鮮義坤，瞿桂英，廖友平，馬黎民，張亞輝，劉張育，魏 明，黃明亞，張貴權(quán)

（1.四川省自然資源科學(xué)研究院，四川 成都 610041；2.大熊貓國(guó)家公園珍稀動(dòng)物保護(hù)生物學(xué)國(guó)家林業(yè)和草原局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611830；3.中國(guó)大熊貓保護(hù)研究中心，四川 成都 611830；4.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130118；5.成都大帝漢克生物科技有限公司，四川 成都 611130；6.四川省動(dòng)物采食調(diào)控工程技術(shù)研究中心，四川 成都 611130）

0 引言

小熊貓（Ailurus fulgens）屬于喜馬拉雅—橫斷山脈特有的珍稀獸類，被CITES（國(guó)際瀕危動(dòng)植物物種國(guó)際貿(mào)易公約）列入附錄Ⅰ，被IUCN（國(guó)際自然資源保護(hù)聯(lián)盟）列為瀕危動(dòng)物，為我國(guó)二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)動(dòng)物［1］。小熊貓與大熊貓?jiān)谒拇ㄅ璧匚骶壍尼荷健②鰨?、涼山和相嶺山系同域共存，相互伴生，食性相同，均以低營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的竹類為主要食物。但小熊貓只食竹葉和竹筍［2］，不食竹稈，且對(duì)不同竹種的葉和筍有著明顯的選擇性［3］。據(jù)測(cè)算，小熊貓全年食用竹葉的比例可高達(dá)89.9%［4］。小熊貓?bào)w色鮮艷、體態(tài)優(yōu)美，頗具觀賞性，具有較高的科普和科研價(jià)值，近年被許多地方的動(dòng)物園、公園、保護(hù)區(qū)和科研院所與中心等單位越來(lái)越多地人工飼養(yǎng)。

飼養(yǎng)動(dòng)物的經(jīng)典理念為“養(yǎng)重于防，防重于治”。喂給動(dòng)物的食物即使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)種類齊全、含量豐富，但如果動(dòng)物不攝食或少攝食，就會(huì)失去或降低食物應(yīng)有的飼喂價(jià)值。對(duì)于飼養(yǎng)大熊貓、小熊貓等植食性野生動(dòng)物而言，首要的理念應(yīng)為“味重于養(yǎng)”，即食物的氣味和味道（二者統(tǒng)稱“風(fēng)味”）要適合動(dòng)物的偏好，動(dòng)物才可能多吃、多長(zhǎng)、少生病、多產(chǎn)出，展現(xiàn)食物的營(yíng)養(yǎng)功能。早在1940 年，美國(guó)科研人員就開(kāi)始研究仔豬和雞的飼料適口性問(wèn)題。我國(guó)同類研究始于1992 年，首先研究了飼料調(diào)味劑對(duì)仔豬采食量和生長(zhǎng)的影響，現(xiàn)已在家養(yǎng)動(dòng)物嗅覺(jué)、味覺(jué)、采食調(diào)控機(jī)理等方面取得了豐碩的理論成果，并有大量的產(chǎn)品應(yīng)用于家畜、家禽、寵物、水產(chǎn)動(dòng)物和特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的日糧中［5］。野生動(dòng)物在這些方面雖然有過(guò)零星報(bào)道［6-10］，但還缺乏系統(tǒng)性和深入性探究。本研究根據(jù)圈養(yǎng)小熊貓喜歡的食物風(fēng)味特點(diǎn)、攝食行為習(xí)慣、嗅覺(jué)和味覺(jué)生理特征，在國(guó)內(nèi)外率先自主研發(fā)出竹葉增食劑，并于2022 年4 至6 月間先后3 次在中國(guó)大熊貓保護(hù)研究中心都江堰基地進(jìn)行了飼喂試驗(yàn)，測(cè)試了竹葉增食劑的實(shí)際效果，并進(jìn)一步探討了小熊貓攝食竹葉的風(fēng)味機(jī)理，研究結(jié)果也可為圈養(yǎng)大熊貓竹葉誘食劑的研制提供借鑒和參考。

1 竹葉增食劑的研制

1.1 設(shè)計(jì)理論依據(jù)

竹葉增食劑的設(shè)計(jì)理論依據(jù)主要有以下5 個(gè)方面：①小熊貓的食性屬植食性，而植食性的很多動(dòng)物主要根據(jù)氣味尋找食物［6］。②經(jīng)攝食行為觀察，小熊貓?jiān)谶M(jìn)食前都要嗅聞竹葉的氣味。③食物的氣味和味道分別由動(dòng)物的嗅覺(jué)和味覺(jué)感知，是動(dòng)物對(duì)食物安全性的一種常用判斷方法；對(duì)熟悉的氣味，動(dòng)物才可能攝食；對(duì)喜歡的味道，動(dòng)物才會(huì)較多地?cái)z食。④小熊貓具有完整的甜味受體基因［7，8］。⑤圈養(yǎng)小熊貓喜歡攝食窩窩頭、蘋果和胡蘿卜等食物，這些食物共有的香氣特點(diǎn)是甜氣［9，10］，共有的味道特點(diǎn)是甜味?；谏鲜? 個(gè)方面的理論依據(jù)，設(shè)計(jì)竹葉增食劑時(shí)既要有作用于小熊貓嗅覺(jué)的香氣，又要有作用于小熊貓味覺(jué)的味道。

1.2 原料選用原則

鑒于我國(guó)目前尚無(wú)人工飼養(yǎng)小熊貓的食物添加劑要求或標(biāo)準(zhǔn)，在選用竹葉增食劑的原料時(shí)遵循“從食物中來(lái)，到食物中去”的原則。小熊貓?jiān)谌斯わ曫B(yǎng)條件下與圈養(yǎng)大熊貓同食一樣的窩窩頭、蘋果、胡蘿卜、竹筍和竹葉，酌情選用已從圈養(yǎng)大熊貓各類食物中測(cè)出的典型香氣成分物質(zhì)［9-15］，并達(dá)到我國(guó)人用食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)——《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）、《食品用香料通則》（GB 29938—2020）和2013 年12 月30 日農(nóng)業(yè)部公告第2045 號(hào)《飼料添加劑品種目錄》要求?？紤]到竹葉增食劑應(yīng)有中等偏上的嗅感愉悅度、香氣持久性和口感甜度，也可從上述國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和要求中適當(dāng)選用其他香料與甜味物質(zhì)。

1.3 研制技術(shù)路線

竹葉增食劑的研發(fā)經(jīng)多次的配方設(shè)計(jì)、模擬調(diào)制、工藝流程改進(jìn)、使用方法完善，終獲較好的飼喂效果，具體研制技術(shù)路線如圖1 所示。

圖1 圈養(yǎng)小熊貓竹葉增食劑的研制技術(shù)路線Figure 1 The technical route of the development of the bamboo leaf intake enhancer for captive red pandas

1.4 食品級(jí)單體呈香物質(zhì)的初步篩選

基于圈養(yǎng)小熊貓所食窩窩頭、蘋果、胡蘿卜、竹筍和竹葉的氣味特點(diǎn)，創(chuàng)擬竹葉增食劑的整體氣味指標(biāo)參數(shù)和主要香氣指標(biāo)參數(shù)。按照上述原料選用原則，根據(jù)目標(biāo)參數(shù)和香原料的主要香氣和味道特征，初步篩選出擬用的66 種食品級(jí)單體呈香物質(zhì)（表1）。由表1 可知，青香相關(guān)的單體呈香物質(zhì)有22 種，甜氣有23 種，油脂（脂肪）氣有19 種，奶香有17 種，葉香（青葉香）有2 種，草香（青草香）有2 種，木質(zhì)氣（木香）有10 種，青蘋果氣有2 種。某種單體呈香物質(zhì)可呈現(xiàn)多種香氣，取決于嗅感閾值、相對(duì)濃度、溶劑、其他相生相克的呈香物質(zhì)濃度等。

表1 圈養(yǎng)小熊貓竹葉增食劑的擬用單體呈香物質(zhì)Table 1 The monomer aromatic substances maybe selectively used in the bamboo leaf intake enhancer for captive red pandas

（續(xù)表1）

1.5 風(fēng)味特點(diǎn)

香氣特點(diǎn)：7 名專業(yè)人員分別對(duì)蘸有適量竹葉增食劑液體的專用紙條進(jìn)行單獨(dú)嗅感盲評(píng)，分辨出竹葉增食劑的整體氣味指標(biāo)、主要香氣種類及其相對(duì)強(qiáng)弱。氣味相對(duì)強(qiáng)弱采用10 分定義的標(biāo)度方法計(jì)分，具體方法參照相關(guān)文獻(xiàn)［15］。每個(gè)評(píng)分指標(biāo)的最終得分為去掉1 個(gè)最高評(píng)分和1 個(gè)最低評(píng)分后的算術(shù)平均數(shù)（n ＝5）。整體氣味指標(biāo)和主要香氣指標(biāo)的品評(píng)平均得分分別如圖2、圖3 所示。

圖2 圈養(yǎng)小熊貓竹葉增食劑的嗅感品評(píng)整體氣味指標(biāo)平均得分Figure 2 The average scores of overall odor indexes by olfactory evaluations of the bamboo leaf intake enhancer for captive red pandas

從圖2 可見(jiàn)，竹葉增食劑具有揮發(fā)屬性，且香氣強(qiáng)度較好，愉悅度和透發(fā)性中等偏上。從圖3 可見(jiàn)，竹葉增食劑的青香明顯，并有輕微的甜氣，微微的油脂氣、奶香、葉香、草香和木質(zhì)氣，表明竹葉增食劑的香氣是以青香和甜氣為主的多種復(fù)合型香氣，可從表1 的單體呈香物質(zhì)中查到圖3 中主要香氣指標(biāo)的相應(yīng)支撐物質(zhì)，說(shuō)明專業(yè)人員的嗅感品評(píng)結(jié)果是有物質(zhì)依據(jù)的，與配方相符。

圖3 圈養(yǎng)小熊貓竹葉增食劑的嗅感品評(píng)主要香氣指標(biāo)平均得分Figure 3 The average scores of main aroma indexes by olfactory evaluations of the bamboo leaf intake enhancer for captive red pandas

味道特點(diǎn)：經(jīng)6 位專業(yè)人員的口感品嘗，竹葉增食劑的甜味突出，有奶味和青香味，但無(wú)苦澀味。

2 飼喂試驗(yàn)

2.1 受試小熊貓與飼養(yǎng)圈舍

受試小熊貓1—10 歲，共23 只（8 只雌性、15 只雄性），分群混養(yǎng)于中國(guó)大熊貓保護(hù)研究中心都江堰基地林澤園，臨床健康狀況良好，基本信息見(jiàn)表2。受試小熊貓的飼養(yǎng)圈舍原本為飼養(yǎng)大熊貓所建，由內(nèi)舍和外圈組成，內(nèi)舍有一人工可控的出入口與外圈相通，圈舍所處的自然環(huán)境條件、內(nèi)舍和外圈里面的設(shè)施條件參考有關(guān)文獻(xiàn)設(shè)置［20］，具有自由隨意活動(dòng)的適宜面積和空間，但不同圈舍所在的地勢(shì)和所養(yǎng)的動(dòng)物只數(shù)有所差異。

表2 受試小熊貓和飼喂試驗(yàn)的一些相關(guān)信息Table 2 Some information about tested red pandas and their feeding trials

2.2 供試竹種

試驗(yàn)共用2 個(gè)竹種：①八月竹Chimonobambusa szechuanensis（Rendle）P.C.Keng，產(chǎn)于四川省汶川縣三江鎮(zhèn)，竹齡2 年，在2022 年4 月下旬、5 月底至6月初的試驗(yàn)期間使用；②刺黑竹（當(dāng)?shù)厮追Q牛尾竹）Chimonobambusa purpurea J.R.Xue ＆ T.P.Yi，產(chǎn)于四川省崇州市文井江鎮(zhèn)，竹齡3 年，在2022 年6 月下旬的試驗(yàn)期間使用。上述2 個(gè)供試竹種均為人工栽培，并經(jīng)專家鑒定確認(rèn)，且屬圈養(yǎng)大熊貓和小熊貓的常喂竹種。

2.3 飼喂試驗(yàn)方法（自由選擇攝食試驗(yàn)法）

從購(gòu)回的同捆竹子（包括稈、枝、葉，下同）中挑選出本次試驗(yàn)用竹，再隨機(jī)分成竹子根數(shù)相同、竹稈粗細(xì)和枝葉數(shù)量大致相近的對(duì)照組和試驗(yàn)組，稱重。試驗(yàn)組的竹稈基部貼口序紙作為標(biāo)記，向試驗(yàn)組的竹葉霧化噴施竹葉增食劑，而對(duì)照組的竹稈不貼口序紙，也不噴施竹葉增食劑。然后將對(duì)照組和試驗(yàn)組的竹子擺放在內(nèi)舍和（或）外圈里面常放食物的地方，每處均放試驗(yàn)組和對(duì)照組的竹子各3 根，兩組竹子相鄰，打開(kāi)內(nèi)舍與外圈之間的推拉門，小熊貓可隨意進(jìn)出并自由選擇內(nèi)舍和外圈的對(duì)照組竹葉或（和）試驗(yàn)組竹葉攝食。若單獨(dú)在內(nèi)舍進(jìn)行午餐時(shí)段測(cè)試時(shí)才關(guān)閉內(nèi)舍與外圈之間的出入口，其他時(shí)段均打開(kāi)出入口。每天的飼喂有3 次，早飼、午飼和晚飼。測(cè)試時(shí)段結(jié)束后從圈舍中取出對(duì)照組和試驗(yàn)組的竹子，觀察竹葉攝食情況，并對(duì)剩余的竹子稱重。各圈舍飼養(yǎng)的小熊貓只數(shù)、試驗(yàn)日期和天數(shù)、內(nèi)舍和外圈擺放對(duì)照組和試驗(yàn)組竹子的處數(shù)如表2 所示。下一次飼喂竹子時(shí)對(duì)照組和試驗(yàn)組竹子要相互交換擺放的位置，以消除竹子的擺放位置對(duì)小熊貓攝食對(duì)照組和試驗(yàn)組竹葉數(shù)量的影響。除試驗(yàn)組竹子要噴竹葉誘食劑外，窩窩頭、蘋果、胡蘿卜、竹筍的飼喂時(shí)間、次數(shù)、地點(diǎn)、數(shù)量等飼養(yǎng)管理工作流程均與往常相同。試驗(yàn)期間每天擺放和取出竹子的大致時(shí)間如表3 所示。

表3 試驗(yàn)期間每天擺放和取出試竹的大致時(shí)間Table 3 Approximate time of placing and removing the tested bamboos everyday during trial periods

2.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)組或?qū)φ战M竹葉的攝食量＝試驗(yàn)組或?qū)φ战M竹子的投放重量-食后竹子的剩余重量；平均每只受試小熊貓?jiān)囼?yàn)組或?qū)φ战M竹葉的攝食量＝試驗(yàn)組或?qū)φ战M竹葉的攝食量／試驗(yàn)圈舍的受試小熊貓只數(shù)；平均每次試驗(yàn)每只受試小熊貓?jiān)囼?yàn)組或?qū)φ战M竹葉的攝食量（受試小熊貓攝食竹葉量的均值）＝每次試驗(yàn)的平均每只受試小熊貓?jiān)囼?yàn)組或?qū)φ战M的竹葉攝食量之和／試驗(yàn)次數(shù)；試驗(yàn)組竹葉的增食量＝試驗(yàn)組竹葉的攝食量-對(duì)照組竹葉的攝食量；試驗(yàn)組的竹葉增食率＝試驗(yàn)組竹葉的增食量／對(duì)照組竹葉的攝食量× 100%。試驗(yàn)組和對(duì)照組食后竹子的剩余重量均不包含竹子在攝食期間自然蒸發(fā)的粗水分重量。所得數(shù)據(jù)通過(guò)GranphPad Prism 8.0.2 軟件進(jìn)行配對(duì)t 檢驗(yàn)。

2.5 結(jié)果及分析

自由選擇攝食行為觀察：對(duì)受試小熊貓?jiān)陲暫蟛痪米杂蛇x擇攝食情況進(jìn)行隨機(jī)、短時(shí)觀察，結(jié)果匯總于表4。從表4 可見(jiàn)，試驗(yàn)共觀察了8d，總計(jì)14次。在不同時(shí)間，早飼后觀察了3 次，午飼后觀察了2次，晚飼后觀察了9 次；在不同編號(hào)的圈舍（不同地勢(shì)、不同朝向，養(yǎng)有不同性別和年齡的受試小熊貓），L - 01 號(hào)圈觀察了1 次，L - 03 號(hào)圈觀察了11次，L-04 號(hào)圈觀察了2 次；在不同的放竹地點(diǎn)（不同的面積、空間、空氣流通度、光照強(qiáng)度等），內(nèi)舍觀察了5 次，外圈觀察了9 次；對(duì)不同的供試竹種（不同竹種的竹葉形狀、大小和厚薄不同，氣味［13］和味道有所差異），八月竹觀察了11 次，刺黑竹觀察了3次。僅有1 只受試小熊貓?jiān)?022 年5 月29 日L-03號(hào)外圈早飼后在食對(duì)照組竹葉，可能因饑不擇食所致。除此之外，其他38 只次都在食試驗(yàn)組竹葉，占比97.44%（38 只次/39 只次）；而攝食對(duì)照組竹葉的只次占比僅為2.56%，兩組間差異極顯著（n ＝14，P ＜0.0001），說(shuō)明受試小熊貓優(yōu)先選擇試驗(yàn)組的竹葉攝食具有一定的普遍性。試驗(yàn)組的竹葉比對(duì)照組的竹葉更能吸引受試小熊貓去攝食，即試驗(yàn)組竹葉因?yàn)閲娪兄袢~增食劑而增強(qiáng)了試驗(yàn)組竹葉的氣味強(qiáng)度，使之更具誘食性，同時(shí)說(shuō)明竹葉增食劑的氣味類型是圈養(yǎng)小熊貓熟悉和喜歡的食物氣味類型。

表4 受試小熊貓飼后不久自由選擇攝食的短時(shí)觀察結(jié)果Table 4 Short- time observation results of free choice ingestions of captive red pandas soon after feeding

竹葉攝食量：竹葉攝食量是衡量竹葉增食劑飼喂效果好與不好的關(guān)鍵指標(biāo)。通過(guò)飼喂試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)及其統(tǒng)計(jì)分析詳見(jiàn)表5。由表5 可知：早餐段（早飼后至午飼前）的氣溫通常逐漸上升至高點(diǎn)，平均每次測(cè)試每只受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的數(shù)量比對(duì)照組竹葉多46.53g，兩組之間的竹葉攝食量差異顯著（n ＝6，P ＝0.0189），試驗(yàn)組竹葉的增食率為94.37%。午餐段（午飼后至晚飼前）常為全天氣溫最高的時(shí)段，平均每次測(cè)試每只受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的數(shù)量比對(duì)照組竹葉多43.03g，兩組之間的竹葉攝食量差異顯著（n ＝7，P ＝0.0222），試驗(yàn)組竹葉的增食率為73.76%。早餐延長(zhǎng)段（早飼后至晚飼前）的氣溫通常逐漸上升至高溫區(qū)隨后逐漸下降，平均每次測(cè)試每只受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的數(shù)量比對(duì)照組竹葉多51.32g，兩組之間的竹葉攝食量差異極顯著（n ＝14，P ＝0.0003），試驗(yàn)組竹葉的增食率為55.96%。晚餐段（晚飼后至次日早飼前）的氣溫變化通常呈V 字形，用八月竹試驗(yàn)，平均每次測(cè)試每只受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的數(shù)量比對(duì)照組竹葉多98.54g，兩組之間的竹葉攝食量差異極顯著（n ＝24，P ＜0.0001），試驗(yàn)組竹葉的增食率為79.10%。為了驗(yàn)證竹葉增食劑是否在其他竹種上也有明顯的使用效果，在這個(gè)時(shí)段又用刺黑竹進(jìn)行了試驗(yàn)，平均每次測(cè)試每只受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的數(shù)量比對(duì)照組竹葉多55.56g，兩組之間的竹葉攝食量差異極顯著（n ＝6，P ＝0.0063），試驗(yàn)組竹葉的增食率為54.80%。全天段（早飼后至次日早飼前），本時(shí)段的氣溫變化通常呈變形的N 字形，因氣溫較高原因，未在外圈試驗(yàn)，平均每次測(cè)試每只受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的數(shù)量比對(duì)照組竹葉多67.50g，兩組之間的竹葉攝食量差異顯著（n ＝5，P ＝0.0162），試驗(yàn)組竹葉的增食率為58.69%。受試小熊貓?jiān)诓煌瑴y(cè)試時(shí)段對(duì)試驗(yàn)組竹葉和對(duì)照組竹葉的平均攝食量、試驗(yàn)組竹葉的增食量和增食率有所不同，可能的主要影響因素有：①攝食節(jié)律和其他食物飼喂數(shù)量。每天的攝食節(jié)律和每次飼喂窩窩頭、蘋果、胡蘿卜、竹筍的數(shù)量多少。②環(huán)境氣溫。因竹葉增食劑有揮發(fā)性，故環(huán)境溫度越高，噴了竹葉增食劑后的試驗(yàn)組竹葉的香氣散失越快，誘食效果衰減速度就會(huì)越快。③放置時(shí)間。試驗(yàn)組竹葉在內(nèi)舍和外圈放置時(shí)間越長(zhǎng)，其香氣散失就會(huì)越多。④投喂竹葉的數(shù)量。當(dāng)受試小熊貓食完試驗(yàn)組竹葉后，也會(huì)選擇對(duì)照組的竹葉攝食，導(dǎo)致試驗(yàn)組竹葉攝食量和對(duì)照組竹葉攝食量的差距縮小。⑤竹種的差異。不同竹種的竹葉有著不同的風(fēng)味濃度和類型［13］，或多或少會(huì)影響竹葉增食劑的使用效果。

表5 圈養(yǎng)小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉和對(duì)照組竹葉的重量差異與統(tǒng)計(jì)分析Table 5 Weight differences and statistical analyses between test and control bamboo leavesingested by captive red pandas

綜上，霧化噴施竹葉增食劑的試驗(yàn)組竹葉無(wú)論是早飼、午飼還是晚飼，無(wú)論是放在內(nèi)舍還是外圈，無(wú)論放置時(shí)間是長(zhǎng)還是短，無(wú)論是八月竹還是刺黑竹，無(wú)論是性別還是年齡，無(wú)論是大群飼養(yǎng)還是小群飼養(yǎng)，都能提高受試小熊貓對(duì)竹葉的攝食量，平均每次測(cè)試每只受試小熊貓的增食量為43.03—98.54g，增食率為54.80%—94.37%，說(shuō)明竹葉增食劑都能夠促進(jìn)受試小熊貓攝食，具有顯著的增食效果。

竹葉再利用的試驗(yàn)：竹葉再利用是指內(nèi)舍里上一次飼喂的對(duì)照組竹子在下一次飼喂時(shí)竹子的葉片依然舒展，顏色仍然為綠色，經(jīng)霧化噴施竹葉增食劑后作為本內(nèi)舍的試驗(yàn)組竹葉。本試驗(yàn)于2022 年5月29 日和6 月2 日的晚餐段在L - 03 號(hào)圈、L - 04號(hào)圈和L-05 號(hào)圈的內(nèi)舍進(jìn)行，因氣溫較高已造成竹葉部分失水，但失水情況并不嚴(yán)重，未在外圈試驗(yàn)，只在內(nèi)舍用八月竹試驗(yàn)了5 次，受試小熊貓26只次，平均每次測(cè)試每只受試小熊貓攝食對(duì)照組竹葉的均值為63.33g，攝食試驗(yàn)組竹葉的均值為90.83g，試驗(yàn)組比對(duì)照組多食27.50g，兩組之間的竹葉攝食量差異顯著（n ＝5，SEM ＝8.08，P ＝0.0272），試驗(yàn)組竹葉的增食率為43.42%。雖然試驗(yàn)組的竹葉增食量和增食率均不及表5 中的高，但可提高受試小熊貓對(duì)本應(yīng)廢棄的竹葉的再利用，說(shuō)明霧化噴施竹葉增食劑是圈養(yǎng)小熊貓對(duì)竹葉再利用的一項(xiàng)技術(shù)措施。

被食葉片的數(shù)量觀察：圈養(yǎng)小熊貓攝食精細(xì)，只食葉片，不食葉柄，更不食竹枝和竹稈。肉眼容易觀察到每根竹子的葉片被食情況，因?yàn)槿~片被小熊貓攝食后留有葉柄和竹枝。經(jīng)受試小熊貓自由選擇攝食后，試驗(yàn)組竹子的葉片，有的基本食完，有的食了大部分，多數(shù)剩葉較少，個(gè)別的食過(guò)少許。而對(duì)照組竹子的葉片，有的未食，有的食過(guò)少許，多數(shù)剩葉較多，個(gè)別的少量剩余。試驗(yàn)結(jié)果表明，噴有竹葉增食劑的試驗(yàn)組竹葉被食片數(shù)明顯多于對(duì)照組，這也佐證了上述竹葉攝食量的測(cè)試結(jié)果。

受試小熊貓食入竹葉增食劑后的臨床健康狀況觀察：在飼喂試驗(yàn)期間和期后，每天對(duì)受試小熊貓的精神狀況、行為姿勢(shì)、飲食排泄、活動(dòng)規(guī)律等情況進(jìn)行觀察。從2022 年4 月20 日試驗(yàn)開(kāi)始，到8 月12日為止，每只受試小熊貓的臨床健康狀況都很正常，無(wú)一生病治療，而且如數(shù)健在。養(yǎng)于L-04 號(hào)圈，呼名“辰月”的受試小熊貓?jiān)陲曃乖囼?yàn)期間正常發(fā)情、交配和妊娠，在飼喂試驗(yàn)期后的7 月16 日正常分娩2仔。說(shuō)明竹葉增食劑不影響受試小熊貓的臨床健康狀況和自然繁殖。

3 討論

從上述測(cè)試結(jié)果可知，竹葉增食劑可增強(qiáng)竹葉對(duì)受試小熊貓的誘食性，提高受試小熊貓對(duì)竹葉的攝食量。其誘食機(jī)制可能如下：竹葉增食劑霧化噴施于竹葉后，增強(qiáng)了竹葉的香氣強(qiáng)度，也增強(qiáng)了來(lái)自竹葉的香氣的擴(kuò)散性，使受試小熊貓不但在較遠(yuǎn)處就能感知，而且精準(zhǔn)識(shí)別香氣的發(fā)源地；竹葉增食劑的香氣與新鮮竹葉的本身氣味相互融合后，改善了竹葉的香氣類型，組建后的復(fù)合型香氣為受試小熊貓所熟悉，并認(rèn)知安全和可食，激發(fā)攝食欲望，樂(lè)意去攝食，導(dǎo)致受試小熊貓優(yōu)先選擇噴有竹葉增食劑的試驗(yàn)組竹葉攝食，而不優(yōu)先選擇位置相鄰的對(duì)照組竹葉攝食。其增食機(jī)制可能如下：竹葉增食劑有突出的甜味，在霧化噴施之后可以中和或掩蓋竹葉的不良味道，減少不良味道對(duì)于攝食量的負(fù)面影響；小熊貓具有完整的甜味受體基因［7，8］，對(duì)食物的甜味敏感，圈養(yǎng)小熊貓喜食窩窩頭、蘋果和胡蘿卜，這些食物均有明顯的甜味，也是圈養(yǎng)小熊貓對(duì)有甜味的食物感興趣的例證；竹葉攝食量的多少主要取決于竹葉的味道是否適合小熊貓的味覺(jué)喜好，竹葉在霧化噴施竹葉增食劑之后滿足了受試小熊貓的味覺(jué)偏好，導(dǎo)致受試小熊貓自由選擇噴有竹葉增食劑的試驗(yàn)組竹葉較多攝食，而自由選擇位置相鄰的對(duì)照組竹葉較少攝食，這可能也是試驗(yàn)組的竹葉增食量和增食率大幅提升的理由。本文通過(guò)圈養(yǎng)小熊貓食物額外補(bǔ)充香氣和味道的試驗(yàn)方法，也證實(shí)了食物的氣味和味道是小熊貓?jiān)跀z食過(guò)程中最重要的兩種感覺(jué)與認(rèn)知，分別決定小熊貓是否攝食和攝食量的多少，屬小熊貓自主調(diào)控?cái)z食的主要食物因子。

鑒于大熊貓與小熊貓食性相同，均食相同竹種的竹葉和竹筍，而小熊貓?bào)w型小、食量小、易飼養(yǎng)、成本較低、性格溫順、對(duì)人的傷害性較低，在探究攝食機(jī)理、食量調(diào)控措施等方面可作為大熊貓的動(dòng)物模型進(jìn)行先行試驗(yàn)。

4 結(jié)論

本研究在國(guó)內(nèi)外率先自主研制出的竹葉增食劑，經(jīng)專業(yè)人員的嗅感和口感品評(píng)，具有揮發(fā)屬性，香氣強(qiáng)度較好，愉悅度和透發(fā)性中等偏上，青香明顯，并有輕微的甜氣，甜的味道突出。通過(guò)圈養(yǎng)小熊貓自由選擇攝食試驗(yàn)組竹葉（霧化噴施竹葉增食劑）和對(duì)照組竹葉（不噴竹葉增食劑）的飼喂效果測(cè)試。結(jié)果表明：①受試小熊貓優(yōu)先選擇試驗(yàn)組的竹葉攝食，竹葉增食劑對(duì)小熊貓具有誘食功能。②在一天里的不同時(shí)段，受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉比對(duì)照組竹葉的平均增食量和增食率分別為43. 03—98.54g和54.80%—94.37%。對(duì)圈養(yǎng)小熊貓而言，竹葉增食劑能夠增強(qiáng)竹葉的誘食性，且竹葉增食效果顯著。

本文初步探討了小熊貓攝食竹葉的風(fēng)味機(jī)理，竹葉增食劑為提高圈養(yǎng)小熊貓對(duì)竹葉的食用率和降低竹葉的廢棄率提供了一項(xiàng)技術(shù)措施，具有實(shí)際應(yīng)用潛質(zhì)，但仍有待進(jìn)一步探究不同類型的氣味或（和）味道及其不同補(bǔ)加劑量對(duì)圈養(yǎng)小熊貓攝食竹葉行為和數(shù)量的影響。

（致謝：承蒙成都大帝漢克生物科技有限公司喻麟董事長(zhǎng)和李小兵總經(jīng)理的大力支持，竹葉增食劑的研制工作得以順利實(shí)施，西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院的包清彬教授、成都大帝漢克生物科技有限公司的李松柏高級(jí)工程師、鄧虹高級(jí)工程師、武偉工程師參加了風(fēng)味品評(píng)，吳勁旭老師核定了供試竹種的學(xué)名，四川省自然資源科學(xué)研究院的張玉婷同事在數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方面提供了幫助，在此一并深表謝意！）