5.0 Hz, H-6), 2.50 (1H, m, H-7), 1.88 (1H, m, H-8a), 1.96 (1H, dd,= 11.0, 6.0 Hz, H-8b), 1.56 (1H, m, H-9a), 1.72 (1H, m, H-9b), 6.33 (1H, s, H-13a), 5.76 (1H, s, H-13b), 1.23 (3H, s, H-14), 1.25 (3H, d,= 7.0 Hz, H-15), 3.79 (3H, s, 1′-OCH3)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 159.7 (C-1), 126.5 (C-2), 203.7 (C-3), 39.9 (C-4), 50.5 (C-5), 69.6 (C-6), 49.8 (C-7), 26.2 (C-8), 37.5 (C-9), 39.4 (C-10), 141.9 (C-11), 168.2 (C-12), 126.5 (C-13), 21.9 (C-14), 13.6 (C-15), 52.1 (1′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[29]，故鑒定化合物15為methyl-4-6α-hydroxy-3-oxoeudesma- 1,11(13)-dien-12-oate。

化合物16：無色晶體（甲醇），在紫外254 nm波長下顯示藍色熒光，ESI-MS/: 207.20 [M＋H]+。1H-NMR (126 MHz, CDCl3): 6.29 (1H, d,= 9.5 Hz, H-3), 7.62 (1H, d,= 9.5 Hz, H-4), 6.85 (1H, s, H-5), 6.86 (1H, s, H-8), 6.92 (3H, s, 6-OCH3), 6.95 (3H, s, 7-OCH3)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 161.6 (C-2), 113.6 (C-3), 143.5 (C-4), 111.6 (C-4a), 108.1 (C-5), 146.5 (C-6), 153.1 (C-7), 100.2 (C-8), 150.2 (C-8a), 56.5 (6-OCH3), 56.5 (7-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道對照基本一致[30]，故鑒定化合物16為濱蒿內(nèi)酯。

化合物17：無色晶體（甲醇），在紫外254 nm波長下顯示藍色熒光，10%濃硫酸-乙醇酸顯示黃色。ESI-MS/: 193.18 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 6.29 (1H, d,= 9.5 Hz, H-3), 7.62 (1H, d,= 9.5 Hz, H-4), 6.94 (1H, s, H-5), 6.87 (1H, s, H-8), 3.97 (3H, s, 7-OCH3)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 161.7 (C-2), 113.4 (C-3), 144.0 (C-4), 103.2 (C-5), 144.1 (C-6), 150.3 (C-7), 111.5 (C-8), 107.4 (C-4a), 150.0 (C-8a), 56.7 (7-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[31]，故鑒定化合物17為異東莨菪素。

化合物18：白色粉末，在紫外254 nm波長下顯示藍色熒光，10%濃硫酸-乙醇酸顯示黃色，ESI-MS/: 223.20 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 6.27 (1H, d,= 9.0 Hz, H-3), 7.59 (1H, d,= 9.5 Hz, H-6), 6.66 (1H, s, H-5), 3.94 (3H, s, 6-OCH3), 4.09 (3H, s, 7-OCH3)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 161.7 (C-2), 113.5 (C-3), 144.5 (C-4), 100.1 (C-5), 153.1 (C-6), 138.3 (C-7), 140.4 (C-8), 114.4 (C-4a), 138.3 (C-8a), 60.1 (6-OCH3), 55.5 (7-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻對比基本一致[32]，故鑒定化合物18為8-羥基-6,7-二甲氧基香豆素。

4 化合物抗腫瘤活性研究

分別取對數(shù)生長期的4種不同的人胃癌細胞MGC-803、MKN-45、HGC-27和AGS細胞接種于96孔培養(yǎng)板中，密度約為5.0×103個/孔，培養(yǎng)過夜，加入配制好的化合物1～18和陽性藥5-氟尿嘧啶溶液繼續(xù)培養(yǎng)48 h。然后每孔再加入配制好的MTT溶液，孵育4 h后棄去培養(yǎng)液。最后每孔加入150 μL DMSO，振蕩10 min，然后用酶標儀在570 nm檢測波長（參比波長630 nm）下測定吸光度（）值。根據(jù)值計算不同濃度的藥物對細胞的抑制率，實驗重復3次。

抑制率＝1－給藥/對照

活性篩選結果顯示，在10 μmol/L時，化合物6～8、11與15對MGC-803細胞具有顯著的抑制活性，其抑制率依次為62.8%、63.4%、67.5%、61.8%、62.2%（陽性藥5-氟尿嘧啶抑制率為46.7%）。另外化合物6～8、11與15在10μmol/L時對MKN-45細胞的抑制率相對較弱，其抑制率為30.5%～59.0%?；衔?～18在10 μmol/L對HGC-27細胞和AGS細胞無抑制活性（抑制率均＜10%）。

5 討論

通過對艾草種子部位進行提取分離，共得到2個木脂素類、3個香豆素類以及13個倍半萜類化學成分，并結合質譜、核磁共振波譜等技術闡明了其化學結構，豐富了艾草化學成分類型。另外化合物6～8、11與15（10 μmol/L）對MGC-803細胞抑制活性顯著，為抗胃癌先導化合物的發(fā)現(xiàn)提供了參考。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志 [M].北京: 科學出版社, 2006: 51.

[2] 胡林峰, 崔乘幸, 吳玉博, 等.艾蒿化學成分及其生物活性研究進展 [J].河南科技學院學報: 自然科學版, 2010, 38(4): 75-78.

[3] 中國藥典[S].一部.2020: 15.

[4] Wang S, Li J, Sun J,.NO inhibitory guaianolide-derived terpenoids from[J]., 2013, 85: 169-175.

[5] 王春柳, 萬兆新, 周潔, 等.艾葉揮發(fā)性成分對膝骨關節(jié)病作用機制的網(wǎng)絡藥理學探討[J].世界中醫(yī)藥, 2021, 16(20): 2975-2979

[6] Kim J H, Kim H K, Jeon S B,.New sesquiterpene-monoterpene lactone, artemisolide, isolated from[J]., 2002, 43(35): 6205-6208.

[7] Seo J M, Kang H M, Son K H,.Antitumor activity of flavones isolated from[J]., 2003, 69(3): 218-222.

[8] 王宇卿, 耿榕徽, 張須學.“宛艾”及其他產(chǎn)地艾葉中的桉油精?樟腦?龍腦含量[J].世界中醫(yī)藥, 2020, 15(22): 3391-3395.

[9] Hou X F, Yao S, Mándi A,.Bicunningines A and B, two new dimeric diterpenes from[J]., 2012, 14(2): 460-463.

[10] Oikawa H, Tokiwano T.Enzymatic catalysis of the Diels-Alder reaction in the biosynthesis of natural products [J]., 2004, 21(3): 321-352.

[11] Yang Y X, Shan L, Liu Q X,.Carpedilactones A-D, four new isomeric sesquiterpene lactone dimers with potent cytotoxicity from[J]., 2014, 16(16): 4216-4219.

[12] Zhan Z J, Ying Y M, Ma L F,.Natural disesquiterpenoids [J]., 2011, 28(3): 594-629.

[13] Xue G M, Han C, Chen C,.Artemisians A-D, diseco-guaianolide involved heterodimeric[4 + 2]adducts from[J]., 2017, 19(19): 5410-5413.

[14] Xue G M, Zhu D R, Han C,.Artemisianins A-D, new stereoisomers of seco-guaianolide involved heterodimeric[4+2]adducts frominduce apoptosis via enhancement of endoplasmicstress [J]., 2019, 84: 295-301.

[15] Xue G M, Zhu D R, Zhu T Y,.Lactone ring-opening seco-guaianolide involved heterodimers linked via an ester bond fromwith NO inhibitory activity [J]., 2019, 132: 94-100.

[16] Lee S H, Lee M Y, Kang H M,.Anti-tumor activity of the farnesyl-protein transferase inhibitors arteminolides, isolated from[J]., 2003, 11(21): 4545-4549.

[17] Martinez V M, Mu?oz-Zamora A, Joseph-Nathan P.Conformational analysis of achillin and leukodin [J]., 1988, 51(2): 221-228.

[18] Jakupovic J, Tan R X, Bohlmann F,.Sesquiterpene lactones from[J]., 1991, 30(5): 1714-1716.

[19] Zan K, Tu P F.Chemical ingredients isolated from the aerial parts of[J]., 2010, 19(2): 95-99.

[20] Hegazy M E F, Abdel-Lateff A, Gamal-Eldeen A M,.Anti-inflammatory activity of new guaiane acid derivatives from[J]., 2008, 3(6): 851-856.

[21] 劉丹, 師寧寧, 吳葉紅, 等.冷蒿的化學成分研究 [J].中草藥, 2017, 48(24): 5090-5098.

[22] Jakupovic J, Schuster A, Bohlmann F,.Lumiyomogin, ferreyrantholide, fruticolide and other sesquiterpene lactones froms[J]., 1988, 27(4): 1113-1120.

[23] Cano-Flores A, Delgado G.Transformations of some sesquiterpene lactones by filamentous fungi and cytotoxic evaluations [J]., 2017, 14(10): e1700211.

[24] Jakupovic J, Klemeyer H, Bohlmann F,.Glaucolides and guaianolides from[J]., 1988, 27(4): 1129-1133.

[25] 周玉枝, 陳歡, 喬莉, 等.紅花化學成分研究 [J].中國藥物化學雜志, 2007, 17(6): 380-382.

[26] 陳玉琪, 蘇娟, 沈云亨, 等.絲毛瑞香化學成分研究 [J].中草藥, 2009, 40(4): 516-518.

[27] Ordó?ez P E, Quave C L, Reynolds W F,.Sesquiterpene lactones fromand their anti-MRSA activity [J]., 2011, 137(2): 1055-1059.

[28] Jakupovic J, Klemeyer H, Bohlmann F,.Glaucolides and guaianolides from[J]., 1988, 27(4): 1129-1133.

[29] 王美嬌, 王金蘭, 王丹, 等.柳蒿化學成分研究 (II) [J].中草藥, 2019, 50(22): 5411-5418.

[30] Zhao Y W, Ni F Y, Song Y L,.Chemical constituents from[J]., 2014, 39(24): 4816-4821.

[31] 邵霞, 林家紅, 張麗.甘遂的化學成分及其活性研究 [J].中草藥, 2014, 45(23): 3383-3386.

[32] 王青虎, 吳榮君, 齊格奇, 等.蒙藥鐵桿蒿化學成分研究 [J].中國藥學雜志, 2015, 50(16): 1380-1383.

Chemical constituents from seeds of

XUE Gui-min1, 2, ZHAO Chen-guang1, 2, XUE Jin-feng1, 2, XING Gui-fu1, 2, ZHAO Zhen-zhu1, 2, DU Kun1, 2, SI Ying-ying1, 2, SUN Yan-jun1, 2, FENG Wei-sheng1, 2

1.School of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China 2.The Engineering and Technology Center for Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China

To study the chemical constituents from the seeds of.The chemical constituents from the seeds ofwere isolated and purified by modern chromatographic separation techniques such as macroporous resin, C18-ODS, Sephadex LH-20 and preparative HPLC.The structures were identified by the NMR, MS spectra data and physicochemical properties analysis.Eighteen compounds were isolated and identified from 95% ethanol extract from the seeds of, and their structures were identified as desacetylmatricarin (1), 3-methoxytanapartholide (2), 3α-chloro-8α- acetoxy-4β,10α-dihydroxy-1β,2β-epoxy-5α,7α-guai-11(13)-en-12,6α-olide (3), 1α,6α,8α-trihydroxy-5α,7β-guaia-3,10(14),11(13)- trien-12-oic acid (4), 11α,13-dihydroyomogin (5), yomogin (6), tuberiferin (7), 8-acetylrupicolin B (8), lirioresinol A (9), syringaresinol (10), dehydroleucodine (11), leukodin (12), matricarin (13), 8-acetylrupicolin A (14), methyl-4-6α- hydroxy-3-oxoeudesma-1,11(13)-dien-12-oate (15), scoparone (16), isoscopoletin (17), and 8-hydroxy-6,7-dimethoxycoumarin (18).Compound 4 is separated from the genus offor the first time.Compounds 2, 3, 5, 8－12, 14－16 and 18 are isolated fromfor the first time.Cytotoxic effects of compounds 1－18 are investigated in four different gastric cancer cell lines, and the results show that compounds 6－8, 11 and 15 have significant inhibitory activity on MGC-803 cell line at 10 μmol/L with the inhibition rate in the range 61.8%－67.5%.

Lévl.et Vant.; sesquiterpenoid; lignan; coumarin; scoparone; 8-hydroxy-6,7-dimethoxycoumarin; antitumor activity

R284.1

A

0253 - 2670(2022)09 - 2605 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.09.002

2021-11-26

國家自然基金資助項目（82003606）；河南省高等學校重點科研項目（21A360002）；河南省科技攻關項目（182102310288）；河南中醫(yī)藥大學科研苗圃工程項目（MP2020-29）；河南省高等學校大學生創(chuàng)新訓練計劃項目（CXXM[2019]0064）

薛貴民，男，博士，講師，從事中藥活性成分研究。E-mail: xueguimin123@126.com

通信作者：馮衛(wèi)生，男，博士生導師，教授，從事中藥活性成分研究。E-mail: fwsh@hactcm.edu.cn

[責任編輯 王文倩]