結(jié)直腸癌中突觸核蛋白-γ的表達(dá)及意義

侯亞彬，張 宇，曹改改，李靜茹，郝崇華

結(jié)直腸癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一。2020年全球約有190萬結(jié)直腸癌新發(fā)病例，約93萬人死于結(jié)直腸癌[1]。結(jié)直腸癌早期癥狀不明顯，腸鏡檢查是結(jié)直腸癌早期診斷最可靠的方法，但由于檢查的侵入性、取材差異、患者依從性等因素，仍有一定的局限性[2]。血清CEA和CA199水平可輔助診斷結(jié)直腸癌，但缺乏特異性。突觸核蛋白基因家族是一種高度保守的，主要表達(dá)于突觸末梢、外周神經(jīng)組織和某些腫瘤中的小分子可溶蛋白，突觸核蛋白-γ(Synuclein-γ, SNCG)在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，可通過MAPK、PI3K/AKT/mTOR通路及DNA啟動子甲基化等促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移，包括乳腺癌、胃癌、肺癌、膀胱癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌以及子宮癌等[3-8]。本文采用免疫組化分析結(jié)直腸癌中SNCG表達(dá)及其與臨床病理特征的相關(guān)性，為探討SNCG作為新型腫瘤標(biāo)志物在結(jié)直腸癌中的意義奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 一般資料收集2020年9月～2021年6月山西省人民醫(yī)院存檔的結(jié)直腸癌手術(shù)切除標(biāo)本126例，同時獲取相應(yīng)的癌旁組織及遠(yuǎn)端正常組織。其中男性74例，年齡30～83歲，平均(65.1±11.8)歲；女性52例，年齡37～82歲，平均(62.3±12.0)歲，所有患者術(shù)前均未行放、化療，均有完整的臨床病理資料。

1.2 方法鼠抗人1#SNCG單克隆抗體由北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院生物化學(xué)和分子生物學(xué)實驗室提供，兔抗人BRAF V600E抗體購自上海羅氏公司，鼠抗人HER-2抗體及二抗小鼠/兔聚合物購自北京中杉金橋公司，組織標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片，免疫組化染色采用EnVision兩步法，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 結(jié)果判讀SNCG及BRAF V600E染色結(jié)果判讀采用四值分類法進(jìn)行評分：(1)按染色面積評分：<10%為0分，>10%為1分；(2)按染色強度評分：弱陽性為1分，陽性為2分，強陽性為3分。將兩項得分結(jié)果相加：≥3分為SNCG陽性，<3分為SNCG陰性。HER-2染色結(jié)果判讀：(1)無陽性染色或≤10%細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色為陰性；(2)>10%細(xì)胞呈不完整或完整、微弱～強的細(xì)胞膜染色為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料采用n(%)表示；腫瘤組織、癌旁組織及遠(yuǎn)端正常組織中SNCG的表達(dá)差異比較采用χ2檢驗；采用單因素分析篩選參數(shù)納入Logistic回歸模型，預(yù)測SNCG表達(dá)的危險因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌組織中SNCG的表達(dá)SNCG在結(jié)直腸癌、癌旁組織及遠(yuǎn)端正常組織中染色見圖1。126例結(jié)直腸癌腫瘤組織中SNCG的陽性率為65.1%(82/126)，高于癌旁組織(0，0/126)及遠(yuǎn)端組織(0，0/126)(P<0.05)。

2.2 SNCG表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系單因素分析結(jié)果顯示，SNCG表達(dá)與結(jié)直腸癌病理類型、血管內(nèi)癌栓、侵犯深度、TNM分期、分級和HER-2表達(dá)相關(guān)(P<0.05，表1)，即黏液腺癌、血管內(nèi)存在癌栓、侵犯深度T3+T4、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、腫瘤分級G3級以及HER-2陽性患者組織中SNCG高表達(dá)。

2.3 SNCG表達(dá)與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系以SNCG表達(dá)為因變量，各自變量賦值說明見表2，采用逐步法多因素Logistic回歸分析結(jié)直腸癌中SNCG表達(dá)的危險因素，結(jié)果顯示，黏液腺癌、血管內(nèi)存在癌栓、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期以及HER-2陽性是結(jié)直腸癌組織中SNCG表達(dá)的獨立危險因素(P<0.05，表2)。

3 討論

目前，雖然在結(jié)直腸癌的診斷和治療方面取得了進(jìn)展，但是結(jié)直腸癌的發(fā)病率仍在增加，生存率未發(fā)生較顯著的變化，因此有必要探尋結(jié)直腸癌新型腫瘤標(biāo)志物和治療靶位。國內(nèi)外有關(guān)SNCG表達(dá)與結(jié)直腸癌的相關(guān)性研究較少，因此本實驗對結(jié)直腸癌組織中SNCG的表達(dá)及危險因素進(jìn)行分析。

SNCG表達(dá)主要與腫瘤性疾病相關(guān)，其可提高細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)的磷酸化水平，增強絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)通路活性，促進(jìn)腫瘤的增殖和遷移。同時，還可提高磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)、蛋白激酶B(即AKT)及雷帕霉素受體蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)的蛋白磷酸化水平，介導(dǎo)PI3K/AKT/mTOR信號通路促進(jìn)癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。此外，SNCG啟動子中的胞嘧啶-磷酸-鳥嘌呤(cytosine phosphoric acid guanine, CpG)島的去甲基化可使SNCG基因上調(diào)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲、遷移和增殖能力[9-12]。本實驗SNCG在結(jié)直腸癌中的陽性率為65.1%，高于對應(yīng)癌旁組織和遠(yuǎn)端正常組織。其在乳腺癌、胃癌、卵巢癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌[13-15]中也有類似的表達(dá)，表明SNCG可作為一種細(xì)胞惡變的標(biāo)志物。本組單因素和多因素Logistic分析結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌中黏液腺癌、腫瘤細(xì)胞浸潤組織越深、浸潤血管、TNM分期越晚、分級越高及HER-2陽性結(jié)直腸癌患者中SNCG陽性率越高。文獻(xiàn)報道黏液腺癌、浸潤血管、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期以及HER-2陽性結(jié)直腸癌患者的預(yù)后較差[16]。本實驗結(jié)果顯示，黏液腺癌、浸潤血管、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期以及HER-2陽性可作為結(jié)直腸癌中SNCG陽性的獨立危險因素，表明SNCG表達(dá)與結(jié)直腸癌患者預(yù)后存在一定相關(guān)性。

綜上，SNCG在結(jié)直腸癌中高表達(dá)，其在腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤等方面發(fā)揮重要作用，可作為一種反映腫瘤惡性進(jìn)展程度的標(biāo)志物，對于預(yù)測結(jié)直腸癌患者病情的惡變程度和治療預(yù)后等具有較廣的臨床應(yīng)用價值。