紅花續(xù)斷膏的皮膚安全性研究

韓苗苗，李君霞，劉金磊，趙曉輝*

（1. 山東明仁福瑞達(dá)制藥股份有限公司，山東 濟(jì)南 250104；2. 山東古金中醫(yī)藥科技有限公司，山東 濟(jì)南 250104）

紅花續(xù)斷膏為紅花、續(xù)斷、蜈蚣、象皮、血竭、川烏、草烏等多味中藥制成的黑膏藥，具有活血化瘀，續(xù)筋接骨，消腫止痛，補(bǔ)益肝腎之功，對(duì)骨折后愈合具有促進(jìn)作用。本研究采用家兔、大鼠動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)紅花續(xù)斷膏的皮膚刺激性、皮膚過(guò)敏性進(jìn)行研究，探討其皮膚安全性，為臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

HWL-02D全光譜燈（霍尼韋爾）。

1.2 試藥

紅花續(xù)斷膏 （山東古金中醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)：20200818）；空白基質(zhì)（由麻油、鉛丹熬制而成，山東古金中醫(yī)藥科技有限公司）；2, 4-二硝基氯苯（DNCB，北京化工廠(chǎng)，批號(hào)：20200710）；硫化鈉（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20200109）；無(wú)水乙醇（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20190820）；麻油（食品級(jí)，聊城市金水城油脂食品有限公司，批號(hào)：200501）。

1.3 動(dòng)物

新西蘭兔，普通級(jí)，雌雄各2只，共4只，2.3～2.8 kg，濟(jì)南西嶺角養(yǎng)殖繁育中心提供，許可證號(hào)：SCXK（魯）2015 0001；健康SD大鼠，SPF級(jí)，體重200～220 g，雌雄各半，濟(jì)南市朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（魯）20190003；飼養(yǎng)環(huán)境：恒溫26 ℃，相對(duì)濕度60 %。

2 方法與結(jié)果

2.1 家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)

取新西蘭家兔4只，給藥前24 h對(duì)其背部脊柱兩側(cè)脫毛，面積約為5 cm×10 cm（相當(dāng)于家兔體表面積的10 %），隨機(jī)分組；采用同體左右側(cè)自身對(duì)比法，每只動(dòng)物左側(cè)背部皮膚給予空白基質(zhì)作為對(duì)照組，右側(cè)背部皮膚給予供試品作為供試品組。

將膏藥加熱，溫度適宜后，貼敷于備皮處，用紗布、膠帶固定。每只動(dòng)物分籠飼養(yǎng)?？瞻讓?duì)照組、供試品組均給藥4次，每周貼敷1次，1次貼敷7日，連續(xù)4周持續(xù)貼敷[1-3]。

實(shí)驗(yàn)期間每周記錄動(dòng)物體重情況。觀察給藥前，給藥1，2，3周去除殘留藥物后1 h，以及給藥4周去除殘留藥物后1，24，48，72 h的皮膚情況。肉眼觀察皮膚在各時(shí)間點(diǎn)的刺激反應(yīng)包括：紅斑、水腫、色素沉著、出血、皮膚粗糙、皮膚菲薄，并對(duì)紅斑、水腫，按表1評(píng)分。計(jì)算每一觀察時(shí)間點(diǎn)各項(xiàng)分值，然后計(jì)算皮膚刺激強(qiáng)度分值，按表2評(píng)價(jià)刺激強(qiáng)度[2]。

表1 皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2 皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物體重穩(wěn)定增長(zhǎng)（見(jiàn)表3），未見(jiàn)明顯毒副作用。在全光譜燈光下肉眼觀察皮膚反應(yīng)。給藥前動(dòng)物皮膚未見(jiàn)異常。給藥1，2，3周去除殘留藥物后1 h及給藥4周并去除殘留藥物后1，24，48，72 h，4只實(shí)驗(yàn)兔均未見(jiàn)色素沉著、出血、皮膚粗糙、皮膚菲薄；去除殘留藥物后1 h可見(jiàn)輕度紅斑或水腫，癥狀不持久。停藥24，48，72 h后，空白基質(zhì)組無(wú)刺激癥狀，供試品組皮膚癥狀恢復(fù)正常。供試品刺激強(qiáng)度積分為0.3125，該值介于無(wú)刺激判定標(biāo)準(zhǔn)0～0.49范圍，依據(jù)皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為供試品對(duì)皮膚無(wú)刺激性，結(jié)果詳見(jiàn)表4、表5。

表3 實(shí)驗(yàn)期間兔體重/kg

表4 空白對(duì)照組皮膚評(píng)分統(tǒng)計(jì)結(jié)果

表5 供試品組皮膚評(píng)分統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.2 大鼠皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)

取30只SD大鼠，隨機(jī)分為空白組、觀察組（完整皮膚組和破損皮膚組）, 每組10只。3組均于實(shí)驗(yàn)前24 h將大鼠脊柱兩側(cè)毛用8 %硫化鈉淀粉糊脫凈，去毛面積約為體表面積的10 %。去毛24 h后，破損皮膚組大鼠用細(xì)砂紙?jiān)诿撁课辉斐刹羵?，以皮膚出現(xiàn)輕度密集滲血點(diǎn)為度。

空白組使用空白基質(zhì)，供試品組局部貼敷紅花續(xù)斷膏，用紗布、膠帶固定，貼敷7 d，7 d后用麻油擦凈藥物，觀察藥物去除后1，24，48，72 h皮膚刺激反應(yīng)，查看是否出現(xiàn)紅斑及紅腫，并觀察恢復(fù)情況。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 大鼠皮膚刺激反應(yīng)實(shí)驗(yàn)評(píng)分結(jié)果

大鼠皮膚刺激反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，空白組、供試品組（完整皮膚組和破損皮膚組）部分大鼠皮膚在1，24，48，72 h出現(xiàn)紅斑和水腫，刺激反應(yīng)平均分值分別為0.30，0.37，0.43，0.30，表明供試品無(wú)刺激性。

2.3 大鼠皮膚過(guò)敏實(shí)驗(yàn)

大鼠背部采取常規(guī)脫毛處理，局部碘伏消毒，保持皮膚完整，無(wú)損傷。剃毛面積3 cm×3 cm。取符合要求的大鼠30只，隨機(jī)分為空白組，DNCB組和供試品組，每組10只。各組大鼠分別用相應(yīng)試藥進(jìn)行去毛區(qū)皮膚致敏接觸和激發(fā)接觸[2-6]。

取空白基質(zhì)、DNCB 0.2 ml和供試品，分別涂在空白組、DNCB組和供試品組的大鼠背部左側(cè)去毛區(qū)，用紗布、膠帶固定試藥留置6 h。第7，14 d各組大鼠以同樣的方法重復(fù)施用實(shí)驗(yàn)試藥。

于末次致敏接觸實(shí)驗(yàn)試藥后14 d，用與致敏接觸相同的方法，分別涂在相應(yīng)組別大鼠右側(cè)去毛區(qū)，用紗布、膠帶固定試藥留置。6 h后用麻油擦去試藥，觀察并記錄擦去實(shí)驗(yàn)試藥后0，24，48，72 h各組大鼠皮膚過(guò)敏反應(yīng)情況。皮膚過(guò)敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表7，藥物皮膚致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表8，各組評(píng)分結(jié)果見(jiàn)表9。

表7 皮膚過(guò)敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表8 皮膚致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

表9 大鼠皮膚過(guò)敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)評(píng)分結(jié)果

結(jié)果顯示空白組、供試品組及DNCB組大鼠皮膚72 h內(nèi)均未出現(xiàn)水腫，其中空白組擦除試藥48 h后，有1只大鼠皮膚出現(xiàn)紅斑，72 h內(nèi)未消失，無(wú)致敏性（致敏率為10 %）；供試品組擦除試藥48 h后，有1只大鼠皮膚出現(xiàn)紅斑，72 h內(nèi)未消失，無(wú)致敏性（致敏率為10 %）；DNCB組擦除試藥24 h后，有1只大鼠皮膚出現(xiàn)紅斑，48 h后有2只大鼠皮膚出現(xiàn)紅斑，72 h內(nèi)未消失，輕度致敏（致敏率為30 %）。研究表明紅花續(xù)斷膏對(duì)大鼠皮膚致敏性與空白組相當(dāng)，DNCB有輕度致敏性。

3 結(jié)論

研究結(jié)果顯示，紅花續(xù)斷膏對(duì)兔皮膚無(wú)刺激性（評(píng)分＜0.49），對(duì)大鼠皮膚無(wú)刺激性（評(píng)分＜0.49）。紅花續(xù)斷膏對(duì)大鼠稍有致敏作用（致敏率為10 %），停藥后致敏反應(yīng)消失，皮膚恢復(fù)正常。研究顯示紅花續(xù)斷膏皮膚局部用藥有較好的安全性。