砧木及抗性馬尾松松脂組分對(duì)松材線蟲(chóng)的響應(yīng)

李文華　劉青華　周志春等

關(guān)鍵詞：馬尾松；松材線蟲(chóng)；砧木；抗性；松脂組分

中圖分類(lèi)號(hào)：S763.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-1498（2023）04-0001-11

馬尾松（Pinus massoniana Lamb.）廣泛分布于我國(guó)亞熱帶地區(qū)，適應(yīng)性強(qiáng)，在土層深厚的土壤中生長(zhǎng)較快，是我國(guó)主要的產(chǎn)脂、用材和荒山造林先鋒樹(shù)種。其松脂是由分泌細(xì)胞分泌的無(wú)色透明次生代謝產(chǎn)物，可以分離成松節(jié)油和松香，主要由萜類(lèi)物質(zhì)組成，貯藏于松樹(shù)的針葉、枝和莖的木質(zhì)部和韌皮部的樹(shù)脂道系統(tǒng)中，在針葉樹(shù)種的防御體系中有著重要的作用。此外，松脂廣泛應(yīng)用于香料、醫(yī)藥、機(jī)械、造紙、油墨等行業(yè)，也是我國(guó)重要的工業(yè)原料及可再生環(huán)保資源。

松材線蟲(chóng)病被稱為松樹(shù)的“癌癥”，最快兩個(gè)月內(nèi)可導(dǎo)致感染植株死亡。馬尾松常易感染松材線蟲(chóng)病，但有些松樹(shù)（如濕地松、火炬松）卻明顯具有抗病性。據(jù)國(guó)家林業(yè)和草原局統(tǒng)計(jì)，近30年來(lái)，全國(guó)因松材線蟲(chóng)病損失的松樹(shù)累計(jì)可達(dá)數(shù)十億株，造成直接經(jīng)濟(jì)損失和生態(tài)服務(wù)價(jià)值損失高達(dá)上千億元，松材線蟲(chóng)病已成為全球森林生態(tài)系統(tǒng)中最具危險(xiǎn)性、毀滅性的病害之一。

松屬植物在遭受生物或非生物刺激時(shí)，能夠經(jīng)樹(shù)脂道分泌化學(xué)防御物質(zhì)松脂進(jìn)行自我保護(hù)；受到創(chuàng)傷時(shí)，其分泌的松脂將傷口封閉，并為入侵生物制造有毒的環(huán)境。已有相關(guān)研究表明，松脂的各類(lèi)組分功能不同，萜類(lèi)化合物可以抑制細(xì)菌、真菌和病毒感染，蒎烯類(lèi)是松樹(shù)防御反應(yīng)的重要化合物，單萜類(lèi)化合物具有良好的殺蟲(chóng)效果；倍半萜類(lèi)與松材線蟲(chóng)病抗性也有緊密聯(lián)系。

嫁接技術(shù)可能對(duì)提高植物抗逆境能力和對(duì)病蟲(chóng)害抵抗能力有一定程度改善。不同蘋(píng)果砧木影響植物在脅迫環(huán)境下生長(zhǎng)受抑制情況，耐性強(qiáng)的砧木可通過(guò)調(diào)節(jié)自身生理特征以適應(yīng)脅迫環(huán)境；新疆葡萄不同砧木間也存在抗旱能力差異。本文通過(guò)分析不同砧木及不同抗性馬尾松接種松材線蟲(chóng)后各松脂組分動(dòng)態(tài)變化，揭示砧木對(duì)馬尾松抗松材線蟲(chóng)病影響及馬尾松對(duì)松材線蟲(chóng)病害的響應(yīng)機(jī)制，進(jìn)一步為防治馬尾松松材線蟲(chóng)病提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

馬尾松試驗(yàn)林設(shè)在浙江省臨海市林業(yè)技術(shù)推廣和場(chǎng)圃旅游服務(wù)總站（28°88′N(xiāo)，121°01′E），屬亞熱帶季風(fēng)氣候，四季分明，雨量充沛，溫暖濕潤(rùn)，年平均氣溫17.30℃，全年無(wú)霜期242 d，年平均降水量1638.10 mm，年平均日照時(shí)數(shù)1936.40h，土壤類(lèi)型為紅壤。試驗(yàn)材料取自5年生馬尾松嫁接苗測(cè)定林，包括共有16個(gè)無(wú)性系，馬尾松砧木為浙江馬尾松一代良種‘5410種子園混合種子，依據(jù)前期對(duì)砧木接種松材線蟲(chóng)，砧木全部死亡；濕地松砧木為G-222優(yōu)良種子，對(duì)砧木接種松材線蟲(chóng)，致死率為30%。兩種砧木所用馬尾松穗條均為休寧5（4級(jí)）。根據(jù)前期安徽省林業(yè)科學(xué)研究院對(duì)馬尾松無(wú)性系對(duì)松材線蟲(chóng)病的抗性指數(shù)測(cè)定，劃分為1～4級(jí)，其中1級(jí)為易感，4級(jí)為高抗。于2018年選擇高抗無(wú)性系休寧5（4級(jí)）和易感無(wú)性系黃山1（1級(jí)）各10株，在試驗(yàn)前未采過(guò)松脂；供試松材線蟲(chóng)材料為高致病性、高繁殖性線蟲(chóng)株系‘廣株3B，此種松材線蟲(chóng)分離種群多次繼代培養(yǎng)的松材線蟲(chóng)繁殖速度比初代培養(yǎng)的要慢5～6代，繁殖能力下降。試驗(yàn)所用線蟲(chóng)為從當(dāng)年新枝中分離出來(lái)，并經(jīng)鑒定為‘廣德38，于灰葡萄孢菌落上純培養(yǎng)，保存于4℃冰箱中備用。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1松材線蟲(chóng)培養(yǎng)及接種 將灰葡萄孢接種在馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基上，于28℃霉菌培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)5d。待著色菌落生長(zhǎng)到培養(yǎng)皿上蓋后，將所選高致病性松材線蟲(chóng)材料接種到灰葡萄孢菌落中，在28℃恒溫培養(yǎng)約10 d，使菌落完全被松材線蟲(chóng)取食。采用貝爾曼漏斗法將松材線蟲(chóng)分離，12 h后，將其收集在10 mL離心管中，無(wú)菌水沖洗3次，并以300 r.min^-1離心5 min，以去除上清液。將所得各離心管中的松材線蟲(chóng)匯聚混勻，最后制備成每1μL含有50條松材線蟲(chóng)的懸浮液。

于2018年7月對(duì)馬尾松接種松材線蟲(chóng)（圖1）。分別選取10株馬尾松砧木馬尾松和10株濕地松砧木馬尾松、10株高抗馬尾松和10株易感馬尾松接種松材線蟲(chóng)懸濁液。參考Liu等處理方法進(jìn)行接種與樣品采集。所取樣品包括上述40株馬尾松，包括接種前、接種后1、7、15和30 d4個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)，每株馬尾松取3個(gè)重復(fù)。

1.2.2松脂收集及化學(xué)組分分析每個(gè)無(wú)性系采用3個(gè)重復(fù)，從每個(gè)試驗(yàn)區(qū)系統(tǒng)選擇了1～2株生長(zhǎng)最佳的健康馬尾松植株進(jìn)行松脂收集測(cè)定，在植株胸徑處劃出一條長(zhǎng)約20 cm、寬1～2 mm、深3～4 mm的斜口，采用下降式單刀采脂法收集松脂。將新鮮松脂收集于5 mL聚乙烯管中，在松脂達(dá)到管體積的2/3時(shí)，立即封閉管口并放人冰盒中，置于-20℃冰箱中保存待測(cè)。

利用氣相色譜·質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC/MS）分析和測(cè)定松脂各組分含量。樣品制備參考Karanikas的方法，使用Agilent 6890N氣相色譜和Agilent59758質(zhì)譜聯(lián)用，檢測(cè)馬尾松的松脂組分含量。獲得的片段通過(guò)與NTST08譜庫(kù)（National Institute of Standards and Technology，USA）匹配來(lái)進(jìn)行松脂化學(xué)組分的識(shí)別，根據(jù)各組分與內(nèi)標(biāo)的面積確定各組分在松脂中的含量。

1.2.3萜類(lèi)化合物對(duì)松材線蟲(chóng)的影響 以前期所用灰葡萄孢菌落培養(yǎng)的松材線蟲(chóng)，接種于PDA培養(yǎng)基中培養(yǎng)，用貝爾曼漏斗法將分離出的松材線蟲(chóng)裝在2 mL離心管中，制成含有500條松材線蟲(chóng)的1 mL懸濁液。將純度為97%的α-蒎烯標(biāo)準(zhǔn)品、純度為98%的β-蒎烯標(biāo)準(zhǔn)品、純度為98%的長(zhǎng)葉烯標(biāo)準(zhǔn)品、純度為97%的檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)品、純度為97%的β-月桂烯標(biāo)準(zhǔn)品及98%的龍腦標(biāo)準(zhǔn)品以一定濃度梯度作用于松材線蟲(chóng)，在25℃條件下培養(yǎng)24 h；以Triton X-100為對(duì)照，技術(shù)重復(fù)3次；選取處理后0.5、6、24 h為時(shí)間節(jié)點(diǎn)觀察線蟲(chóng)致死率。

2結(jié)果與分析

2.1砧木對(duì)馬尾松抗性的影響

2.1.1不同砧木馬尾松主要松脂組分及含量 接種松材線蟲(chóng)后，馬尾松砧木和濕地松砧木馬尾松均無(wú)發(fā)病癥狀（圖2d，2e）。對(duì)以馬尾松和濕地松為砧木的馬尾松松脂進(jìn)行GC-MS檢測(cè)，選擇與NTST08匹配度高于90%、含量超過(guò)0.01%的萜類(lèi)松脂化學(xué)組分（圖3），結(jié)果表明：兩種砧木馬尾松均檢測(cè)出19種松脂組分，其中單萜類(lèi)6種，倍半萜類(lèi)7種，二萜類(lèi)6種（表1）。通過(guò)對(duì)各松脂組分含量方差分析表明：倍半萜含量在兩種砧木馬尾松間無(wú)顯著差異，平均含量約為90.00～130.00 mg·g^-1；單萜含量與二萜含量在兩種砧木馬尾松間存在顯著差異，其中濕地松砧木單萜含量較馬尾松砧木高9.64%，馬尾松砧木二萜含量較濕地松砧木高2.85%。

a.蒎烯含量在單萜中最高，在不同砧木馬尾松間存在顯著差異（p<0.05），且濕地松砧木含量較馬尾松砧木高8.02%。長(zhǎng)葉烯、石竹烯和樅酸在不同砧木馬尾松間具有顯著差異（p<0.05），且濕地松砧木石竹烯含量高于馬尾松砧木85.24%、馬尾松砧木長(zhǎng)葉烯含量與樅酸含量分別高于濕地松砧木25.22%與39.76%。α-石竹烯、反式-β-金合歡烯和去氫樅酸含量在不同砧木馬尾松間也存在顯著差異（p<0.05）。

β-蒎烯平均含量約為17.10～19.30 mg·g^-1、β-月桂烯平均含量約為0.50～1.70 mg·g^-1、檸檬烯平均含量約為1.50～4.30 mg·g^-1、水芹烯平均含量約為59.00～69.00 mg·g^-1、龍腦平均含量約為10.80～19.00 mg·g^-1，在兩種砧木馬尾松間均無(wú)顯著差異。長(zhǎng)葉蒎烯、環(huán)長(zhǎng)葉烯、灑剔烯、海松酸、山達(dá)海松酸、左旋海松酸／長(zhǎng)葉松酸和新樅酸含量在兩種砧木馬尾松間也無(wú)顯著差異。

2.1.2不同砧木接種松材線蟲(chóng)后松脂化學(xué)組分動(dòng)態(tài)變化兩種砧木馬尾松接種松材線蟲(chóng)1d后松脂組分中萜類(lèi)含量略有增加，但均無(wú)顯著差異。α-蒎烯、β-蒎烯和龍腦在兩種砧木馬尾松中含量變化規(guī)律相似。對(duì)馬尾松砧木馬尾松接種松材線蟲(chóng)后不同時(shí)間松脂化學(xué)組分均值分析（圖4a），結(jié)果表明：β-月桂烯、檸檬烯和新樅酸含量變化規(guī)律為先上升后下降，且在7d最大值15 d最小值；海松酸含量變化規(guī)律為上升趨勢(shì)，且在15 d達(dá)最大值；灑剔烯等含量變化無(wú)顯著差異。對(duì)濕地松砧木馬尾松接種松材線蟲(chóng)后不同時(shí)間松脂化學(xué)組分均值分析（圖4b），結(jié)果顯示：海松酸含量變化規(guī)律為先上升后下降，且7d最大值15 d最小值；灑剔烯含量變化規(guī)律為逐漸上升，且在15 d最大值。β-蒎烯、檸檬烯和新樅酸等含量變化無(wú)顯著差異。在兩種砧木馬尾松接種松材線蟲(chóng)7d時(shí)，新樅酸僅在馬尾松砧木中達(dá)最大值，而海松酸僅在濕地松砧木中達(dá)最大值，且萜類(lèi)組分含量在兩種砧木馬尾松間均無(wú)顯著差異。

接種松材線蟲(chóng)后α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯、龍腦、海松酸和新樅酸含量在兩種砧木馬尾松間無(wú)顯著差異。β-月桂烯含量在接種松材線蟲(chóng)1d后馬尾松砧木顯著高于濕地松砧木（p<0.05）（圖5a）；β-月桂烯含量在接種松材線蟲(chóng)7d后馬尾松砧木顯著高于濕地松砧木（p<0.05）（圖5b）；在接種松材線蟲(chóng)15 d后各組分含量在馬尾松砧木與濕地松砧木間無(wú)顯著差異（圖5c）。

2.2不同抗性馬尾松接種松材線蟲(chóng)后松脂化學(xué)組分分析

2.2.1不同抗性馬尾松主要松脂組分及含量 接種松材線蟲(chóng)后，高抗馬尾松無(wú)癥狀出現(xiàn)，易感馬尾松在接種后7d即出現(xiàn)針葉枯黃現(xiàn)象，并在接種后30 d時(shí)全部枯死（圖2c，2f）。在組織結(jié)構(gòu)上，易感馬尾松組織結(jié)構(gòu)接種松材線蟲(chóng)1d時(shí)有輕微損傷（圖2a，2b）。高抗馬尾松和易感馬尾松松脂共檢測(cè)出19種松脂組分，對(duì)高抗與易感馬尾松松脂進(jìn)行GC-MS檢測(cè)，選擇與NTST08匹配度高于90%、含量超過(guò)0.01%的萜類(lèi)松脂化學(xué)組分，結(jié)果表明：高抗與易感馬尾松均檢測(cè)出19種松脂組分，其中單萜類(lèi)6種，倍半萜類(lèi)7種，二萜類(lèi)6種（表2）。其中，高抗與易感馬尾松松脂組分僅在含量上有差異，方差分析表明：高抗與易感馬尾松倍半萜和二萜含量之間無(wú)顯著差異，在松脂中平均含量分別約為80.00～100.00 mg·g^-1和680.00～710.00 mg·g^-1。而在單萜含量中存在顯著差異，其中高抗馬尾松單萜含量比易感馬尾松單萜含量高7.34%。

α-蒎烯含量在單萜中含量最高，在不同抗性馬尾松間存在顯著差異（p<0.05），高抗馬尾松含量較易感馬尾松含量高9.28%。β-蒎烯、β-月桂烯、檸檬烯、長(zhǎng)葉烯在不同抗性馬尾松間有顯著差異（p<0.05），且除β-月桂烯外高抗馬尾松含量分別高于易感馬尾松43.70%、39.37%、4.59%。水芹烯平均含量約為56.00～64.00 mg·g^-1、石竹烯平均含量約為4.00～5.50 mg·g^-1。長(zhǎng)葉蒎烯、環(huán)長(zhǎng)葉烯、灑剔烯、α-石竹烯、反式-β-金合歡烯、海松酸、山達(dá)海松酸、左旋海松酸／長(zhǎng)葉松酸、去氫樅酸、樅酸和新樅酸含量在不同抗性馬尾松間也無(wú)顯著差異。

2.2.2不同抗性馬尾松接種松材線蟲(chóng)后松脂化學(xué)組分動(dòng)態(tài)變化

高抗與易感馬尾松接種松材線蟲(chóng)1 d后松脂組分中萜類(lèi)含量略有增加，但無(wú)顯著差異。對(duì)高抗馬尾松接種松材線蟲(chóng)后不同時(shí)間松脂化學(xué)組分均值分析（圖6a），結(jié)果顯示：α-蒎烯、β-月桂烯、檸檬烯、長(zhǎng)葉烯和α-石竹烯含量變化規(guī)律為先上升后下降，且7d達(dá)最大值15 d達(dá)最小值；β-蒎烯和龍腦含量變化規(guī)律先上升后下降，且7d達(dá)最大值0d達(dá)最小值；海松酸和去氫樅酸含量變化規(guī)律為逐漸上升，且15 d達(dá)最大值。對(duì)易感馬尾松接種松材線蟲(chóng)后不同時(shí)間松脂化學(xué)組分均值分析（圖6b），結(jié)果顯示：含量先上升后下降且7d達(dá)最大值15 d達(dá)最小值的為新樅酸；含量為7d達(dá)最大值Od達(dá)最小值的為反式-β-金合歡烯；含量呈上升趨勢(shì)15 d達(dá)最大值的為海松酸和去氫樅酸；含量7d達(dá)最小值15 d達(dá)最大值的為水芹烯和環(huán)長(zhǎng)葉烯；含量呈下降趨勢(shì)15 d達(dá)最小值的為α-石竹烯和樅酸。

α-蒎烯和β-蒎烯含量在接種松材線蟲(chóng)1d后高抗馬尾松顯著高于易感馬尾松（p<0.05）（圖7a）；α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯與長(zhǎng)葉烯含量在接種松材線蟲(chóng)7d后高抗馬尾松顯著高于易感馬尾松（p<0.05）（圖7b）；在接種松材線蟲(chóng)15 d后各組分在高抗與易感馬尾松間無(wú)顯著差異（圖7c）。

2.3萜類(lèi)對(duì)松材線蟲(chóng)的影響

參考馬尾松松脂化學(xué)組分的主要萜類(lèi)化合物含量，檢測(cè)松脂中主要萜類(lèi)化學(xué)物對(duì)松材線蟲(chóng)的抑制作用。根據(jù)所測(cè)松脂組分含量及劉青華等研究中馬尾松松脂萜類(lèi)的平均含量，設(shè)置不同濃度梯度的α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯和長(zhǎng)葉烯溶液，研究相應(yīng)萜類(lèi)對(duì)松材線蟲(chóng)的影響。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯、長(zhǎng)葉烯、β-月桂烯和龍腦溶液的松材線蟲(chóng)平均存活率隨著化合物濃度和處理時(shí)間的增加而逐漸下降（圖8）。在α-蒎烯梯度濃度溶液中，150 mg·g^-1濃度下處理24 h松材線蟲(chóng)全部死亡，而在500 mg·g^-1濃度下處理0.5 h即造成松材線蟲(chóng)全部死亡（圖8A）。在β-蒎烯梯度濃度溶液中，不同濃度溶液處理0.5 h后松材線蟲(chóng)致死率達(dá)約50%，處理24 h后松材線蟲(chóng)致死率趨于100%（圖8B）。在長(zhǎng)葉烯梯度濃度溶液中，10 mg·g^-1濃度下處理0.5 h松材線蟲(chóng)達(dá)80%致死率（圖8C）。在檸檬烯梯度濃度溶液中，3.60mg·g^-1濃度下處理0.5 h后松材線蟲(chóng)致死率趨于100%（圖8D）。在β-月桂烯梯度濃度溶液中，1.20 mg·g^-1濃度下處理24 h松材線蟲(chóng)致死率達(dá)約50%，2.40 mg·g^-1濃度下處理24 h松材線蟲(chóng)致死率達(dá)約85%（圖8E）。在龍腦梯度濃度溶液中，13.00 mg·g^-1濃度下處理24 h松材線蟲(chóng)致死率達(dá)約50%.50.00 mg·g^-1濃度下處理24 h松材線蟲(chóng)致死率達(dá)約80%（圖8F）。

3討論

不同砧木馬尾松和不同抗性馬尾松樹(shù)干木質(zhì)部松脂中共檢出19種組分，與古研等和張振洪等檢出的組分基本一致。α-蒎烯、β-蒎烯、長(zhǎng)葉烯、水芹烯、灑剔烯、海松酸、左旋海松酸／長(zhǎng)葉松酸、脫氫樅酸、樅酸和新樅酸為松脂中含量較高的組分。

不同砧木馬尾松松脂組分含量響應(yīng)松材線蟲(chóng)變化差異較小。松材線蟲(chóng)入侵松屬植物后，刺激分泌纖維素酶等細(xì)胞壁相關(guān)蛋白，類(lèi)毒液過(guò)敏原蛋白等激發(fā)寄主產(chǎn)生防御反應(yīng)，進(jìn)而在接種后的7 d左右引起萜烯類(lèi)次級(jí)代謝產(chǎn)物的大量積累。本研究中，在兩種砧木馬尾松接種松材線蟲(chóng)7d時(shí)，新樅酸僅在馬尾松砧木中達(dá)最大值，而海松酸僅在濕地松砧木中達(dá)最大值，且萜類(lèi)組分含量在兩種砧木馬尾松間均無(wú)顯著差異。馬尾松對(duì)松材線蟲(chóng)抗性可能與砧木無(wú)關(guān)，馬尾松更易感染松材線蟲(chóng)病可能由于自身不斷進(jìn)化，形成更適宜松材線蟲(chóng)寄生的群體組成結(jié)構(gòu)。

馬尾松響應(yīng)松材線蟲(chóng)入侵進(jìn)行的主動(dòng)防御造成萜烯類(lèi)物質(zhì)大量增加，而不同抗性馬尾松接種松材線蟲(chóng)后松脂組分變化情況有所不同?？剐灾笖?shù)越高，產(chǎn)脂量越高，其單萜含量越高。高抗馬尾松中α-蒎烯、β-蒎烯、β-月桂烯、檸檬烯、龍腦、長(zhǎng)葉烯與α-石竹烯含量在接種7 d時(shí)達(dá)最大值，含量動(dòng)態(tài)變化呈先上升后下降趨勢(shì)。易感馬尾松中反式-β-金合歡烯、去氫樅酸與新樅酸含量在接種7d時(shí)達(dá)最大值。接種松材線蟲(chóng)7d時(shí)，α-蒎烯、β-蒎烯、長(zhǎng)葉烯與檸檬烯含量在高抗馬尾松與易感馬尾松之間存在顯著差異（p<0.05），且均為高抗馬尾松顯著高于易感馬尾松。Zhao等研究發(fā)現(xiàn)，松材線蟲(chóng)入侵后，馬尾松釋放的揮發(fā)性物質(zhì)主要為α-蒎烯、β-蒎烯和長(zhǎng)葉烯三種蒎烯類(lèi)物質(zhì)；Kuroda等研究發(fā)現(xiàn)，松材線蟲(chóng)入侵黑松后，單萜的含量明顯增加，其中α-蒎烯含量增加到健康松樹(shù)的2～4倍，β-蒎烯和幾種其他的單萜含量是健康松樹(shù)的2～3倍；本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果基本一致。

通過(guò)將α-蒎烯、β-蒎烯、長(zhǎng)葉烯、檸檬烯、β-月桂烯與龍腦萜類(lèi)組分對(duì)松材線蟲(chóng)進(jìn)一步梯度濃度試驗(yàn)表明：α-蒎烯溶液隨濃度升高對(duì)松材線蟲(chóng)毒害作用越大，而150 mg·g^-1濃度下處理24 h松材線蟲(chóng)全部死亡。β-蒎烯溶液不同濃度溶液處理0.5 h后松材線蟲(chóng)即達(dá)到約50%致死率，對(duì)松材線蟲(chóng)抑制作用與溶液濃度無(wú)關(guān)。長(zhǎng)葉烯溶液隨濃度升高對(duì)松材線蟲(chóng)抑制作用越大，10 mg·g^-1濃度下處理0.5 h松材線蟲(chóng)達(dá)到80%致死率。檸檬烯溶液在3.60 mg·g^-1濃度下處理0.5 h后松材線蟲(chóng)存活率趨于100%。β-月桂烯1.20 mg·g^-1濃度下處理24 h松材線蟲(chóng)致死率約50%。龍腦13.00 mg·g^-1濃度下處理24 h松材線蟲(chóng)致死率達(dá)約50%，且致死率升高較慢。上述結(jié)果與Liu等對(duì)馬尾松研究結(jié)果相同，α-蒎烯、β-蒎烯、長(zhǎng)葉烯和檸檬烯在低濃度下即可抑制松材線蟲(chóng)的存活，是馬尾松萜烯類(lèi)主要防御成分；Niu等對(duì)馬尾松研究發(fā)現(xiàn)也得出相似結(jié)論，α-蒎烯、β-蒎烯等單萜類(lèi)化合物在低濃度下具有抑制松材線蟲(chóng)繁殖的作用。

4結(jié)論

馬尾松和濕地松樹(shù)干木質(zhì)部松脂中共檢測(cè)出19種松脂組分，α-蒎烯、β-蒎烯、水芹烯、反式-β-金合歡烯、海松酸、山達(dá)海松酸、左旋海松酸／長(zhǎng)葉松酸、去氫樅酸、樅酸和新樅酸在松脂中含量占比較高。松材線蟲(chóng)入侵樹(shù)體后，萜烯類(lèi)次生代謝產(chǎn)物在7d后大量積累并發(fā)生顯著變化。α-蒎烯、β-蒎烯、β-月桂烯、檸檬烯、龍腦、海松酸和新樅酸含量在不同砧木馬尾松接種松材線蟲(chóng)7 d時(shí)達(dá)最大值，其組分含量在兩種砧木間無(wú)顯著差異性，由此可得，砧木對(duì)馬尾松松材線蟲(chóng)抗性并無(wú)影響。接種松材線蟲(chóng)7d時(shí)α-蒎烯、β-蒎烯、β-月桂烯、檸檬烯、龍腦、長(zhǎng)葉烯、α-石竹烯、反式-β-金合歡烯和新樅酸含量在不同抗性馬尾松間動(dòng)態(tài)變化有所不同，α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯、長(zhǎng)葉烯為抗性馬尾松顯著高于易感馬尾松（p<0.05）；α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯與長(zhǎng)葉烯低濃度下抑制松材線蟲(chóng)活性，與馬尾松抗性有關(guān)，是馬尾松萜烯類(lèi)主要防御成分。