石斛的組織培養(yǎng)技術(shù)及移栽探析

郭逸榴

摘 ? ?要：文章闡述了霍山米斛、天目山鐵皮石斛和井岡山鐵皮石斛3種石斛的組織培養(yǎng)技術(shù)和林下栽培技術(shù)，建立了

3種石斛優(yōu)良品種的組培快繁體系，用不同培養(yǎng)基對(duì)3種石斛開展腋芽組織對(duì)芽的誘導(dǎo)試驗(yàn)、增殖試驗(yàn)和生根試驗(yàn)，并仿效石斛野外生長(zhǎng)狀態(tài)，用技術(shù)手段將石斛苗固定在濕地松等樹皮較厚的大樹上，盡量減少人工干預(yù)，使其自然生長(zhǎng)，達(dá)到仿野生生長(zhǎng)效果。

關(guān)鍵詞：米斛；石斛；組織培養(yǎng)；移栽

文章編號(hào)：1005-2690（2023）05-0001-03 ? ? ? 中國(guó)圖書分類號(hào)：S682.31 ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

石斛是我國(guó)名貴的珍稀藥材，在民間有“救命仙草”的美譽(yù)，市場(chǎng)需求較大。經(jīng)查相關(guān)資料發(fā)現(xiàn)，野生石斛經(jīng)過多年被采掘，現(xiàn)已非常稀少，1987年被國(guó)家列為野生藥材重點(diǎn)二級(jí)保護(hù)瀕危植物，這與人們?nèi)找嬖鲩L(zhǎng)的需求相矛盾。為了響應(yīng)《 “健康中國(guó)2023”規(guī)劃綱要》，解決市場(chǎng)供需矛盾，研究石斛的組織培養(yǎng)技術(shù)及移栽方式至關(guān)重要。

1 試驗(yàn)?zāi)康?/p>

從安徽省霍山、浙江省天目山、江西省井岡山分別引進(jìn)藥效最佳的霍山米斛、抗寒能力較強(qiáng)的天目山鐵皮石斛和井岡山本土野生鐵皮石斛3個(gè)主要石斛品種進(jìn)行組織培養(yǎng)快繁研究，建立3個(gè)石斛優(yōu)良品種的組培快繁體系。在此基礎(chǔ)上仿效石斛野外生長(zhǎng)狀態(tài)，用人工方式模擬野生石斛的生長(zhǎng)環(huán)境，培育出無(wú)論形狀還是品質(zhì)都十分接近野生石斛的種植石斛[1]。歐成軍（2020）[2]通過對(duì)比2種栽培模式發(fā)現(xiàn)，林下仿野生種植模式較棚內(nèi)仿野生種植模式成活率高。本試驗(yàn)用技術(shù)手段將石斛苗固定在濕地松等樹皮較厚的大樹上，盡量減少人工干預(yù)，使其自然生長(zhǎng)，達(dá)到仿野生生長(zhǎng)效果。

霍山米斛是中國(guó)國(guó)家地理標(biāo)志產(chǎn)品，主產(chǎn)于大別山區(qū)的安徽省霍山縣，多生長(zhǎng)在云霧繚繞的懸崖峭壁石縫隙間和參天古樹上?；羯矫柞艽蠓忍岣呷梭w內(nèi)SOD（延緩衰老的主要物質(zhì)）水平，有極高的藥用價(jià)值。

天目山鐵皮石斛產(chǎn)于浙江省天目山，生長(zhǎng)于海拔1 400 m左右的山地半陰濕巖石上，喜溫暖濕潤(rùn)氣候和半陰半陽(yáng)的環(huán)境，屬較耐寒石斛品種。該品種被列為中華九大仙草之首，藥用價(jià)值極高。

井岡山野生鐵皮石斛產(chǎn)于江西省井岡山深山，是江西省本土野生石斛品種，種源較稀有，生長(zhǎng)于海拔1 600 m左右的山地半陰濕巖石上。經(jīng)過長(zhǎng)期的適應(yīng)和自然選擇，鐵皮石斛在遺傳上形成了獨(dú)特的生命活動(dòng)機(jī)制和生物活性成分。

2 材料與方法

預(yù)處理材料時(shí)，用接種刀割取健壯、無(wú)病蟲害的枝條，去葉后用自來(lái)水沖洗表面灰塵，在超菌臺(tái)上去除枝條上表皮，取節(jié)，每段節(jié)保留1個(gè)3～5 cm的芽點(diǎn)，放入玻璃瓶中用無(wú)菌水沖洗10 min。

消毒外植體時(shí)，準(zhǔn)備75%乙醇、0.1%升汞和無(wú)菌水。用75%乙醇消毒后，再用無(wú)菌水在振蕩器中洗3次，0.1%升汞消毒后用無(wú)菌水在振蕩器中洗5次，之后把節(jié)段分為嫩、中、老3種，分別用升汞消毒6 min、8 min和10 min。

2.1 腋芽的生長(zhǎng)試驗(yàn)

將消毒后3 cm左右的莖段濾凈后接種至基本培養(yǎng)基MS中培養(yǎng)，如圖1所示。試驗(yàn)品為3個(gè)品種各20個(gè)莖段，試驗(yàn)過程中并未發(fā)現(xiàn)異常，消毒過的腋芽均正常生長(zhǎng)，因此腋芽生長(zhǎng)選用MS培養(yǎng)基。

2.2 愈傷組織和芽的誘導(dǎo)

將高約1.5 cm的腋芽為1個(gè)增殖單位，接種至誘導(dǎo)愈傷組織和芽培養(yǎng)基中。試驗(yàn)品為3個(gè)品種各15個(gè)增殖單位。

從表1可以看出，天目山鐵皮石斛和井岡山鐵皮石斛用MBA 1.5/0.3效果更好，出芽較多，無(wú)變異。MBA 2/0.1基部雖膨大明顯，但出現(xiàn)玻璃化情況不可逆轉(zhuǎn)，MBA 1.5/0.1和1/2 MBA 2.0雖無(wú)玻璃化情況，但出芽沒有MBA 1.5/0.3多，1/2 MBA 2.0出芽質(zhì)量不高?；羯矫柞褂肕BA 1.5/0.1效果最佳，出芽多、芽型正常，相較于鐵皮石斛而言，米斛更適合用激素稍低的培養(yǎng)基。

2.3 芽的增殖

將誘導(dǎo)出的芽團(tuán)轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，每4～5個(gè)芽組成一個(gè)團(tuán)塊，每30 d為一個(gè)續(xù)代，每次激素濃度視芽的情況降低或增加，保證芽的增殖率，維持較高的品質(zhì)。

從表2可以看出，天目山鐵皮石斛和井岡山鐵皮石斛情況一樣，用MBN 3/0.2效果最好，芽較多、質(zhì)量好，生長(zhǎng)明顯，苗高且粗壯，葉片顏色正常，增殖率高。MBN 4/0.2芽多，但后期會(huì)出現(xiàn)玻璃化，葉片發(fā)黃，可能是激素太高，1代或2代后轉(zhuǎn)用MBN 2/0.2葉片幾乎沒有發(fā)黃情況，株形較好，葉形正常。MBN 1/0.2和MBA 2/0.2雖葉片無(wú)發(fā)黃，苗粗壯，但芽稍少，增殖率不高?；羯矫柞肕BN 2/0.2效果最佳，芽多，增殖率高，苗粗壯株形好。MBN 4/0.2和MBN 3/0.2分別為玻璃化情況較多和葉片發(fā)黃較多。MBN 1/0.2和MBA 2/0.2芽稍少，增殖率低，長(zhǎng)高不明顯。

2.4 根的誘導(dǎo)

挑出培養(yǎng)基里粗壯的單株，放入生根培養(yǎng)基里，15 d后觀察，試驗(yàn)品為每個(gè)品種50個(gè)單株，如表3所示。生根培養(yǎng)基分別開展幾種對(duì)比試驗(yàn)，參照MN 0.2，梯度MNA 0.2/0.2、MNA 0.2/0.4、MNI 0.2/0.2、MNI 0.2/0.4、1/2 MNA 0.2/0.2、1/2 MNI 0.2/0.2。綜合分析，MNA 0.2/0.2生根較快較好，13 d左右萌動(dòng)，35 d左右生根，生根率達(dá)到100%，根粗壯呈條狀，移栽成活率高。用1/2MS生根期稍長(zhǎng)且相對(duì)比較瘦弱，有個(gè)別根排列不齊，不利于移栽成活。

2.5 培養(yǎng)條件

試驗(yàn)過程中觀察生長(zhǎng)情況，擴(kuò)繁培養(yǎng)條件為燈光照射8～10 h/d，溫度為15～20 ℃，如圖2所示。

2.6 種植方法

2.6.1 安裝樹體噴淋系統(tǒng)

對(duì)選擇好的部分大樹安裝樹體噴淋系統(tǒng)，具體方法是用1根水管從樹下沿樹干引至約5.5 m高處，水管在高處繞樹1圈并固定好，其下開孔，水管外用遮陽(yáng)網(wǎng)繞樹1圈綁好，確保緩沖水流形成噴淋效果，既不沖散移植苗，又能灌溉移植苗。

2.6.2 移栽樹體

對(duì)需進(jìn)行仿野生培育移植的樹建立噴淋系統(tǒng)，選用2～3年組培苗，朝樹下倒著繞樹1圈，用細(xì)麻繩綁住根部固定住，苗倒著種植方便固定根部且淋水時(shí)苗不易被沖散。麻布片不可綁太厚，綁1圈即可，否則遇到連續(xù)降水天氣容易積水太多，導(dǎo)致爛根倒苗。之后用能儲(chǔ)水、可降解的麻袋片裹住根部綁牢，無(wú)需加其他基質(zhì)。

移栽前用0.05%甲基硫菌靈噴米斛苗和麻片。每圈移植苗數(shù)量視樹的大小而定，與圈苗團(tuán)間隔約5 cm左右，每圈苗間隔25～30 cm。從采摘難度、成本及安全考慮，最低苗圈離地約2 m，最高苗圈離地約5 m，每棵樹視實(shí)際樹況可綁苗4～8圈，如圖3所示。

2.7 移栽管護(hù)

石斛喜潤(rùn)而畏濕、喜干而畏燥，春秋濕養(yǎng)、夏冬干養(yǎng)，壯苗濕養(yǎng)、弱苗干養(yǎng)，北方濕養(yǎng)、南方干養(yǎng)，通風(fēng)濕養(yǎng)、不通風(fēng)干養(yǎng)。鐵皮石斛仿野生種植一般選擇春季或秋季移栽，此時(shí)溫度為13～24 ℃，適合鐵皮石斛生長(zhǎng)[3]。種植石斛后要充分噴淋，將濕度控制在70%左右，特別注意夏季高溫天氣需保持水分充足，應(yīng)早晚澆水多次，充分淋透，若處于通風(fēng)條件不好的地區(qū)，石斛苗寧干勿濕。

種植人員應(yīng)選擇郁閉度在70%以上、林地小環(huán)境濕度為80%的林地進(jìn)行仿生種植。不可選擇陽(yáng)光暴曬下的樹木，否則易造成石斛苗因干旱脫水而死亡，也不可選擇有病蟲害，尤其是白蟻為害的林地和林木，白蟻會(huì)啃食包裹石斛苗根部的麻布片、麻繩和石斛苗，導(dǎo)致未附著樹皮內(nèi)的石斛苗嚴(yán)重脫落或死亡。

3 結(jié)論與討論

3種石斛快繁培養(yǎng)基的選擇方式如下。腋芽生長(zhǎng)可用MS基本培養(yǎng)基，誘導(dǎo)愈傷組織天目山鐵皮石斛和井岡山鐵皮石斛用MBA 1.5/0.3較好，霍山米斛用MBA 1.5/0.1較好；擴(kuò)繁天目山鐵皮石斛和井岡山鐵皮石斛用MBN 3/0.2較好，霍山米斛用MBA 2/0.2較好，轉(zhuǎn)代增殖系數(shù)達(dá)5～7倍；生根3種石斛用MNA 0.2/0.2較好，生根時(shí)間較短，生根率達(dá)95%以上。

仿生種植石斛的噴淋設(shè)施應(yīng)力求完善，一是可保證石斛苗仿生種植的成活率，二是可降低人工淋水成本。仿生種植時(shí)石斛苗根部的麻布片不可裹太厚，1層即可，既可固定好石斛苗，又不會(huì)在梅雨季節(jié)造成積水。如裹太厚梅雨季節(jié)會(huì)造成根部積水，導(dǎo)致石斛苗爛根死亡。仿生種植的林地和林木選擇至關(guān)重要，要充分考慮林地朝向、林地郁閉度、林地小環(huán)境濕度、林地和林木病蟲害情況等，提升石斛仿生種植成活率，增加可采收年份，提高石斛鮮條、石斛鮮花的產(chǎn)量。仿生種植的林木盡量選擇樹皮較厚的品種，以濕地松最佳，其次為樟樹。石斛苗的新根會(huì)逐漸長(zhǎng)入樹皮內(nèi)吸收水分并固定在樹上生長(zhǎng)，之后可形成野生模式，不用人工管護(hù)。

（編輯：王雨荷）

參考文獻(xiàn)：

［1］張丹丹.淺談野生石斛和種植石斛的區(qū)別［J］.光明中醫(yī)，2020，35（2）：277-279.

［2］歐成軍.石斛屬植物仿野生種植技術(shù)［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2020（14）：118-121.

［3］舒杰.鐵皮石斛的應(yīng)用價(jià)值及林下仿野生栽培技術(shù)［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2021（24）：61-69.