王 敏, 王新溪, 王圣印

(1.浙江省金華市永康市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心, 金華 321300; 2.浙江農(nóng)林大學(xué)現(xiàn)代農(nóng)學(xué)院, 杭州 311300)

橘小實(shí)蠅Bactroceradorsalis又名橘子蛆、果蛆、黃蒼蠅、柑橘小實(shí)蠅和東方果實(shí)蠅等,廣泛分布于中國(guó)華東、華南、華中和云貴地區(qū)[1-2]。橘小實(shí)蠅寄主范圍較廣,目前發(fā)現(xiàn)其寄主包括花卉、水果、蔬菜共76個(gè)科211個(gè)屬627種,適宜寄主種類數(shù)量高達(dá)478種[3]。橘小實(shí)蠅成蟲(chóng)羽化后需經(jīng)歷長(zhǎng)時(shí)間補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng),卵巢發(fā)育成熟后才能交配[4], 其雌成蟲(chóng)使用外生殖器刺破柑橘果皮,在果皮內(nèi)產(chǎn)卵,每處產(chǎn)卵數(shù)量5～10粒不等[5]。卵期1～6 d,孵化后幼蟲(chóng)在果肉內(nèi)為害,常導(dǎo)致柑橘被害果提前脫落,果肉腐爛失去經(jīng)濟(jì)價(jià)值[6-7]。目前橘小實(shí)蠅是重要的危險(xiǎn)性國(guó)際檢疫害蟲(chóng),也是我國(guó)的檢疫對(duì)象[8-9]。

橘小實(shí)蠅形態(tài)特征、分類地位、生活習(xí)性、發(fā)生規(guī)律和綜合防治措施是目前的主要研究?jī)?nèi)容,由于殺蟲(chóng)劑廣泛使用,關(guān)于橘小實(shí)蠅田間種群抗性的研究報(bào)道也逐漸增加[10-13]。橘小實(shí)蠅在我國(guó)華南、華中、華東和云貴地區(qū)為害猖獗,導(dǎo)致上述地區(qū)橘小實(shí)蠅抗藥性發(fā)展迅速。陳朗杰等的研究發(fā)現(xiàn),在深圳周邊地區(qū),橘小實(shí)蠅對(duì)生物源殺蟲(chóng)劑阿維菌素和菊酯類殺蟲(chóng)劑氯氟氰菊酯和高效氯氰菊酯產(chǎn)生了16.59～18.95倍的中等水平抗性,對(duì)廣譜性殺蟲(chóng)劑敵百蟲(chóng)、辛硫磷、毒死蜱與滅多威產(chǎn)生了低水平抗性,但對(duì)生物源殺蟲(chóng)劑甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(以下簡(jiǎn)稱甲維鹽)和多殺霉素仍處于敏感狀態(tài)[14]。何鳳梅等的研究發(fā)現(xiàn),廣西不同地區(qū)橘小實(shí)蠅抗性發(fā)展水平差異較大,玉林和百色等4個(gè)地市橘小實(shí)蠅田間種群均對(duì)氯氰菊酯產(chǎn)生了中等水平抗性,對(duì)阿維菌素形成中等抗性的橘小實(shí)蠅僅發(fā)現(xiàn)于桂林和玉林兩市[15]。為探索高頻使用甲維鹽防治橘小實(shí)蠅是否存在抗性風(fēng)險(xiǎn),通過(guò)室內(nèi)連續(xù)篩選33代獲得了橘小實(shí)蠅抗甲維鹽種群(43.4倍),測(cè)定了抗甲維鹽橘小實(shí)蠅種群與常用菊酯類殺蟲(chóng)劑高效氯氟氰菊酯、新煙堿類殺蟲(chóng)劑吡蟲(chóng)啉和噻蟲(chóng)胺、有機(jī)磷類殺蟲(chóng)劑辛硫磷和毒死蜱、生物源殺蟲(chóng)劑阿維菌素和多殺霉素、新型雜環(huán)殺蟲(chóng)劑蟲(chóng)螨腈的交互抗性水平,并探索了橘小實(shí)蠅對(duì)甲維鹽的生化抗性機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 供試殺蟲(chóng)劑和試劑

供試殺蟲(chóng)劑均為原藥:99%甲維鹽、99%阿維菌素和98%吡蟲(chóng)啉購(gòu)于貴州利興藥業(yè)有限公司;99%辛硫磷、99%毒死蜱、99%噻蟲(chóng)胺、99%高效氯氟氰菊酯和99%多殺霉素購(gòu)于合肥諾爾達(dá)生物科技有限公司;98%蟲(chóng)螨腈購(gòu)于陜西惠誠(chéng)生物科技有限公司。

主要試劑:98%毒扁豆堿、98%乙二胺四乙酸(EDTA)、98%牛血清白蛋白(BSA)與99%十二烷基磺酸鈉(SDS)購(gòu)于Sigma公司;70%考馬斯亮藍(lán)G250與99%還原型谷胱甘肽(GSH)購(gòu)于Fluka公司;96% α-乙酸萘酯(α-NA)購(gòu)于Aladdin公司。增效劑95%胡椒基丁醚(PBO)購(gòu)于湖北漢達(dá)飛生物科技有限公司;98%磷酸三苯酯(TPP)購(gòu)于山東國(guó)化化學(xué)有限公司;97%順丁烯二酸二乙酯(DEM)購(gòu)于上海昆淼實(shí)業(yè)有限公司。其他試劑為國(guó)產(chǎn)分析純或化學(xué)純。

1.2 供試蟲(chóng)源

相對(duì)敏感種群(S):采自浙江省金華市武義縣履坦鎮(zhèn)湯村。在果園內(nèi)采集帶蟲(chóng)柑橘落果,帶回實(shí)驗(yàn)室內(nèi)以柑橘飼喂。將蟲(chóng)果放置在鋪有5 cm河沙的塑料盆中,果內(nèi)老熟幼蟲(chóng)脫果進(jìn)入河沙內(nèi)化蛹。收集橘小實(shí)蠅成蟲(chóng)放置于20目紗籠內(nèi)(60 cm×60 cm×60 cm),為其提供蜂蜜水(3%)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng),使用柑橘誘集產(chǎn)卵。室內(nèi)飼養(yǎng)10代,期間不接觸任何殺蟲(chóng)劑,建立相對(duì)敏感種群,收集2日齡成蟲(chóng)作為供試蟲(chóng)源。

金華田間種群(JH):采自浙江省金華市永康市花街鎮(zhèn)八字墻村,蟲(chóng)果帶回室內(nèi)后參照敏感種群飼養(yǎng)。收集F2代的2日齡成蟲(chóng)供試。

甲維鹽抗性種群(EB):將甲維鹽原藥使用丙酮配制成母液,根據(jù)橘小實(shí)蠅抗性發(fā)展速度,按照每次篩選殺死約50%成蟲(chóng)的劑量在蜂蜜水中加入甲維鹽母液。收集敏感種群2日齡成蟲(chóng)約1 000頭作為供試蟲(chóng)源封閉于紗籠內(nèi),饑餓處理2 h后,在紗籠內(nèi)放入甲維鹽蜂蜜水,橘小實(shí)蠅取食1 h后取出甲維鹽蜂蜜水,使用無(wú)殺蟲(chóng)劑的柑橘繼續(xù)飼養(yǎng)。篩選33代后,抗性種群的抗性倍數(shù)為43.4倍。收集抗性種群2日齡成蟲(chóng)供試。飼養(yǎng)環(huán)境條件為(25±0.5)℃,光周期L∥D=14 h∥10 h,RH(65±5)%。

1.3 生物測(cè)定

橘小實(shí)蠅生物測(cè)定采用玻璃管藥膜法[10,14]。將供試殺蟲(chóng)劑原藥使用丙酮配制成母液,根據(jù)預(yù)試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果,將殺蟲(chóng)劑母液用丙酮稀釋成5～7個(gè)濃度。抽取10 mL稀釋后的藥液,注入玻璃管中(直徑5 cm,長(zhǎng)15 cm),搖動(dòng)玻璃管使藥液均勻涂布,倒掉多余的藥液,靜置玻璃管至內(nèi)壁藥液風(fēng)干。將20～25頭橘小實(shí)蠅2日齡成蟲(chóng)引入涂布藥膜的玻璃管,放置3%蜂蜜水浸透的棉球供成蟲(chóng)取食,用紗布封閉玻璃管口。24 h后觀察玻璃管內(nèi)橘小實(shí)蠅成蟲(chóng)的存活數(shù)量,以毛筆輕觸蟲(chóng)體不能正常爬行作為標(biāo)準(zhǔn)判定為死亡。對(duì)照組為丙酮水溶液,有效試驗(yàn)中對(duì)照組死亡率必須低于10%。處理和對(duì)照組均重復(fù)3次。

增效劑生物測(cè)定:首先將增效劑胡椒基丁醚(PBO)、磷酸三苯酯(TPP)和順丁烯二酸二乙酯(DEM)使用丙酮配制成母液(10 g/L)[16]。然后根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,將供試殺蟲(chóng)劑稀釋成5～8個(gè)濃度,藥液體積除以100為增效劑母液的體積。將增效劑母液加入藥液,可使增效劑在所有藥液中的濃度一致(100 mg/L)。其他操作與上述生物測(cè)定方法相同。每濃度重復(fù)3次。

1.4 酶活性測(cè)定

1.4.1細(xì)胞色素P450含量測(cè)定

參考Lee等[17]的方法收集橘小實(shí)蠅2日齡雌成蟲(chóng)5頭,置于勻漿緩沖液(0.1 mol/L pH 7.5磷酸鈉緩沖液,含1 mmol/L EDTA、0.1 mmol/L DTT、1 mmol/L PTU、1 mmol/L PMSF和10%甘油)中勻漿,操作全程冰浴。4℃,10 000 g離心15 min。過(guò)濾上清液后,4℃,10 000 g下離心1 h,將微粒體沉淀在重懸浮緩沖液(0.1 mol/L pH 7.5磷酸鈉緩沖液、1 mmol/L EDTA、0.1 mol/L DTT、1 mmol/L PMSF和20%甘油)中重懸浮作酶源。重復(fù)3次提取酶原。

參考Omura等[18]CO差示光譜法測(cè)定多功能氧化酶(MFO)和細(xì)胞色素P450含量。將微粒體懸浮液用重懸緩沖液稀釋至1 mg/mL左右,加入連二亞硫酸鈉顆粒至飽和,平衡5 min,一分為二,分別加入?yún)⒈缺蜆悠繁?。使用紫外可?jiàn)分光光度計(jì)在波長(zhǎng)400～500 nm處掃描,以參比杯為空白,掃描樣品杯的光吸收值為基線。待基線穩(wěn)定平直時(shí)在樣品杯中通CO,以參比杯為空白,掃描樣品杯的光吸收值,記錄 OD450、OD490、OD426和OD409,按下式分別計(jì)算P450和細(xì)胞色素b5含量。每次提取酶液重復(fù)測(cè)定3次。

P450含量=(OD450-OD490)/(消光系數(shù)×蛋白含量),其中消光系數(shù)為91 mmol·L-1·cm-1;

細(xì)胞色素b5含量=(OD426-OD409)/(消光系數(shù)×蛋白含量),其中消光系數(shù)為185 mmol·L-1·cm-1。

1.4.2細(xì)胞色素P450O-脫甲基酶活性測(cè)定

參考Hansen等[19]測(cè)定多功能氧化酶(MFO)O-脫甲基酶活性。反應(yīng)總體系2 mL:1 270 μL 0.1 mol/L pH 7.8的磷酸緩沖液,200 μL 0.36 mmol/L NADPH,30 μL 3 mmol/L對(duì)-硝基苯甲醚,500 μL酶液。反應(yīng)體系在25℃振蕩溫育反應(yīng)30 min,加入0.5 mL 1 mol/L HCl終止反應(yīng),再加入2.5 mL三氯甲烷萃取反應(yīng)產(chǎn)物對(duì)-硝基酚,3 000 g離心15 min。取下層即三氯甲烷層1.5 mL加入1.5 mL 0.5 mol/L NaOH反萃取。NaOH萃取液使用分光光度計(jì)在400 nm測(cè)定OD值,以0.5 mol/L NaOH溶液為對(duì)照。以對(duì)-硝基酚標(biāo)準(zhǔn)曲線和酶液中的蛋白質(zhì)含量求出每分鐘每毫克蛋白催化產(chǎn)生的對(duì)-硝基酚的摩爾數(shù)來(lái)表示酶的活性。重復(fù)3次提取酶液,每次提取酶液重復(fù)測(cè)定3次。

1.4.3羧酸酯酶活力測(cè)定

參照Van Asperen[20]的方法測(cè)定橘小實(shí)蠅CarE活力。取5頭橘小實(shí)蠅2日齡雌成蟲(chóng)在液氮中冷凍后立刻加入0.04 mol/L磷酸緩沖液(pH 7.0)2 mL,在冰浴條件下迅速充分勻漿,勻漿液于4℃、10 000 r/min離心10 min,分離上清液即為酶液,冰浴待用。以5 mL α-乙酸萘酯(3×10-4mol/L)為底物,加入0.2 mL酶液,在37℃條件下恒溫水浴振蕩30 min,加入1 mL DBLS(1%堅(jiān)固藍(lán)B鹽水溶液∶5%十二烷基硫酸鈉水溶液=2∶5)終止反應(yīng),將混合液置于室溫顯色30 min,使用分光光度計(jì)測(cè)定600 nm處OD值。對(duì)照組以0.2 mL磷酸緩沖液代替酶液。根據(jù)α-萘酚標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出每毫升酶生成的α-萘酚量。測(cè)定酶源蛋白質(zhì)含量(mg·mL-1),計(jì)算出羧酸酯酶的比活力(nmol·min-1·mg-1)。重復(fù)3次提取酶液,每次提取酶液重復(fù)測(cè)定3次。

1.4.4谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活力測(cè)定

參照Wu等[21]的方法測(cè)定GST的比活力。取5頭橘小實(shí)蠅2日齡雌成蟲(chóng)在液氮中冷凍后立刻加入0.1 mol/L磷酸緩沖液(pH 7.0)2 mL在冰浴條件下迅速充分勻漿,勻漿液于4℃、10 000 r/min離心10 min,分離上清液即為酶液,冰浴待用。以CDNB為底物,在試管中依次加入66 mmol/L磷酸緩沖液2.4 mL,50 mmol/L谷胱甘肽0.3 mL,0.03 mol/L CDNB 0.1 mL,酶液0.2 mL,立即混勻,在27℃水浴條件下反應(yīng)5 min,使用分光光度計(jì)在340 nm下測(cè)OD值。對(duì)照組以0.2 mL磷酸緩沖液代替酶液。酶源經(jīng)蛋白質(zhì)含量測(cè)定,計(jì)算出谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的比活力(nmol·min-1·mg-1)。重復(fù)3次提取酶液,每次提取酶液重復(fù)測(cè)定3次。

1.4.5蛋白總量測(cè)定

酶源蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)G-250染色后測(cè)定[22]。吸取0.3 mL酶液于10 mL試管中,空白對(duì)照以0.3 mL磷酸緩沖液代替,加入5 mL考馬斯亮藍(lán)G-250試劑,充分混勻于25℃恒溫水浴染色2 min,水浴后5 min內(nèi)在595 nm下比色測(cè)OD值。根據(jù)牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白質(zhì)含量,除以0.3即每毫升酶液中的蛋白含量(mg·mL-1)。重復(fù)3次提取酶液,每次提取酶液重復(fù)測(cè)定3次。

1.5 數(shù)據(jù)處理

橘小實(shí)蠅交互抗性與增效劑生物測(cè)定數(shù)據(jù)使用Polo Plus 1.0軟件分析,計(jì)算毒力回歸曲線斜率、致死中濃度(LC50)和95%置信區(qū)間[23]。酶活性測(cè)定數(shù)據(jù)使用SPSS 22.0軟件進(jìn)行分析,用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 交互抗性

橘小實(shí)蠅EB種群與阿維菌素存在中等水平交互抗性(RR50=20.7),與吡蟲(chóng)啉、辛硫磷和馬拉硫磷存在低水平交互抗性(5

表1 橘小實(shí)蠅抗甲維鹽種群對(duì)8種殺蟲(chóng)劑的交互抗性水平1)

2.2 3種增效劑對(duì)甲維鹽的增效作用

增效劑生物測(cè)定結(jié)果表明(表2), PBO對(duì)橘小實(shí)蠅EB種群、S種群和JH種群均有顯著增效作用,增效倍數(shù)分別為3.4、2.9倍和3.3倍; TPP對(duì)橘小實(shí)蠅EB種群、S群和JH種群均有顯著增效作用,增效倍數(shù)分別為2.5、2.0倍和2.5倍; DEM對(duì)橘小實(shí)蠅EB種群、S種群和JH種群也具有顯著增效功能,增效倍數(shù)分別為1.7、1.4倍和1.6倍。

表2 增效劑PBO,TPP和DEM對(duì)甲維鹽的增效作用1)

2.3 酶活性比較

酶活性測(cè)定結(jié)果表明(表3),橘小實(shí)蠅EB種群和JH種群的細(xì)胞色素P450(3.9倍和3.1倍)和b5含量(3.3倍和1.3倍)、O-脫甲基酶活性(4.2倍和1.5倍)均較敏感種群S交顯著提高。

表3 橘小實(shí)蠅不同種群MFO O-脫甲基酶活性、細(xì)胞色素P450和b5含量1)

橘小實(shí)蠅EB種群和JH種群的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性(2.7倍和1.4倍)和羧酸酯酶活性(3.2倍和1.9倍)均顯著高于敏感種群(表4)。

表4 橘小實(shí)蠅不同種群谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶和羧酸酯酶活性1)

3 討論

研究發(fā)現(xiàn),棉鈴蟲(chóng)Helicoverpaarmigera、西花薊馬Frankliniellaoccidentalis、黏蟲(chóng)Mythimnaseparata等農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)經(jīng)人工選育對(duì)甲維鹽產(chǎn)生中高水平抗性之后,常對(duì)多種殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生不同水平的交互抗性[24-26]。人工室內(nèi)選育出的西花薊馬抗甲維鹽種群可對(duì)阿維菌素產(chǎn)生高水平交互抗性(31.7倍),對(duì)甲維鹽具有高抗性水平的黏蟲(chóng)種群也會(huì)對(duì)阿維菌素形成中等交互抗性(21.8倍)[25]。本研究發(fā)現(xiàn),橘小實(shí)蠅EB種群與阿維菌素存在中等水平交互抗性。綜合黏蟲(chóng)、西花薊馬和棉鈴蟲(chóng)交互抗性研究結(jié)果推測(cè),同種害蟲(chóng)易對(duì)作用機(jī)制相同的殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生交互抗性。對(duì)甲維鹽具有高抗性水平的西花薊馬種群可對(duì)啶蟲(chóng)脒形成中等交互抗性,對(duì)吡蟲(chóng)啉、蟲(chóng)螨腈、氯氟氰菊酯、毒死蜱和滅多威有低水平交互抗性;黏蟲(chóng)高抗甲維鹽種群可對(duì)毒死蜱和滅多威形成中等交互抗性,與辛硫磷和氟氯氰菊酯之間交互抗性水平較低;西花薊馬和黏蟲(chóng)抗性種群的多功能氧化酶、羧酸酯酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶等生化解毒酶活性均顯著增強(qiáng)[25-26]。在本研究中,橘小實(shí)蠅EB種群對(duì)吡蟲(chóng)啉、馬拉硫磷、辛硫磷、高效氯氟氰菊酯、噻蟲(chóng)胺表現(xiàn)出低水平交互抗性,推測(cè)橘小實(shí)蠅EB種群代謝解毒酶活性升高可能是形成上述低水平交互抗性的重要生化機(jī)制。橘小實(shí)蠅EB種群對(duì)噻蟲(chóng)胺、高效氯氟氰菊酯、多殺霉素和蟲(chóng)螨腈未表現(xiàn)出交互抗性,因此推薦甲維鹽與噻蟲(chóng)胺、高效氯氟氰菊酯、多殺霉素和蟲(chóng)螨腈在田間輪換使用,對(duì)于甲維鹽與吡蟲(chóng)啉、辛硫磷和馬拉硫磷輪用應(yīng)持謹(jǐn)慎態(tài)度,禁止甲維鹽與阿維菌素輪用。

多項(xiàng)研究表明,多種農(nóng)林害蟲(chóng)對(duì)甲維鹽的抗性與多功能氧化酶活性增強(qiáng)相關(guān)[27-29]。王圣印等[25]的研究發(fā)現(xiàn),多功能氧化酶抑制劑增效醚(PBO)可顯著降低甲維鹽對(duì)西花薊馬的致死中濃度,對(duì)甲維鹽具有高抗性水平的西花薊馬種群多功能氧化酶活性顯著高于敏感種群。宋月芹等[26]的研究表明,PBO可顯著提高甲維鹽對(duì)黏蟲(chóng)的毒力,黏蟲(chóng)對(duì)甲維鹽產(chǎn)生高水平抗性時(shí),其多功能氧化酶活性亦同步顯著上升。侍甜等[30]的研究表明,多功能氧化酶抑制劑增效醚(PBO)可顯著提高甲維鹽對(duì)甜菜夜蛾田間種群的毒力,酶活性測(cè)定結(jié)果也表明其多功能氧化酶活性比敏感種群高出1.7～7.4倍。在本研究中,PBO可顯著提高甲維鹽對(duì)橘小實(shí)蠅的室內(nèi)毒力,橘小實(shí)蠅EB種群的O-脫甲基酶活性顯著升高,細(xì)胞色素P450和b5含量也顯著增高。由上述研究結(jié)果推測(cè),多功能氧化酶活性提高可能是橘小實(shí)蠅經(jīng)室內(nèi)篩選對(duì)甲維鹽產(chǎn)生高水平抗性的主要生化機(jī)制。

羧酸酯酶抑制劑磷酸三苯酯(TPP)常用于間接探索昆蟲(chóng)羧酸酯酶活性與抗藥性的關(guān)系[31-33]。王圣印等[25]的研究發(fā)現(xiàn),TPP可顯著降低甲維鹽對(duì)西花薊馬高抗甲維鹽種群和敏感種群的致死中濃度,西花薊馬對(duì)甲維鹽產(chǎn)生高水平抗性后,其羧酸酯酶活性也顯著增高。對(duì)黏蟲(chóng)高抗甲維鹽種群和敏感種群進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定時(shí),TPP可顯著降低甲維鹽對(duì)上述兩個(gè)種群的致死中濃度,抗甲維鹽種群的羧酸酯酶活性也顯著升高到1.64倍[26]。侍甜等[30]的研究表明,在使用甲維鹽對(duì)甜菜夜蛾進(jìn)行室內(nèi)生物測(cè)定時(shí),酯酶抑制劑DEF對(duì)甲維鹽的增效倍數(shù)最高可達(dá)7.7倍,其羧酸酯酶活性可上升至敏感種群的4.7倍。本研究中,橘小實(shí)蠅EB種群的羧酸酯酶活性顯著增強(qiáng),而TPP可顯著降低甲維鹽對(duì)橘小實(shí)蠅EB、JH和S種群的致死中濃度。綜上所述,羧酸酯酶活性增強(qiáng)可能是橘小實(shí)蠅對(duì)甲維鹽抗性提高的重要因素。

在增效劑生物測(cè)定試驗(yàn)中,順丁烯二酸二乙酯(DEM)常用于間接探索昆蟲(chóng)谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶與其抗藥性的關(guān)系[34-36]。谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性抑制劑DEM可顯著降低甲維鹽對(duì)西花薊馬的致死中濃度,西花薊馬對(duì)甲維鹽的抗性水平上升時(shí),谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性也隨之顯著提升[25]。DEM可顯著提升甲維鹽對(duì)黏蟲(chóng)的室內(nèi)毒性,當(dāng)黏蟲(chóng)對(duì)甲維鹽產(chǎn)生高水平抗性時(shí),抗性種群的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性顯著上升[26]。本研究中,室內(nèi)汰選得到的橘小實(shí)蠅EB種群谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性顯著提高,而DEM可顯著提高甲維鹽對(duì)EB、JH和S等3個(gè)橘小實(shí)蠅種群的室內(nèi)生物測(cè)定毒力,因此,谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性增強(qiáng)可能是橘小實(shí)蠅對(duì)甲維鹽抗性水平上升的重要因素之一。

目前對(duì)橘小實(shí)蠅多進(jìn)行綜合防控,檢驗(yàn)檢疫是防治橘小實(shí)蠅的首要措施,預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)有助于做好防治準(zhǔn)備措施并決定防治時(shí)機(jī),農(nóng)業(yè)防治清潔田園可有效減少蟲(chóng)源,物理防治懸掛黃板或誘集液有助于防治橘小實(shí)蠅成蟲(chóng)[37]。在橘小實(shí)蠅成蟲(chóng)暴發(fā)期,化學(xué)防治也是必須采取的措施之一[37-38]。結(jié)合本研究結(jié)果,建議合理輪換使用甲維鹽、噻蟲(chóng)胺、高效氯氟氰菊酯、蟲(chóng)螨腈和多殺霉素,可有效延長(zhǎng)甲維鹽、噻蟲(chóng)胺、高效氯氟氰菊酯、蟲(chóng)螨腈和多殺霉素的使用壽命。以甲維鹽單劑為基礎(chǔ),通過(guò)添加增效劑創(chuàng)新殺蟲(chóng)劑配方與劑型,有助于實(shí)現(xiàn)對(duì)橘小實(shí)蠅抗性治理,提高甲維鹽對(duì)橘小實(shí)蠅的田間防效。