李曼，呂麗麗，萇雨環(huán)，侯巖巖，王夢格，葉國柳

蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，安徽蚌埠 233000

子宮頸病變是指在子宮頸部位發(fā)生的各種良惡性病變，主要包括子宮頸癌和子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）［1］。子宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生發(fā)展是一個慢性持續(xù)過程，由HPV 感染形成CIN，進一步發(fā)展為浸潤癌［2］。CIN 與子宮頸癌密切相關(guān)，低級別上皮內(nèi)瘤變（LSIL）大部分可消退，高級別上皮內(nèi)瘤變（HSIL）被公認為是癌前病變。因此，對子宮頸病變的篩查和阻斷至關(guān)重要［3］。含TCP1的伴侶蛋白亞基3（CCT3）屬于伴侶蛋白家族成員，主要參與蛋白質(zhì)的折疊和空間結(jié)構(gòu)的形成［4］。研究顯示，CCT3 在許多腫瘤組織中表達升高，如肺腺癌［5］、頭頸部鱗癌［6］、肝癌［7］、乳腺癌［8］等，與腫瘤發(fā)生發(fā)展及不良預后相關(guān)。本研究擬通過分析CCT3 在子宮頸病變中的表達，并探討其對CIN 和子宮頸癌的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院病理科2017—2020 年存檔的子宮頸蠟塊組織，包括正常子宮頸組織50 例、CIN 組織90 例（其中LSIL 40例，HSIL 50 例）、子宮頸癌組織90 例。入組標準：CIN 或子宮頸癌經(jīng)病理檢查確診；術(shù)前HPV 分型或定量篩查。排除標準：合并其他腫瘤或重大疾?。恍g(shù)前已行放化療或藥物治療；臨床資料或隨訪缺失。本研究經(jīng)蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院倫理委員會審批（批號2021KY039），并獲得患者知情同意。

1.2 CCT3檢測方法 將正常子宮頸、CIN和子宮頸癌組織用石蠟包埋，切4～5 μm厚切片，經(jīng)過烘干、脫蠟和水化，在檸檬酸鈉緩沖液中抗原修復15 min；過氧化氫孵育10 min后洗滌3次；加入封閉液繼續(xù)孵育5 min阻斷非特異性結(jié)合。加入CCT3抗體（1∶200），4 ℃孵育過夜，洗滌3次后與二抗孵育結(jié)合。再次洗滌，DAB顯色，蘇木素復染，常規(guī)脫水，透明，封片，閱片。顯微鏡下隨機選取5個視野，按照染色強度和細胞陽性率進行評分。染色強度評分：淡黃色為1分，黃色為2分，棕色為3分；細胞陽性率評分：1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分。將兩項得分相乘，＜4分為CCT3陰性，≥4分為CCT3陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用R3.6.3 軟件和SPSS22.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，Graphpad Prism 8 軟件繪圖。計量資料多組間比較采用方差分析；計數(shù)資料以頻數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。ROC 曲線分析CCT3在不同子宮頸病變中的診斷價值，通過聯(lián)合診斷實驗進行檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 CCT3在不同子宮頸病變組織中的表達比較 免疫組化結(jié)果顯示，CCT3 主要定位于胞質(zhì)，呈棕褐色，在正常子宮頸、CIN 和子宮頸癌組織中的染色程度依次增強。CCT3 在正常子宮頸、CIN、子宮頸癌組織中的陽性表達率分別為34.00%、58.89%、80.00%，CIN 和子宮頸癌組織高于正常子宮頸組織，子宮頸癌組織高于CIN組織（P均＜0.01）。

2.2 CCT3 與子宮頸病變臨床特征的相關(guān)性 在CIN 患者中，CCT3 表達與HPV 高 危 型感染（P＜0.001）和分級（P=0.017）有關(guān)，見表1；在子宮頸癌患者中，CCT3表達與HPV高危型感染（P=0.013）、分級（P=0.026）和淋巴結(jié)陽性（P=0.025）有關(guān)，見表2。

表1 CIN組織中CCT3表達與患者臨床病理特征的關(guān)系

表2 子宮頸癌組織中CCT3表達與患者臨床病理特征的 關(guān)系

2.3 CCT3 對子宮頸病變的診斷效能 CCT3 對CIN 診斷預測的ROC 曲線下面積（AUC）為0.702，P＜0.001，靈敏度為58.89%，特異度為66.00%；CCT3對子宮頸癌診斷預測的AUC 為0.802，P＜0.001，靈敏度為66.00%，特異度為80.00%。

2.4 CCT3 聯(lián)合HPV 高危型感染對子宮頸癌的預測價值 將90 例CIN 和90 例子宮頸癌資料合并，CCT3 聯(lián)合HPV 高危型感染對子宮頸癌的預測價值見表3、4。CCT3 聯(lián)合HPV 高危型感染檢測能顯著提高對子宮頸癌預測的敏感度（92.22%）和特異度（58.89%）。

表3 子宮頸病變中CCT3表達和HPV高危型感染的情況（例）

表4 CCT3聯(lián)合HPV高危型感染對子宮頸癌的預測價值（%）

3 討論

子宮頸病變的進展是一個循序漸進的過程，CIN 是子宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵階段，HPV 持續(xù)感染是關(guān)鍵因素［9］。目前對子宮頸病變的篩查通常采用“三階梯”：即HPV 和子宮頸液基細胞學檢測、陰道鏡檢查和子宮頸活檢。HPV 篩查大大提高了CIN和子宮頸癌的檢出率，但是它無法區(qū)分一過性感染和慢性感染，持續(xù)性感染更可能最終發(fā)展為子宮頸癌；陰道鏡檢查的結(jié)果通常以子宮頸活檢為準，作為三階梯中最關(guān)鍵的一步，子宮頸活檢取決于病理科醫(yī)生的主觀判斷，不同醫(yī)生可能會給出不同的組織學結(jié)論［10］。所以，仍需找到其他方式適當介入來提高對子宮頸病變篩查的準確率，生物標志物就是一種趨勢。

CCT3作為一種伴侶蛋白，以肌動蛋白和微管蛋白為底物，以ATP 依賴的方式促進真核細胞中約10%的蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)正確折疊和功能穩(wěn)定發(fā)揮［11-12］。當CCT3 的ATP 結(jié)合位點發(fā)生突變時，可導致胞質(zhì)內(nèi)未翻譯的mRNA 積聚和降解，使蛋白質(zhì)水平和定位發(fā)生變化［13］。當CCT3 數(shù)量或質(zhì)量發(fā)生變化時，對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的調(diào)節(jié)保護作用將會消失，并可促進體細胞的快速進化，甚至形成惡性轉(zhuǎn)化，導致腫瘤發(fā)生［14］。CCT3參與腫瘤發(fā)病的研究近幾年被廣為報道，HOU 等［15］發(fā)現(xiàn)在CCT3 肝細胞癌中表達上調(diào)，可以通過影響細胞周期和DNA 復制參與肝細胞癌的發(fā)生發(fā)展，LIU 等［16］認為CCT3 可以作為肝癌的潛在生物標志物，在診斷能力上甚至優(yōu)于甲胎蛋白。CCT3 還可以作為miR233 的靶點，影響乳腺癌的臨床分期和不良預后。關(guān)于CCT3 在子宮頸癌中的研究也有報道，DOU 等［17］發(fā)現(xiàn)CCT3 與子宮頸腺癌的進展有關(guān)，抑制CCT3 可以通過抑制纖維連接蛋白1（FN1）從而促進子宮頸腺癌細胞的凋亡和周期阻滯，CCT3可以作為子宮頸癌一種新的有前景的生物標志物。

本研究發(fā)現(xiàn)CCT3 的表達隨著子宮頸病變的嚴重程度而呈逐漸上調(diào)，CCT3 在CIN 中表達較正常子宮頸組織升高，在子宮頸癌中表達量繼續(xù)升高。更進一步研究發(fā)現(xiàn)，CCT3的表達與子宮頸病變患者的HPV 高危型感染有關(guān)。這或許是CCT3 參與了HPV與癌基因和抑癌基因相互作用的過程，當然，這需要更多的研究去挖掘其中的機制。值得一提的是，我們分析CCT3 在HSIL 中表達較LSIL 中增高顯著，在LSIL 和正常子宮頸中表達無明顯差異，這和我們臨床的干預治療是一致的。此外，CCT3的表達可以將CIN 和子宮頸癌與正常子宮頸區(qū)分開來，這表明了CCT3對子宮頸病變具有較好的診斷價值。將CCT3的表達與HPV 高危型感染聯(lián)合，能顯著提高對子宮頸病變患者進展為子宮頸癌的預測能力。

綜上所述，CCT3 在CIN 和子宮頸癌中表達上調(diào)，具有較好的診斷潛力，有可能為子宮頸癌的早期篩查提供一些參考。