趙鑫丹 賈彩霞 肖敏 郝苑汝 翟梅枝

(遼寧省旱地農(nóng)林研究所，朝陽(yáng)，122000)(西北農(nóng)林科技大學(xué))

核桃(JuglansregiaL.)，又稱胡桃、羌桃，胡桃科(Juglandaceae)核桃屬(Juglans)落葉喬木。我國(guó)核桃種質(zhì)資源豐富，種植范圍極廣，黑龍江、遼寧、湖北、陜西、云南、四川等22省市均有分布[1]。核桃營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，含油率在60%～70%，其中油酸、亞油酸、亞麻酸等不飽和脂肪酸占90%以上，其次是蛋白質(zhì)和碳水化合物，含量分別在15%和10%以上[2]。核桃具有多種生物活性，如抗氧化、抗腫瘤、抑菌、抗炎、降脂、降血糖等，其抗氧化活性尤為突出，素有“抗氧化之王”之稱[3]。已有研究表明，核桃仁中90%抗氧化活性物質(zhì)都來(lái)源于核桃內(nèi)種皮[4]。Angeli et al.[5]研究發(fā)現(xiàn)核桃內(nèi)種皮提取物可以清除自由基，對(duì)超氧陰離子及DPPH自由基清除能力半抑制質(zhì)量濃度分別為80和48.35 mg/L。張澤生等[6]研究發(fā)現(xiàn)核桃內(nèi)種皮提取物可以減輕D-半乳糖致衰小鼠的氧化損傷，顯著提高小鼠血清、肝臟和腦組織中超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力和總抗氧化能力，并降低丙二醛質(zhì)量摩爾濃度。研究發(fā)現(xiàn)，核桃內(nèi)種皮抗氧化活性物質(zhì)主要為鞣花酸[7]。

鞣花酸，化學(xué)式為C14H6O8，是一種天然多酚，沒(méi)食子酸的二聚衍生物。鞣花酸最早于1818年被法國(guó)化學(xué)家亨利·布拉科諾從五倍子中發(fā)現(xiàn)。鞣花酸抗氧化活性極強(qiáng)，還具有抗癌變、抗菌、抗腫瘤等生物活性[8]。肖玉欣等[9]發(fā)現(xiàn)鞣花酸可以抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，并可以通過(guò)調(diào)控線粒體功能發(fā)揮抗氧化活性。孫勛[10]研究發(fā)現(xiàn)鞣花酸可以抑制小鼠突觸丟失、神經(jīng)元凋亡及氧化應(yīng)激水平，表明鞣花酸是一種較好的具有亨廷頓舞蹈病治療潛力的天然化合物。鞣花酸有游離和縮合兩種形式，自然界中鞣花酸大部分以縮合形式存在，游離鞣花酸含量極少[11]，經(jīng)加酸處理可使縮合態(tài)鞣花酸水解出來(lái)[12]，但核桃內(nèi)種皮鞣花酸的酸水解工藝未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。課題組前期研究初步顯示，核桃內(nèi)種皮醇提物的不同極性萃取物抗氧化活性不同，但以乙酸乙酯萃取物(EAE)抗氧化活性較好。在此基礎(chǔ)上，本研究擬利用HPLC法測(cè)定EAE中鞣花酸含量，通過(guò)酸水解下的單因素篩選和正交試驗(yàn)，優(yōu)化酸水解提高鞣花酸得率的提取工藝，為核桃內(nèi)種皮資源的高效開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

試驗(yàn)材料：核桃采自西北農(nóng)林科技大學(xué)山陽(yáng)核桃試驗(yàn)示范站，選擇‘香玲’、‘西林3號(hào)’等核桃良種采樣。堅(jiān)果挑選大小基本一致且無(wú)病蟲(chóng)害的果實(shí)，人工去青皮、去果殼、剝離內(nèi)種皮，將內(nèi)種皮陰干、粉碎，過(guò)60目篩，冰箱4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

所用試劑：色譜乙腈、色譜甲醇(安徽天地高純?nèi)軇┯邢薰?、色譜甲酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)、均為色譜純；三氟乙酸(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)、鹽酸、硫酸、醋酸、磷酸、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、無(wú)水乙醇(成都市科隆化學(xué)品有限公司)均為分析純；鞣花酸(上海源葉生物科技有限公司)分析標(biāo)準(zhǔn)品。

所用儀器：LC-15C高效液相色譜儀(島津企業(yè)管理中國(guó)有限公司)；HH-2電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)；YJ-2004高速中藥粉碎機(jī)(濟(jì)南億健醫(yī)療設(shè)備有限公司)；ME104E電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

1.1 供試樣品制備

稱取核桃內(nèi)種皮粉末10 g，加體積分?jǐn)?shù)85%乙醇300 mL，53 ℃超聲輔助提取55 min后過(guò)濾，收集上清液，殘?jiān)谙嗤瑮l件下重復(fù)提取2次，合并3次上清液，減壓濃縮得醇提物[13-14]。將醇提物用蒸餾水溶解，依次分別用1.5倍體積的石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇多次萃取至顏色很淡時(shí)，收集各萃取液，減壓濃縮得浸膏，根據(jù)前期試驗(yàn)乙酸乙酯萃取物(EAE)抗氧化活性最強(qiáng)，故本試驗(yàn)選取EAE備用。

1.2 試驗(yàn)方法

EAE游離鞣花酸測(cè)定。準(zhǔn)確稱取0.05 g EAE樣品，加入V(色譜甲醇)∶V(0.1%三氟乙酸)=4∶1溶液至50 mL；樣液用0.22 μm濾膜過(guò)濾，取濾液上機(jī)分析[15]。HPLC的色譜條件：WondaSil C18色譜柱(4.6 mm×250.0 mm，5 μm)，柱溫30 ℃，進(jìn)樣體積20 μL，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，采用V(0.1%甲酸水溶液)∶V(乙腈)=80∶20等度洗脫[16]。

EAE酸水解后游離鞣花酸測(cè)定。準(zhǔn)確稱取0.05 g EAE樣品，加入2 mol/L三氟乙酸溶液至50 mL，90 ℃水浴2 h，冷卻后用色譜甲醇稀釋10倍，0.22 μm濾膜過(guò)濾，取濾液上機(jī)分析[15]。HPLC色譜條件同上。

鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。準(zhǔn)確稱取10 mg鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品，加色譜甲醇至10 mL，得1 g/mL鞣花酸母液，用色譜甲醇將母液稀釋至鞣花酸質(zhì)量濃度分別25、50、100、200、300、400、500 mg/L，0.22 μm濾膜過(guò)濾，取濾液上機(jī)分析。HPLC色譜條件同上。以峰面積(y)為縱坐標(biāo)，鞣花酸濃度(x)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為：y=18.286x-350.52，R2=0.999 7。說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸性良好，可以用于定量分析。

精密度試驗(yàn)。取鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取6份EAE樣品0.05 g，處理后按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值。

穩(wěn)定性試驗(yàn)。取處理后樣品，按上述色譜條件，在第0、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值。

加標(biāo)回收率試驗(yàn)。精密稱取6份EAE樣品0.05 g，取處理后樣品，分別加入等量鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加標(biāo)回收率。

不同酸對(duì)EAE水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響。準(zhǔn)確稱取EAE樣品0.5 g，分別加入2 mol/L三氟乙酸、鹽酸、硫酸、醋酸、磷酸各50 mL，充分搖勻后放入水浴鍋90 ℃水解2 h，通過(guò)HPLC測(cè)定不同酸水解后樣品中游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

水解時(shí)間對(duì)EAE水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響。準(zhǔn)確稱取EAE樣品0.5 g，加入2 mol/L三氟乙酸50 mL，充分搖勻后放入90 ℃水浴鍋，分別水解1、2、3、4、5 h，采用HPLC法測(cè)定不同時(shí)間水解后樣品中游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

水解溫度對(duì)EAE水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響。準(zhǔn)確稱取EAE樣品0.5 g，加入2 mol/L三氟乙酸50 mL，充分搖勻后分別放入水浴鍋60、70、80、90、100 ℃水解2 h，采用HPLC測(cè)定樣品不同溫度水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

酸濃度對(duì)EAE水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響。準(zhǔn)確稱取EAE樣品0.5 g，分別加入1、2、3、4、5 mol/L三氟乙酸50 mL，充分搖勻后放入水浴鍋90 ℃水解2 h，采用HPLC測(cè)定樣品不同濃度酸水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

鞣花酸水解條件正交試驗(yàn)。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為考察指標(biāo)，選取三氟乙酸濃度、水解溫度和水解時(shí)間進(jìn)行L9(34)正交優(yōu)化試驗(yàn)，對(duì)水解內(nèi)種皮EAE鞣花酸工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定內(nèi)種皮鞣花酸水解的最佳工藝條件。因素水平設(shè)計(jì)如表1所示。

表1 正交試驗(yàn)因素和水平

1.3 數(shù)據(jù)處理

測(cè)定設(shè)置3次重復(fù)試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果以(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)表示。采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，Duncan法進(jìn)行顯著性分析，Origin 9.1軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 酸水解前后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)

按上述色譜條件得到鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品、EAE水解前后樣品中游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)色譜圖(圖1)。由圖1(A)可知，鞣花酸色譜峰峰形良好，無(wú)雜峰干擾，基線平穩(wěn)。根據(jù)峰面積及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)，內(nèi)種皮EAE酸水解前后游離鞣花酸分別為68.29、306.96 mg/g，水解后質(zhì)量分?jǐn)?shù)提高238.67 mg/g。這是由于加酸處理后樣品中結(jié)合態(tài)鞣花酸發(fā)生水解，使得游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)由6.83%升高至30.70%，水解后游離鞣花酸得率是水解之前的4.49倍。說(shuō)明加酸水解后可提高內(nèi)種皮游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)。為更好地提高EAE水解后游離鞣花酸得率，對(duì)EAE鞣花酸水解條件進(jìn)行工藝優(yōu)化。

A、B、C分別代表鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品、EAE水解前后游離態(tài)鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的色譜圖；峰1為鞣花酸。

經(jīng)方法學(xué)考察發(fā)現(xiàn)，其精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)分別為0.92%、1.14%、1.38%。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，鞣花酸加樣的平均回收率為98.18%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.20%。這些都說(shuō)明該方法下儀器精密度良好，方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好，供試樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，此方法可用于核桃內(nèi)種皮鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的定量測(cè)定與分析。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2 內(nèi)種皮鞣花酸水解工藝條件優(yōu)化

2.2.1 單因素試驗(yàn)

單因素對(duì)內(nèi)種皮鞣花酸水解效果的影響見(jiàn)表3。由表3可知，在濃度為2 mol/L時(shí)，三氟乙酸水解后游離鞣花酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)高于其他酸處理(p<0.05)。三氟乙酸水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)371.95 mg/g，醋酸水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低，為197.00 mg/g，僅為三氟乙酸水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的52.96%。不同酸水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)由大到小依次為三氟乙酸、鹽酸、硫酸、磷酸、醋酸。說(shuō)明加入三氟乙酸水解可以使結(jié)合態(tài)鞣花酸較好地游離出來(lái)。因此，選取三氟乙酸為適宜的水解酸。不同濃度三氟乙酸處理對(duì)水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響差異顯著(p<0.05)。當(dāng)酸濃度<4 mol/L時(shí)，水解后鞣花酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)隨著酸濃度的增大而增加，酸濃度>4 mol/L鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈下降趨勢(shì)。表明在一定范圍內(nèi)提高酸濃度可以促進(jìn)結(jié)合態(tài)鞣花酸的水解，但濃度過(guò)高會(huì)影響水解效果。因此選取4 mol/L三氟乙酸為適宜水解濃度。水解處理在1～3 h時(shí)，游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)隨水解時(shí)間的延長(zhǎng)而呈顯著上升趨勢(shì)(p<0.05)，水解1 h時(shí)游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為285.07 mg/g，水解3 h達(dá)到409.50 mg/g；當(dāng)水解時(shí)間3～5 h時(shí)，游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)稍有上升，差異不顯著，水解5 h時(shí)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為409.85 mg/g，僅比水解3 h增加0.35 mg/g。說(shuō)明水解3 h時(shí)供試樣品中結(jié)合態(tài)鞣花酸幾乎水解完全，故選取3 h為適宜的水解時(shí)間。水解溫度在60～80 ℃時(shí)，隨著溫度的升高，水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)稍有增加，差異不顯著，80 ℃水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為246.85 mg/g，僅比60 ℃水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)高10.75 mg/g；而當(dāng)溫度>80 ℃時(shí)，隨著溫度的升高游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈顯著上升趨勢(shì)(p<0.05)，100 ℃水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)394.54 mg/g，比80 ℃時(shí)高出147.69 mg/g。說(shuō)明溫度升高有利于EAE中結(jié)合態(tài)鞣花酸的水解。因此選取100 ℃為適宜水解溫度。

表3 單因素試驗(yàn)內(nèi)種皮鞣花酸水解效果

注：表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差；同組同列不同字母表示差異顯著(p<0.05)。

綜上，就水解酸種類、酸濃度、水解溫度、水解時(shí)間對(duì)水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響而言，選擇4 mol/L三氟乙酸水溶液、水解溫度100 ℃和水解3 h較好。

2.2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)化工藝條件

基于單因素試驗(yàn)，以三氟乙酸濃度、水解溫度、水解時(shí)間進(jìn)行的鞣花酸水解工藝條件正交優(yōu)化，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可看出，正交試驗(yàn)極差(R)由大到小表現(xiàn)為A、B、C，表明各因素對(duì)內(nèi)種皮鞣花酸水解的影響效果由大到小依次為三氟乙酸濃度、水解溫度、水解時(shí)間。通過(guò)k值比較得到鞣花酸水解的最佳工藝條件為A1B2C3，即三氟乙酸濃度3.5 mol/L、水解溫度95 ℃、水解時(shí)間3.5 h。

表4 正交試驗(yàn)結(jié)果

由極差進(jìn)行直觀分析，方便清晰，但無(wú)法確定是由因素水平變化引起試驗(yàn)結(jié)果不同，還是由誤差導(dǎo)致的，因此對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析(表5)。結(jié)果顯示，三氟乙酸濃度對(duì)鞣花酸水解影響顯著(p<0.05)，水解溫度及時(shí)間影響不顯著，這與極差分析結(jié)果一致。說(shuō)明試驗(yàn)結(jié)果是由因素、水平變化不同所致，故A1B2C3為內(nèi)種皮鞣花酸水解的最佳工藝條件。

表5 正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果

2.3 試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證

根據(jù)正交試驗(yàn)得出的最佳水解工藝條件為A1B2C3，即三氟乙酸濃度3.5 mol/L、水解溫度95 ℃、水解時(shí)間3.5 h。正交試驗(yàn)的最優(yōu)組合(A1B2C3)未在正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表內(nèi)，因此對(duì)最佳工藝組合進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，在此條件下進(jìn)行3次平行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表6，其色譜圖見(jiàn)圖2。

表6可看出，在正交試驗(yàn)確定的最佳工藝組合下，3次重復(fù)試驗(yàn)的游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)在562.08～599.18 mg/g，平均值為573.01±20.94 mg/g，高于正交試驗(yàn)結(jié)果中任一組合條件下鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)，由此說(shuō)明A1B2C3為核桃內(nèi)種皮鞣花酸水解的最優(yōu)工藝條件。由A1B2C3工藝條件下驗(yàn)證試驗(yàn)3的色譜圖(圖2)可見(jiàn)，鞣花酸是主峰，峰形良好，無(wú)雜峰干擾，其他物質(zhì)峰面積遠(yuǎn)低于鞣花酸，說(shuō)明該條件可作為內(nèi)種皮鞣花酸的最優(yōu)水解條件。

表6 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

圖2 優(yōu)化組合A1B2C3工藝條件下鞣花酸HPLC色譜圖

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)利用加酸方式水解內(nèi)種皮中鞣花酸，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過(guò)正交試驗(yàn)確定水解內(nèi)種皮鞣花酸的最佳工藝條件為：三氟乙酸濃度3.5 mol/L、水解溫度95 ℃、水解時(shí)間3.5 h，該條件下游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)可達(dá)573.01 mg/g，是水解前游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)(68.29 mg/g)的8.4倍。各因素對(duì)鞣花酸水解效果的影響由大到小為三氟乙酸濃度、水解溫度、水解時(shí)間。

利用HPLC法測(cè)定核桃內(nèi)種皮鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鞣花酸在測(cè)定范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率為98.18%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%，其方法簡(jiǎn)單、重復(fù)性和穩(wěn)定性均較好，該法可用于測(cè)定核桃內(nèi)種皮中鞣花酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

鞣花酸作為一種天然多酚二內(nèi)酯，廣泛的分布在自然界中。自然界中多以結(jié)合態(tài)存在，游離的鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低、提取率不高，采用溶劑提取法直接從植物中僅能提取出少量游離鞣花酸，而加酸水解后可大大提高鞣花酸產(chǎn)率[17]。加酸水解的原理是在酸性及加熱條件下，結(jié)合態(tài)鞣花酸中的酯鍵或苷鍵易斷裂，產(chǎn)生游離態(tài)鞣花酸[18]。楊媛等[15]研究發(fā)現(xiàn)利用溶劑提取法直接提取不同品種樹(shù)莓中鞣花酸，其游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)僅為3.86～11.83 mg/kg，而加酸水解后鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)可達(dá)37.58～125.60 mg/kg。楊笑笑等[17]采用正交試驗(yàn)優(yōu)化石榴皮中鞣花酸水解工藝，得到的最佳工藝條件為：水解時(shí)間6 h，水解溫度100 ℃，濃硫酸濃度1.0 mol/L；各因素的影響效果由大到小為酸濃度、水解溫度、水解時(shí)間，本試驗(yàn)得到結(jié)果與此一致，即酸濃度顯著影響鞣花酸的水解效果。本研究發(fā)現(xiàn)相同條件下，內(nèi)種皮乙酸乙酯萃取物中加入硫酸水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為267.94 mg/g，而加入三氟乙酸水解后游離鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為371.95 mg/g，說(shuō)明加三氟乙酸的水解效果優(yōu)于加硫酸水解；從安全性而言，濃硫酸屬中等毒性物質(zhì)，而三氟乙酸只有輕微毒性，因此選擇三氟乙酸作為水解酸來(lái)提高鞣花酸水解的安全性；從水解時(shí)間來(lái)看，本研究的最佳水解時(shí)間為3.5 h，相比前人對(duì)鞣花酸水解工藝條件的優(yōu)化，提高了工作效率。

比較鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定方法發(fā)現(xiàn)，紫外分光光度法耗用溶劑少、分析成本較低，但雜質(zhì)干擾大，結(jié)果準(zhǔn)確度不高[19]；高效毛細(xì)管電泳法測(cè)量方法準(zhǔn)確，但前處理復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)且溶劑用量大[20]；而高效液相色譜法(HPLC)操作簡(jiǎn)單、效率高、準(zhǔn)確性好，是目前最常用的一種檢測(cè)方法[12]。潘遐等[21]利用HPLC法測(cè)定藏藥石榴蓮花散中鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鞣花酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)和峰面積在測(cè)定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率98.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.8%，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，結(jié)果可靠，可用于測(cè)定石榴蓮花散中鞣花酸質(zhì)量。鄒園生等[16]利用HPLC法測(cè)定猴棗中鞣花酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鞣花酸在0.049 5～989.4 mg/L呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率為99.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%，該方法簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，具有良好的穩(wěn)定性，可用于猴棗藥材中鞣花酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的分析測(cè)定。本研究利用HPLC法測(cè)定核桃內(nèi)種皮鞣花酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，其方法簡(jiǎn)單、重復(fù)性和穩(wěn)定性均較好，結(jié)果可靠，說(shuō)明該法可用于測(cè)定核桃內(nèi)種皮中鞣花酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。