周妍妍 姜璐璐 井宏穎，

(1黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2哈爾濱體育學(xué)院運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)學(xué)院)

衰老是生物體隨著時(shí)間推移而自然發(fā)生的過程，是復(fù)雜的生理現(xiàn)象。隨著我國人口老齡化進(jìn)程加快，有關(guān)衰老的機(jī)制已成為醫(yī)學(xué)界的研究熱，針對(duì)抗衰老藥物的探索研究也越來越多。中醫(yī)中藥在抗衰老的研究中占比很大，其中補(bǔ)腎方劑抗衰老的研究甚多，陰陽雙補(bǔ)代表方劑地黃飲子的抗衰老研究尤為突出。已經(jīng)證實(shí)地黃飲子能夠在一定程度上修復(fù)線粒體損傷、清除自由基、抑制細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)免疫功能、調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌功能、對(duì)P52/P21和Notch信號(hào)通路和對(duì)能量代謝和骨代謝有一定作用。本文總結(jié)了地黃飲子有關(guān)抗衰老的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展，以期為今后中藥抗衰老方劑的研究提供參考。

1 衰老概述

衰老是指機(jī)體隨著年齡的增長，生理功能與形態(tài)結(jié)構(gòu)出現(xiàn)退行性改變，機(jī)體各種功能逐漸衰退，機(jī)體抵御外界傷害和恢復(fù)體內(nèi)平衡的能力下降等。衰老分為生理性衰老和病理性衰老，生理性衰老是指機(jī)體隨著時(shí)間的推移而產(chǎn)生的全身性退行性改變，是生命過程的一種必然結(jié)局，生理性衰老的發(fā)生發(fā)展是不可避免的，但是其進(jìn)程可以通過醫(yī)藥的干預(yù)，達(dá)到延緩衰老的目的。病理性衰老是指由于疾病引發(fā)機(jī)體出現(xiàn)相應(yīng)的衰老征象，如果疾病治愈，相應(yīng)的衰老征象也可以停止或延緩進(jìn)程。

衰老的發(fā)生機(jī)制非常復(fù)雜，關(guān)于衰老的學(xué)說眾多，具有代表性的學(xué)說有線粒體DNA損傷學(xué)說、自由基學(xué)說、信號(hào)通路學(xué)說、端粒學(xué)說。此外，還有染色體突變學(xué)說、基因調(diào)控學(xué)說、免疫學(xué)說、差錯(cuò)學(xué)說、交聯(lián)學(xué)說等〔1，2〕。

2 中醫(yī)對(duì)腎虛致衰老的認(rèn)識(shí)

早在秦漢時(shí)期的《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就建立發(fā)展了人體的衰老學(xué)說，書中對(duì)衰老有了較全面的認(rèn)識(shí)，認(rèn)為陰陽虛衰、臟腑虧虛、精氣神耗損等與衰老的發(fā)生發(fā)展有關(guān)〔3〕。中醫(yī)基礎(chǔ)理論有關(guān)衰老的病機(jī)闡述諸多，雖然衰老的病因病機(jī)比較復(fù)雜，但腎虛衰老說始終是中醫(yī)學(xué)研究的核心。

因腎為先天之本，藏精，主骨生髓，主生長發(fā)育與生殖。腎臟虛衰及由此產(chǎn)生的機(jī)體相應(yīng)機(jī)能的退化是造成衰老的重要原因?！端貑枴ど瞎盘煺嬲摗吩唬骸芭悠邭q，腎氣盛……七七任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭”，“丈夫八歲，腎氣實(shí)……八八腎臟衰”，說明腎在人體生長發(fā)育直至衰老的過程中發(fā)揮著重要作用〔4〕?！夺t(yī)學(xué)正傳》中曰：“腎氣盛則壽延，腎氣衰則壽夭”，腎氣的盛衰關(guān)系著壽命的長短〔5〕。因此，保持腎氣充足則會(huì)有延年益壽之功。腎在衰老的發(fā)生和發(fā)展過程中起著非常重要的作用，研究抗衰老的藥物首先需要考慮補(bǔ)腎為主。

3 地黃飲子及其抗衰老機(jī)制

地黃飲子出自《黃帝素問·宣明論方》，是陰陽雙補(bǔ)的代表方，方中含有中藥熟地、肉桂、五味子、肉從蓉、山茱萸、巴戟天、石斛、石菖蒲、麥冬、薄荷、遠(yuǎn)志、茯苓、附子、大棗、姜，功效為“滋腎陰、補(bǔ)腎陽、化痰開竅”，治療喑痱證。地黃飲子為古代名方，為古今名醫(yī)常用方劑，如葉天士、徐靈胎、秦伯未、趙錫武等。目前，有關(guān)地黃飲子的實(shí)驗(yàn)研究以阿爾茨海默病(AD)居多，且可能的作用機(jī)制已非常明晰〔6〕。

3.1修復(fù)線粒體損傷 線粒體是細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸的場所，通過氧化磷酸化在線粒體內(nèi)膜產(chǎn)生質(zhì)子梯度，經(jīng)過反應(yīng)產(chǎn)生三磷酸腺苷(ATP)，具有調(diào)節(jié)糖異生、氧化脂肪酸、調(diào)控細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平和細(xì)胞凋亡的功能，維持正常的線粒體功能對(duì)于細(xì)胞和機(jī)體健康至關(guān)重要。線粒體功能出現(xiàn)障礙被認(rèn)為是衰老和與衰老疾病相關(guān)的主要原因，其可能在衰老的病理生理學(xué)或在導(dǎo)致衰老的早期階段中起關(guān)鍵作用。因此，線粒體將成為防治衰老性慢性疾病和促進(jìn)健康老齡化的靶點(diǎn)〔7〕。近年來，線粒體DNA損傷學(xué)說成為衰老機(jī)制的研究熱點(diǎn)，線粒體DNA損傷后，導(dǎo)致ATP生成減少，從而出現(xiàn)了細(xì)胞、組織和器官的功能衰退〔8，9〕。

有研究發(fā)現(xiàn)〔10〕地黃飲子不僅可以通過保護(hù)線粒體結(jié)構(gòu)來提高線粒體功能，從而促進(jìn)三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化進(jìn)行，達(dá)到改善能量代謝的作用，還可以通過顯著增加線粒體膜電位，有效保護(hù)線粒體內(nèi)膜的完整性，減少線粒體腫脹，從而達(dá)到保護(hù)線粒體結(jié)構(gòu)的目的。張娜〔11〕在研究AD大鼠時(shí)發(fā)現(xiàn)，通過激活CREB/PGC-1α通路，地黃飲子可以促進(jìn)線粒體生物合成，使線粒體的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性增加，線粒體的功能得到了提高，從而增加了細(xì)胞的能量供應(yīng)。線粒體額結(jié)構(gòu)和功能得到恢復(fù)后，對(duì)于機(jī)體的能量代謝也起到了正面的影響。

3.2清除自由基 自由基學(xué)說認(rèn)為機(jī)體由于代謝產(chǎn)生的過多自由基引起了脂質(zhì)過氧化，破壞了生物膜的穩(wěn)定性，從而導(dǎo)致褐脂素的產(chǎn)生、脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和基因突變等，最終引起衰老〔12〕。大量實(shí)驗(yàn)研究〔13～17〕發(fā)現(xiàn)地黃飲子對(duì)老年性癡呆大鼠模型、腦缺血再灌注模型大鼠、AD轉(zhuǎn)基因小鼠、β淀粉樣蛋白(Aβ)25-35損傷的PC-12細(xì)胞等動(dòng)物模型或細(xì)胞都有抗氧化的作用，能夠通過提高以上實(shí)驗(yàn)對(duì)象機(jī)體的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、過氧化氫酶(CAT)等抗氧化酶的活性，降低丙二醛(MDA)的含量，清除機(jī)體多余的自由基，減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)造成的損傷。

3.3抑制細(xì)胞凋亡 細(xì)胞凋亡學(xué)說是1972年由澳大利亞病理學(xué)家Kerr等提出〔18〕。細(xì)胞凋亡是指為了維持機(jī)體的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制細(xì)胞而自主發(fā)生的有序死亡，是機(jī)體的主動(dòng)過程。機(jī)體的生理、病理過程都會(huì)發(fā)生細(xì)胞凋亡，其對(duì)衰老起負(fù)面作用。調(diào)控細(xì)胞凋亡的基因啟動(dòng)后，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的某些生理功能產(chǎn)生障礙，或病理狀態(tài)得到惡化，甚至?xí)铀偎ダ系倪M(jìn)程。地黃飲子通過調(diào)控哺乳動(dòng)物雷帕霉素蛋白(mTOR)、轉(zhuǎn)錄活化因子(ATF)4/同源蛋白(CHOP)、蛋白激酶RNA樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PERK)/真核翻譯起始因子2α亞單位(eIF2α)等信號(hào)通路的相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)和保護(hù)線粒體的功能，起到抑制細(xì)胞凋亡的作用。關(guān)慧波等〔19〕在研究中發(fā)現(xiàn)通過調(diào)控mTOR信號(hào)通路中4E-BP和p70S6K的mRNA和蛋白的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)了細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞凋亡。溫彬宇等〔20〕在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)地黃飲子通過抑制ATF4/CHOP信號(hào)通路激活，調(diào)節(jié)了凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而顯著減少神經(jīng)元凋亡。高俊峰等〔21〕發(fā)現(xiàn)地黃飲子可以抑制PERK/eIF2α通路的激活，減少由于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激造成的細(xì)胞凋亡。馬濤等〔22〕研究發(fā)現(xiàn)地黃飲子藥物血清通過保護(hù)Aβ1-42導(dǎo)致的線粒體損傷，從而抑制了依賴線粒體的細(xì)胞凋亡的通路被激活，減少了細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

3.4調(diào)節(jié)免疫功能 研究發(fā)現(xiàn)，長壽老人免疫系統(tǒng)完整性良好〔23〕，說明人體的衰老與免疫功能具有密切關(guān)系〔24〕，如果對(duì)免疫系統(tǒng)進(jìn)行相應(yīng)干預(yù)，可能會(huì)延緩衰老過程〔25〕。高山等〔26〕研究發(fā)現(xiàn)加味地黃飲子可以有效改善自然衰老大鼠的免疫狀態(tài)，提高其免疫功能的作用。

3.5調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌功能 PD的發(fā)病率逐年增加且其發(fā)病機(jī)制尚未明確，但是患者的紋狀體多巴胺(DA)遞質(zhì)減少這一事實(shí)已經(jīng)確認(rèn)，地黃飲子通過調(diào)控亢進(jìn)的下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸，減少了糖皮質(zhì)激素的分泌，降低了PD腎虛證模型大鼠腦組織中單胺氧化酶(MAO)和脂褐素(Lipo)的含量，減少了DA的降解，增強(qiáng)了黑質(zhì)區(qū)的DA能神經(jīng)元受損細(xì)胞的修復(fù)能力，提高了DA能神經(jīng)元的數(shù)量，對(duì)PD腎虛證模型大鼠有一定的治療作用〔27〕。

3.6對(duì)p53/p21和 Notch信號(hào)通路的影響 信號(hào)通路學(xué)說在衰老進(jìn)程中發(fā)揮重要作用，包括絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)通路、p53/p21 信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路、核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB信號(hào)通路、mTOR信號(hào)通路及 Notch信號(hào)通路等〔28～30〕。P21和P53是細(xì)胞周期的重要調(diào)節(jié)因子，當(dāng)某種外界刺激作用到細(xì)胞時(shí)，P53蛋白會(huì)出現(xiàn)應(yīng)激性快速上調(diào)，P21蛋白隨之被激活，抑制了P21蛋白磷酸化的進(jìn)行，正常的細(xì)胞周期受阻，細(xì)胞發(fā)生衰老。因此，P21和P53的蛋白表達(dá)與衰老直接相關(guān)〔31〕。高山等〔32〕在研究中發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)小鼠經(jīng)過加味地黃飲子干預(yù)后，P21和P53mRNA的表達(dá)水平明顯降低，加味地黃飲子可能通過下調(diào)P21和P53基因的表達(dá)，起到延緩衰老的作用。有實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)〔33〕，地黃飲子可能通過激活經(jīng)典的Notch信號(hào)通路的方式，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，加速或參與腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞的再生和修復(fù)，從而改善神經(jīng)功能的缺損。

3.7其他 實(shí)驗(yàn)證實(shí)，地黃飲子除了參與以上抗衰老的機(jī)制外，還對(duì)能量代謝和骨代謝有一定的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，地黃飲子能通過顯著提高三羧酸循環(huán)中的關(guān)鍵酶丙酮酸脫氫酶(PDH)和α-酮戊二酸脫氫酶(KGDH)的活性，促進(jìn)三羧酸循環(huán)的進(jìn)行，有效改善葡萄糖的利用〔34〕。顏春魯?shù)取?5〕在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)地黃飲子能夠提高絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠模型的骨密度，促進(jìn)骨的形成、抑制骨的吸收，防治絕經(jīng)后骨代謝異常。

綜上，地黃飲子能夠在一定程度上修復(fù)線粒體損傷、清除自由基、抑制細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)免疫功能、調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌功能、對(duì)p53/p21和 Notch信號(hào)通路的產(chǎn)生影響和對(duì)能量代謝和骨代謝有一定的作用，從以上機(jī)制中起到抗衰老的作用。

由于地黃飲子是復(fù)方，由多味藥材組成，目前這些藥材的具體化學(xué)成分并沒有得到確切的定論，并且在熬制的過程中會(huì)發(fā)生復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)。因此，地黃飲子抗衰老的精確藥用機(jī)制并不能很快得到驗(yàn)證，需要經(jīng)過多重大量的實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證。隨著衰老發(fā)生機(jī)制研究的深入，會(huì)為地黃飲子抗衰老機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究提供更多參考。在今后的研究中可以通過間接實(shí)驗(yàn)手段來驗(yàn)證其作用機(jī)制，比如地黃飲子防治老年性疾病代謝組學(xué)的深入研究等。