免疫增強(qiáng)劑對(duì)鯉血清中免疫酶指標(biāo)的影響

張振國，羅 璋，郝 爽，徐赟霞，尤宏?duì)?，趙良煒，王 禹，馮守明

( 1.天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 300400；2.天津市水產(chǎn)研究所，天津 300221)

鯉(Cyprinuscarpio)是天津市淡水養(yǎng)殖主要養(yǎng)殖品種，隨著其養(yǎng)殖規(guī)模增加，養(yǎng)殖密度也不斷提高，同時(shí)也帶來了病害的頻發(fā)。近年來天津市養(yǎng)殖鯉病毒病較為嚴(yán)重，給養(yǎng)殖戶帶來較大的經(jīng)濟(jì)損失。目前困擾天津市鯉養(yǎng)殖的主要是鯉浮腫病毒(Carp edema virus)，檢出率非常高，該病毒2016年在國內(nèi)首次被發(fā)現(xiàn)，且死亡率較高[1]，還有困擾鯉養(yǎng)殖的錦鯉皰疹病毒(Koi herpesvirus)一直沒有較好的治療方法。 由于魚類病毒病還沒有特效藥物來治療，因此主要是靠預(yù)防為主，即降低養(yǎng)殖密度，調(diào)節(jié)水質(zhì)，增強(qiáng)魚體抵抗力等。本試驗(yàn)中對(duì)鯉投喂一種復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，主要成分為多糖類、中草藥以及維生素類，可有效提高魚體血清中免疫酶的含量，對(duì)預(yù)防魚類病毒病起到重要作用。

1 材料與方法

1.1 免疫增強(qiáng)劑飼料的制備

復(fù)合免疫增強(qiáng)劑為天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心自制，主要成分是多糖類、中草藥以及維生素類免疫增強(qiáng)劑。將普通飼料粉碎，添加1%的復(fù)合免疫增強(qiáng)劑混勻，通過小型餌料機(jī)制備出大小合適的飼料。

1.2 試驗(yàn)用魚與飼養(yǎng)條件

試驗(yàn)用鯉購自天津金鎖養(yǎng)殖專業(yè)合作社，大小為(50.6±5.3)g，養(yǎng)殖試驗(yàn)在循環(huán)水系統(tǒng)中進(jìn)行，水溫控制在(25±1)℃。每天9:00和16:00各投喂兩次飼料，馴化1周攝食正常后開展試驗(yàn)。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)分兩組：普通飼料組和復(fù)合免疫增強(qiáng)劑飼料組，每組30尾魚，試驗(yàn)開始后第7天、第14天、第21天和第28天采血，每組采3尾魚，血樣靜置4 ℃過夜，3 000 r/min離心后取上清，測定血清中免疫酶的含量。

1.4 免疫指標(biāo)的測定

測定血清中溶菌酶(LZM)、超氧化物氣化酶(SOD)和補(bǔ)體C3含量，試劑盒購自上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司，采用雙抗夾心法測定，450 nm波長下測定OD值，每個(gè)指標(biāo)均做標(biāo)準(zhǔn)曲線。依據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，首先將血清稀釋10倍，再進(jìn)行測定。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)溶菌酶含量的影響

鯉血清中溶菌酶含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，R2等于0.995，數(shù)據(jù)結(jié)果有效。

圖1 溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)曲線

總體來看，免疫增強(qiáng)劑可顯著提高鯉血清中LZM活性，隨著時(shí)間呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，1周后，免疫組與對(duì)照組LZM活性無顯著性差異； 2周后，免疫組LZM活性達(dá)到(27.93±3.63)U/mL ，顯著高于正常飼料組LZM活性(14.21±0.87)U/mL(P<0.05)； 3周后LZM活性下降為(21.79±3.03)U/mL，與2周時(shí)有顯著性差異(P<0.05)；4周后LZM活性顯著下降，與基礎(chǔ)飼料組相當(dāng)。見圖2。

注：不同字母表示組間差異顯著(P<0.05)，下同。圖2 復(fù)合免疫增強(qiáng)劑對(duì)鯉血清中溶菌酶含量的影響

2.2 對(duì)超氧化物歧化酶含量的影響

鯉血清中超氧化物歧化酶含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3，R2等于0.999，數(shù)據(jù)結(jié)果有效。

圖3 超氧化物歧化酶標(biāo)準(zhǔn)曲線

總體來看，免疫增強(qiáng)劑可顯著提高鯉血清SOD活性，隨著時(shí)間呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，1周后，免疫組與對(duì)照組SOD活性無顯著性差異；2周后，免疫組SOD活性達(dá)到456.43±59.96 U/mL，顯著高于正常飼料組SOD活性346.43±46.91 U/mL(P<0.05)；3周后SOD活性下降為416.43±45.96 U/mL，但與2周時(shí)差異不顯著(P>0.05)；4周后SOD活性顯著下降，與基礎(chǔ)飼料組相當(dāng)(見圖4)。

圖4 復(fù)合免疫增強(qiáng)劑對(duì)鯉血清中超氧化物歧化酶含量的影響

2.3 對(duì)補(bǔ)體C3含量的影響

鯉血清中補(bǔ)體C3含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖5，R2等于0.998，數(shù)據(jù)結(jié)果有效。

圖5 補(bǔ)體C3標(biāo)準(zhǔn)曲線

總體來看，免疫增強(qiáng)劑可顯著提高鯉血清補(bǔ)體C3含量，隨著時(shí)間呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢， 1周后，免疫組與對(duì)照組血清補(bǔ)體C3含量無顯著性差異；2周后，免疫組血清補(bǔ)體C3含量達(dá)到523.57±26.10 μg/mL ，顯著高于正常飼料組補(bǔ)體C3含量391.07±29.36 μg /mL(P<0.05)； 3周后補(bǔ)體C3含量下降為491.43±60.89 μg/mL，但與2周時(shí)差異不顯著(P>0.05)；4周后補(bǔ)體C3含量顯著下降，與基礎(chǔ)飼料組相當(dāng)。見圖6。

圖6 復(fù)合免疫增強(qiáng)劑對(duì)鯉血清中補(bǔ)體C3含量的影響

3 討論與結(jié)論

研究表明：投喂復(fù)合免疫制劑后德國鏡鯉的白細(xì)胞吞噬率和紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率顯著高于對(duì)照組，人工感染死亡率低于對(duì)照組[2]。復(fù)合中草藥制劑投喂黃顙魚30 d后，黃顙魚血液中白細(xì)胞的吞噬活性、血清中溶菌酶和補(bǔ)體活性均顯著高于對(duì)照組[3]。投喂免疫增強(qiáng)劑后大菱鲆和血鸚鵡的溶菌酶活性、堿性磷酸酶活性和總超氧化物歧化酶活性皆顯著高于對(duì)照組[4]。復(fù)方中草藥制劑投喂牙鲆30 d后，血清中堿性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SOD)以及溶菌酶(LZM)活性水平均顯著高于對(duì)照組，并提高牙鲆抗遲鈍愛德華氏菌感染能力[5]。復(fù)合免疫增強(qiáng)劑投喂金鱒14 d后，溶菌酶(LZM)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性及補(bǔ)體C3的含量顯著高于對(duì)照組，并提高金鱒對(duì)細(xì)菌病的抵抗力[6]。免疫增強(qiáng)劑不僅可以提高魚類的非特異性免疫功能，還對(duì)對(duì)蝦、蟹、鱉、刺參等水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物具有較好的疾病預(yù)防功能[7-10]。投喂鯉本復(fù)方免疫增強(qiáng)劑14 d后，其血清中溶菌酶、超氧化物歧化酶以及補(bǔ)體C3的含量顯著提高，進(jìn)而提高魚體非特異性免疫力，對(duì)預(yù)防鯉疾病起到了重要的作用，但在養(yǎng)殖過程中需要間隔投喂。