王 敏，宋雨萌，劉文杰，于雯雯，羅 蘭

（青島農(nóng)業(yè)大學(xué)植物醫(yī)學(xué)學(xué)院，山東省植物病蟲(chóng)害綠色防控工程研究中心，青島 266109）

大白菜（Brassica rapa ssp.pekinensis）起源于中國(guó)，是我國(guó)分布最廣，種植面積最大的蔬菜。其營(yíng)養(yǎng)豐富，含有蛋白質(zhì)、多種維生素和鈣、磷等多種礦物質(zhì)及大量的膳食纖維，同時(shí)具有藥用及保健作用[1]。近年來(lái)隨著種植面積擴(kuò)大和耕作制度的改變，大白菜的病蟲(chóng)害愈來(lái)愈嚴(yán)重，主要有白菜根腫病、白菜霜霉病、白菜軟腐病和白菜黑斑病[2-3]，其中白菜黑斑病是一種重要的世界性真菌病害，危害葉片和整株植物，在我國(guó)各地均有發(fā)生，已成為我國(guó)蔬菜生產(chǎn)上的主要病害之一，在流行年份可造成20%～50%的減產(chǎn)，嚴(yán)重危害大白菜的產(chǎn)量與品質(zhì)[4-5]。防治白菜黑斑病除選用優(yōu)良品種和加強(qiáng)農(nóng)業(yè)措施外，化學(xué)防治是主要防治措施，但生產(chǎn)上使用的藥劑多為早期開(kāi)發(fā)的保護(hù)性殺菌劑和苯并咪唑類(lèi)等常規(guī)殺菌劑[6-7]。保護(hù)性殺菌劑用藥量大，藥效易受環(huán)境影響，其無(wú)法在植物體內(nèi)傳導(dǎo)，在作物發(fā)病后治療效果不佳[8]。同時(shí)化學(xué)農(nóng)藥的大量廣泛使用，使黑斑病對(duì)多種藥劑產(chǎn)生了不同程度的抗性，防治效果明顯降低[9]。因此篩選高效、低毒的新型殺菌劑來(lái)防治白菜黑斑病尤為重要。

氟環(huán)唑（Epoxiconazole）是新一代含氟的麥角甾醇生物合成抑制劑類(lèi)殺菌劑，通過(guò)抑制真菌細(xì)胞膜甾醇生物合成而阻止真菌的生長(zhǎng)，其具有保護(hù)和治療作用，還能誘導(dǎo)作物產(chǎn)生抗病性，廣泛用于谷物和果樹(shù)等的各種真菌病害防治[10]。吡唑醚菌酯（Pyraclostrobin）是一種廣譜、高效的甲氧基丙烯酸酯類(lèi)內(nèi)吸性殺菌劑，作用于真菌線(xiàn)粒體呼吸鏈中的細(xì)胞色素復(fù)合物，阻止電子傳遞，從而抑制真菌孢子萌發(fā)或菌絲生長(zhǎng)[11]。其還具有良好的輸導(dǎo)和擴(kuò)散性，對(duì)蔬菜、果樹(shù)的真菌病害都有較好的防治效果。戊唑醇（Tebuconazole）為三唑類(lèi)殺菌劑，主要防治蔬菜、小麥、花生等的多種真菌病害，在全球50多個(gè)國(guó)家的60多種作物上取得登記并得到廣泛應(yīng)用[12]。

為了篩選防治白菜黑斑病的有效藥劑以及延緩病原菌對(duì)三唑類(lèi)殺菌劑的抗藥性的產(chǎn)生，本研究采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定了苯并咪唑類(lèi)、麥角甾醇生物合成抑制劑類(lèi)以及甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑共7種單劑對(duì)白菜黑斑病菌的室內(nèi)毒力，然后選用氟環(huán)唑與吡唑醚菌酯及戊唑醇進(jìn)行復(fù)配，篩選增效配方，為白菜黑斑病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

95%甲基硫菌靈原藥，江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司；96%三唑酮原藥、95%丙環(huán)唑原藥、98%吡唑醚菌酯原藥，山東濰坊潤(rùn)豐化工股份有限公司；98%戊唑醇原藥，江蘇龍燈化學(xué)有限公司；95%氟環(huán)唑原藥，浙江禾本科技股份有限公司；96%烯唑醇原藥，江蘇常隆農(nóng)化有限公司。二甲基亞砜DMSO，天津市富宇精細(xì)化工有限公司。

1.2 供試菌種

白菜黑斑病菌（Alternaria brassicae）由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)植物醫(yī)學(xué)院農(nóng)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離鑒定并保存。

1.3 試驗(yàn)方法

采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定7種藥劑以及復(fù)配劑對(duì)白菜黑斑病菌的毒力[13-14]。將原藥用DMSO配成母液，再稀釋成系列質(zhì)量濃度用于試驗(yàn)（表1）。通過(guò)預(yù)備試驗(yàn)確定試驗(yàn)濃度范圍，在濃度范圍之內(nèi)設(shè)置5～7個(gè)濃度梯度，要求抑制率在10%～90%之間。將稀釋好的藥液與PDA培養(yǎng)基搖勻制成含藥平板，將5 mm的白菜黑斑病菌菌餅接于含藥平板中央，每質(zhì)量濃度重復(fù)3次，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照。放入28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待對(duì)照皿中菌落長(zhǎng)至培養(yǎng)皿直徑2/3時(shí)，測(cè)量不同處理白菜黑斑病菌菌落的直徑，并計(jì)算抑菌率。

表1 7種殺菌劑對(duì)白菜黑斑病菌毒力測(cè)定的濃度梯度

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2010軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析。求各藥劑毒力回歸式及EC50值等，用孫云沛公式[15-16]求各復(fù)配混劑共毒系數(shù)（CTC）。抑菌率及共毒系數(shù)按式（1）（2）計(jì)算。

式中：CTC為共毒系數(shù)，當(dāng)CTC＞120時(shí)，為增效作用，CTC為80～120時(shí)，為相加作用，CTC＜80時(shí)，為拮抗作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 7種藥劑對(duì)白菜黑斑病菌的室內(nèi)毒力

7種藥劑對(duì)白菜黑斑病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。在這7種藥劑中，95%氟環(huán)唑原藥對(duì)白菜黑斑病菌毒力最高，EC50值為0.37 mg/L，毒力倍數(shù)約為95%甲基硫菌靈原藥的3 436.32倍；其次為98%吡唑醚菌酯原藥和98%戊唑醇原藥，EC50值均為0.60 mg/L。95%丙環(huán)唑原藥、96%烯唑醇原藥和96%三唑酮原藥的EC50值分別為2.66、3.38 mg/L和19.50 mg/L；95%甲基硫菌靈原藥的效果最差，EC50值為1 271.44 mg/L， 說(shuō)明白菜黑斑病菌對(duì)甲基硫菌靈已產(chǎn)生抗藥性。

表2 7種殺菌劑對(duì)白菜黑斑病菌的毒力結(jié)果

2.2 氟環(huán)唑和戊唑醇復(fù)配對(duì)白菜黑斑病菌的聯(lián)合毒力

95%氟環(huán)唑原藥與98%戊唑醇原藥EC50值分別為0.37 mg/L和0.60 mg/L，其兩者按有效成分比4∶1、1∶1及1∶4復(fù)配時(shí)，對(duì)白菜黑斑病菌EC50值分別為0.29、0.34 mg/L和0.35 mg/L，復(fù)配劑的毒力大于單劑，3種復(fù)配劑的共毒系數(shù)分別為139.29、135.35和151.59，氟環(huán)唑與戊唑醇3個(gè)復(fù)配劑的共毒系數(shù)均大于120，表現(xiàn)為增效作用，其中兩者按有效成分1∶4時(shí)復(fù)配時(shí)的增效作用最大（表3）。

表3 氟環(huán)唑與戊唑醇混配對(duì)白菜黑斑病菌聯(lián)合毒力

2.3 氟環(huán)唑和吡唑醚菌酯復(fù)配對(duì)白菜黑斑病菌的聯(lián)合毒力

95%氟環(huán)唑原藥與98%吡唑醚菌酯原藥按照4∶1、1∶1及1∶4復(fù)配對(duì)白菜黑斑病菌EC50值分別為0.40、0.46 mg/L和0.53 mg/L，共毒系數(shù)分別為117.54、108.02和118.37，均表現(xiàn)出了一定的相加作用（表4）。

表4 氟環(huán)唑與吡唑醚菌酯混配對(duì)白菜黑斑病菌聯(lián)合毒力

3 結(jié)論與討論

白菜黑斑病不僅影響大白菜產(chǎn)量，還導(dǎo)致品質(zhì)下降，影響收益和食品安全。使用高效安全殺菌劑是防治病害的主要措施。本研究從7種不同機(jī)理殺菌劑中篩選出3種高效殺菌劑，分別為95%氟環(huán)唑原藥、98%吡唑醚菌酯原藥和98%戊唑醇原藥，對(duì)白菜黑斑病菌的EC50均小于1 mg/L，分別為0.37、0.60 mg/L和0.60 mg/L，可作為白菜黑斑病防治的有效藥劑。

氟環(huán)唑是一種內(nèi)吸性三唑類(lèi)殺菌劑，可與井岡霉素、嘧菌酯和三環(huán)唑復(fù)配用于水稻紋枯病和稻瘟病的防治[17-19]，與吡唑醚菌酯復(fù)配用于小麥赤霉病和銹病的防治[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，將氟環(huán)唑和戊唑醇以不同比例混合，表現(xiàn)出對(duì)白菜黑斑病菌不同程度的增效作用，以氟環(huán)唑和戊唑醇1∶4按有效成分混配時(shí)增效最為顯著，這為氟環(huán)唑和戊唑醇復(fù)配的開(kāi)發(fā)及應(yīng)用提供理論依據(jù)。

為了延緩抗藥性的產(chǎn)生，藥劑的交替使用和復(fù)配增效研究具有重要的實(shí)踐意義。戊唑醇不僅與苯醚甲環(huán)唑復(fù)配對(duì)白菜黑斑病菌具有增效作用[21]，與氟環(huán)唑復(fù)配同樣增效顯著。另外，甲基硫菌靈抗性水平也不容忽視，有研究發(fā)現(xiàn)蔓枯病菌（Stagonosporppsis citrulli）和蘋(píng)果腐爛病菌（Valsa mali）對(duì)甲基硫菌靈產(chǎn)生了不同程度的抗性[22-23]，本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)白菜黑斑病菌對(duì)甲基硫菌靈已產(chǎn)生了抗藥性，其抗性水平有待進(jìn)一步測(cè)定。