兒童替牙期OPG與RANKL表達水平分析

況司琦,黃 瑋，李 躍，黃耀文，董雅迪

(1.南昌大學(xué)a.研究生院醫(yī)學(xué)部2019級；b.附屬口腔醫(yī)院特需門診；c.研究生院醫(yī)學(xué)部2017級；d.研究生院醫(yī)學(xué)部2018級，南昌 330006；2.江西省口腔生物醫(yī)學(xué)重點實驗室，南昌 330006；3.吉林大學(xué)口腔醫(yī)院急診科，長春 130000)

乳恒牙替換期是兒童頜骨發(fā)育、頜建立的關(guān)鍵時期，這一期間出現(xiàn)任何問題都可能導(dǎo)致兒童出現(xiàn)牙列不齊、錯頜畸形的現(xiàn)象，影響兒童的咀嚼功能及身心的健康成長[1]。牙齒的萌出是一個長期、復(fù)雜且受到多種生物分子嚴密調(diào)控的過程，目前學(xué)界對于牙齒萌出過程及其背后的機制尚未完全了解[2]。破骨細胞抑制因子(OPG)是一種可以調(diào)節(jié)骨吸收且能與肝素相結(jié)合的分泌型糖蛋白，是核因子κB受體活化因子配體(RANKL)的誘餌受體[3]。OPG既可以抑制破骨細胞(OC)的分化又可以抑制骨吸收活性，從而誘導(dǎo)OC的凋亡[4]。RANKL是以O(shè)PG為探針找到的配體，是OPG的結(jié)合蛋白，通過受體RANK相互作用可誘導(dǎo)破骨細胞形成和骨吸收作用。RANKL與RANK結(jié)合后不但能促進OC分化成熟產(chǎn)生骨溶解，還能活化OC，增強其破骨能力[5]。RANKL和OPG之間的平衡狀態(tài)決定了骨吸收的速度[6]。

有研究[7]表明，在牙齒萌出期間，RANK和RANKL在濾泡中表達；成年期后，二者在牙周膜中表達。通過采集萌牙期兒童的下頜中切牙牙齦溝液并測定其中OPG、RANKL的含量，可為進一步闡明牙齒萌出過程及其背后的細胞和分子機制提供有價值的參考數(shù)據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象

隨機抽取南昌市區(qū)幼兒園和小學(xué)各5所，征集5～6歲的萌牙期兒童作為調(diào)查對象。選擇標準：1)出生于南昌市并有長期居住史；2)身體健康；3)牙周狀況良好；4)無代謝相關(guān)疾病。最終確定的調(diào)查對象共424例。

1.2 分組方法

準備好足量的一次性手套和一次性診療盤(內(nèi)含鑷子、口鏡、探針)。由檢查員在自然光下使用以上檢查工具對納入調(diào)查的424名兒童進行口腔檢查，記錄員對每個兒童下頜中切牙的萌出情況進行記錄。根據(jù)《兒童口腔疾病預(yù)防指南》推薦的標準，將解剖牙冠萌出程度分成3級，其中Ⅱ級和Ⅲ級分別為解剖冠萌出1/2和解剖冠全萌出。依據(jù)對象年齡和其解剖牙冠萌出程度，將424例分4組：其中A組和B組分別為5歲、6歲兒童解剖牙冠萌出1/2組，C組和D組分別為5歲、6歲兒童解剖牙冠全萌出組，每組106例。

1.3 取樣和檢測

取樣前囑受檢兒童刷牙。在人工光源下使用無菌干棉球擦干所要取樣的牙位并用棉卷隔濕，用探針清除軟垢和菌斑，氣槍輕吹受檢牙面以及相應(yīng)的牙齦黏膜。將準備好的吸潮紙尖輕輕插入下頜左中切牙或右中切牙唇側(cè)的近中、中點和遠中3個位點的齦溝內(nèi)，遇到阻力后立即停止。停留30 s后取出吸潮紙尖，立即裝入已消毒和編號的Eppendoff管中，稱重后保存。取樣過程中注意避免唾液或血液污染吸潮紙尖，最后樣本放置于-70 ℃的冰箱內(nèi)保存待檢。采用ELISA法檢測樣品中的OPG和RANKL含量(ELISA試劑盒由上海超研生物科技有限公司提供)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

A組與C組的OPG測定值分別為(246.17±58.87)、(240.12±62.55)mg·μL-1，2組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；RANKL測定值分別為(41.79±15.61)、(36.18±12.59)mg·μL-1，2組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。B組與D組的OPG測定值分別為(250.18±56.7)、(243.36±65.51)mg·μL-1，2組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；RANKL測定值分別為(39.87±14.47)、(37.89±13.52)mg·μL-1，2組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。相同年齡不同程度萌出的解剖牙冠其齦溝液中的OPG、RANKL表達水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，但二者表達水平均隨著下頜中切牙的萌出而降低。

3 討論

牙齒萌出是指發(fā)育中的牙齒沿著咬合方向朝口腔內(nèi)移動。萌出過程與牙齒在骨槽窩中的萌出路徑有著密切的關(guān)系，在此過程中牙胚周圍的牙囊可被破骨細胞前體募集、融合和激活進而被吸收。在牙齒萌出的各個階段，破骨細胞的募集和激活依賴于復(fù)雜的信號機制。替牙期兒童乳牙牙根被吸收時，RANKL、OPG由成牙骨質(zhì)細胞表達。RANKL可啟動OC前體細胞，可減緩OC的凋亡，從而加快骨溶解導(dǎo)致骨脆性增大[8]。而OPG主要由成骨細胞(OB)分泌產(chǎn)生，可以抑制OC的活性和功能，并誘導(dǎo)其凋亡，從而防止骨丟失，增加骨密度和骨強度[9]，與RNKP相互拮抗。這提示RANKL/OPG比值可調(diào)控骨代謝平衡,調(diào)節(jié)牙槽骨的吸收和修復(fù)，在乳牙的脫落及恒牙萌出的過程中起著至關(guān)重要的作用[10-11]。實驗結(jié)果顯示，下頜中切牙在不同萌出階段，其牙齦溝液中都存在OPG、RANKL，但其含量平均值并不相同。這表明恒牙的主動萌出過程中始終有OPG、RANKL的參與[12-16]。另外，不同受檢者其齦溝液中的OPG、RANKL含量也稍有不同，這提示OPG、RANKL含量具有個體差異性。在各年齡組中，解剖牙冠全萌出時，牙齦溝液中OPG、RANKL含量平均值要低于解剖牙冠萌出1/2時的平均值，說明在下頜中切牙主動萌出過程中，其OPG、RANKL含量是不斷變化的，很可能受到動態(tài)調(diào)節(jié)。說明他們相互協(xié)調(diào)，共同控制牙及牙周組織改建，但這與他們的拮抗作用并不相矛盾。

4 小結(jié)

牙齒的萌出是一個漫長且復(fù)雜的生理過程，會受到基因和環(huán)境的影響，但其背后的萌出機制目前還沒有一個明確的答案。該過程有多種細胞的參與，如OB、OC和巨噬細胞等[17-18]。本研究從被檢者的牙齦溝液中監(jiān)測到了OPG、RANKL，證明二者在恒牙主動萌出過程中確實存在。同時，本研究發(fā)現(xiàn)，OPG、RANKL表達水平在牙齒萌出過程中出現(xiàn)變化的現(xiàn)象，表明OPG、RANKL可能在乳恒牙替換過程中起重要的調(diào)節(jié)作用。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)恒牙解剖冠萌出1/2時其OPG、RANKL表達水平和解剖冠全萌出時有所下降，這是由于RANKL的生物學(xué)效應(yīng)會被OPG抑制[19-21]，說明RANKL/OPG的相對比例對OC的生成具有調(diào)節(jié)作用。至于不同萌出程度的下頜中切牙其齦溝液中的OPG、RANKL表達水平無顯著差異，其具體原因還有待進一步研究。