不同離心條件制備改良富血小板纖維蛋白在治療重度慢性牙周炎作用比較

伍國生 饒堅 尹文華 劉鳳琳 冷培

【摘 要】目的 比較不同離心條件下制備改良富血小板纖維蛋白（PRF）在治療重度慢性牙周炎中的作用。方法 選取2016年9月-2021年9月于我院行翻瓣術的66例重度慢性牙周炎患者為研究對象，根據(jù)PRF制備條件分為低速制備組（n=34）和高速制備組（n=32）。低速制備組采用1500 r/min離心14 min制備改良PRF（A-PRF），高速制備組采用3000 r/min離心5 min制備改良PRF（L-PRF），比較兩組離心后血清生長因子水平、臨床附著喪失（CAL）及牙周探診深度（PD）。結果 低速制備組離心后血小板源性生長因子-BB（PDGF-BB）、血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）及轉化生長因子-β（TGF-β）水平均高于高速制備組（P<0.05）；兩組術后3個月CLA和PD水平均低于術前，且低速制備組低于高速制備組（P<0.05）。結論 降低相對離心力并延長制備時間得到的A-PRF在生長因子釋放性能、促進成纖維細胞增殖和遷移的作用優(yōu)于L-PRF，且在促進牙周組織再生和修復中的應用價值較高。

【關鍵詞】離心條件；富血小板纖維蛋白；重度慢性牙周炎；生長因子

中圖分類號：R781.4+2 文獻標識碼：A 文章編號：1004-4949（2023）08-0153-04

Comparison of the Effects of Modified Platelet-rich Fibrin Prepared Under Different Centrifugal Conditions in the Treatment of Severe Chronic Periodontitis

WU Guo-sheng1， RAO Jian2， YIN Wen-hua3， LIU Feng-lin4， LENG Pei5

（Department of Laboratory Medicine1， Department of Stomatology2， Department of Neurosurgery3， Department of Joint Surgery4， Department of Cardiovascular Medicine5， Ningdu County People’s Hospital， Ningdu 342800， Jiangxi， China）

【Abstract】Objective To compare the effects of modified platelet-rich fibrin （PRF） prepared under different centrifugation conditions in the treatment of severe chronic periodontitis. Methods Sixty-six patients with severe chronic periodontitis who underwent flap surgery in our hospital from September 2016 to September 2021 were selected as subjects. According to the preparation conditions of PRF， they were divided into low-speed preparation group （n=34） and high-speed preparation group（n=32）. The modified PRF （A-PRF） was prepared by centrifugation at 1500 r/min for 14 min in the low-speed preparation group， and the modified PRF （L-PRF） was prepared by centrifugation at 3000 r/min for 5 min in the high-speed preparation group. The serum growth factor level， clinical attachment loss （CAL） and periodontal probing depth （ PD） were compared between the two groups after centrifugation. Results The levels of platelet-derived growth factor-BB （PDGF-BB）， vascular endothelial growth factor （VEGF） and transforming growth factor-β （TGF-β） in the low-speed preparation group were higher than those in the highspeed preparation group （P<0.05）. The levels of CLA and PD in the two groups at 3 months after operation were lower than those before operation， and those in the low-speed preparation group were lower than those in the high-speed preparation group （P<0.05）. Conclusion The A-PRF obtained by reducing the relative centrifugal force and prolonging the preparation time is superior to L-PRF in terms of growth factor release performance， fibroblast proliferation and migration， and has high application value in promoting periodontal tissue regeneration and repair.

【Key words】Centrifugal conditions； Platelet-rich fibrin； Severe chronic periodontitis； Growth factor

慢性牙周炎（chronic periodontitis）屬于口腔中細菌微生物及細菌代謝所導致的牙周軟組織、牙槽骨及牙周膜組織發(fā)生慢性可進展性的一種感染性疾病[1]，臨床中主要表現(xiàn)為口腔內(nèi)有異味、牙周袋內(nèi)出現(xiàn)溢膿現(xiàn)象，以及牙齦發(fā)生不同程度的出血等，嚴重情況下甚至會導致牙齒脫落[2]，給患者口腔健康帶來嚴重威脅，導致患者的生活質量降低[3]。傳統(tǒng)治療雖然能夠對其炎癥進行控制，降低病情的發(fā)展速度，但若想牙周組織繼續(xù)獲得再生比較困難，需要使用植骨術、組織再生術以及生長因子等聯(lián)合治療方案。富血小板纖維蛋白（platelet-rich fibrin，PRF）是繼富血小板血漿的基礎上衍化而來的一種自體生物材料，因其具有大量的纖維蛋白基質結構，能夠使其在引導性組織再生及骨再生的過程中發(fā)揮出巨大作用[4]。但有研究顯示[5]，在不同的離心條件下，會對得到的PRF的生物學特性不同，對牙周組織獲得不同的再生效果?；诖?，本研究結合2016年9月-2021年9月于我院行翻瓣術的66例重度慢性牙周炎患者臨床資料，比較不同離心條件下制備改良PRF在治療重度慢性牙周炎中的作用，以期為臨床治療牙周炎制備優(yōu)質PRF提供參考，現(xiàn)報道如下。

1.1 一般資料 選取2016年9月-2021年9月于寧都縣人民醫(yī)院行翻瓣術的66例重度慢性牙周炎患者為研究對象。納入標準：①均符合重度牙周炎的診斷標準；②臨床資料完整；③在行翻瓣術前均完成基礎性檢查及治療；④無系統(tǒng)性疾病。排除標準：①伴有凝血功能障礙者；②伴有吸煙、糖尿病及使用對血小板損傷的藥物者；③伴有言語功能障礙者；④伴有精神類或認知功能障礙者；⑤中途退出研究者。根據(jù)PRF制備條件分為低速制備組（n=34）和高速制備組（n=32）。低速制備組男18例，女16例；年齡45～68歲，平均年齡（54.25±3.16）歲。高速制備組男19例，女13例；年齡43～70歲，平均年齡（54.69±3.23）歲。所有患者患牙均屬于第一、二磨牙，且牙槽骨完全吸收根尖至1/3處，同時根分叉病變程度為Ⅱ度。兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），研究可比。本研究所有患者知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1離心方法 采集兩組患者術前及術后3個月清晨空腹靜脈血各10 ml，將其注入離心管中，使用TD5型自動平衡離心機（鹽城市凱特實驗儀器有限公司，蘇鹽械備20150042，型號：TD5A），低速制備組采用1500 r/min離心14 min；高速制備組采用3 000 r/min離心10 min。離心完成后靜置5 min備用，位于頂端少細胞將夜和低端紅細胞層之間的纖維蛋白凝塊為PRF。利用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測兩種離心后血清生長因子含量。具體步驟：①包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至最適濃度（1～10 μg/ml），每凹孔加0.3 ml，4 ℃過夜，或37 ℃水浴3 h，貯存冰箱（中科美菱，皖食藥監(jiān)械生產(chǎn)許20150005號，型號：DW-FL439）；②洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批準文號：KL0364202718，規(guī)格：96 T）洗3次，5 min/次；③每凹孔加入0.2 ml用稀釋緩沖液稀釋的含抗原的被檢標本，37 ℃作用1～2 h；④顯色：加入TMB顯色液（武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批準文號：KL0364202718，規(guī)格：96T），室溫下孵育15～30 min，直至形成典型的藍色反應物；⑤停止反應：加入停止液（2 M的硫酸酸液）（武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批準文號：KL0364202718，規(guī)格：96 T）停止反應，顏色由藍色轉為黃色；⑥檢測：用洗板機（美國biotek，型號：ELX-800，序列號：SN207593）對各孔起反應的底物進行檢測，得到OD值，計算樣品中長生因子的含量。

1.2.2手術方法 所有患者在常規(guī)局麻下進行翻瓣術，平整去除其炎性肉芽組織以及齦下牙石。低速制備組與高速制備組均將自體PRF從試管直接取出然后立即植入在患牙缺損處，最后用4-0特氟龍縫合線將組織瓣嚴密縫合。術后連續(xù)10 d使用阿莫西林膠囊（華北制藥有限公司，國藥準字H13020726，規(guī)格：0.25 g）500 mg口服，3次/d，并使用含0.12%氯已定葡糖酸鹽[朗力生物醫(yī)藥（武漢）有限公司，（鄂）衛(wèi)消證字（2018）第0004號，規(guī)格：250 ml]進行漱口，防止口腔內(nèi)部出現(xiàn)感染，術后2周拆線，所有患者接受隨訪3個月。

1.3 觀察指標 比較兩組離心后血清生長因子水平、臨床附著喪失（CAL）及牙周探診深度（PD）。①血清生長因子水平：分別于術前及術后3個月檢測患者的血清血小板源性生長因子-BB（platelet-derived growthfactor，PDGF-BB）、血管內(nèi)皮細胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及轉化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）含量；②CAL與PD水平：分別于術前及術后3個月測量CAL及PD變化，其中CAL指牙周袋底至釉牙骨質界之間的距離，PD指牙周袋底至牙齦緣的距離；所有檢測均由同一位資深口腔科專家進行。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 24.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗；計量資料以（x-±s）表示，行t檢驗；P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2.1 兩組離心后血清生長因子水平比較 低速制備組離心后PDGF-BB、VEGF及TGF-β水平均高于高速制備組（P<0.05），見表1。

2.2 兩組CLA、PD水平比較 兩組術后3個月CLA、PD水平均低于術前，且低速準備組低于高速制備組（P<0.05），見表2。

臨床中慢性牙周炎的發(fā)生主要是因為遭受口腔細菌病原體入侵導致[6]。和第一代的富血小板血漿相比，PRF不含有抗凝劑，能夠穩(wěn)定且持續(xù)性釋放細胞因子，同時對細胞遷移及分化起到調(diào)節(jié)作用，進而促進牙周區(qū)域血管及其組織再生功能[7]。研究顯示[8]，PRF膜可以提供含有生長因子、活性細胞以及具有三維支架結構的纖維蛋白網(wǎng)，因此能夠有效且快速對損傷處組織起到重新修復的效果。PRF在激活狀態(tài)下會釋放出多種細胞因子，例如生長因子β、腫瘤壞死因子α、白細胞介素6以及血管內(nèi)生長因子等，而部分因子在骨再生的過程當中起到非常重要的潛在作用，例如抑制疼痛、抗感染以及促進創(chuàng)傷處愈合等[9]。也有研究表明[10]，PRF不僅對口腔黏膜病灶區(qū)切除后具有一定的促進傷口愈合的效果，對退縮的牙齦還具有一定的重建作用。由此可見，PRF在骨再生、傷口預后以及抑菌上均具有一定的積極作用。但另有研究報道[11]，在離心過程中，其離心速度和離心時間對PRF的生物學結構造成一定的影響，致使PRF在組織學的臨床體征上也有著一定影響。因此，探究PRF內(nèi)部纖維蛋白網(wǎng)絡疏松且血小板活化程度更高的制備方式對促進重度慢性牙周炎翻瓣術后恢復具有重要意義。生長因子是血小板中活性物質的主要組成部分，其中PDGF-BB在局部對基質干細胞、成纖維細胞有趨化作用，與TGF-β有良好的協(xié)同作用，可刺激成纖維細胞的分化、膠原蛋白合成以及血管再生；而VEGF可刺激血管內(nèi)皮再生，為成纖維細胞的增殖及膠原的合成提供充足的營養(yǎng)物質，促進肉芽組織的生長；TGF-β可加速內(nèi)皮細胞、表皮細胞增殖，調(diào)控胞外基質合成，通過對中性粒細胞和單核細胞的趨化作用介導局部的炎癥反應[12，13]。

本研究結果顯示，低速制備組離心后PDGF-BB、VEGF及TGF-β水平均高于高速制備組（P<0.05）；低速制備組術后3個月CLA和PD水平均低于高速制備組（P<0.05），說明在對血液標本進行離心時，離心力越大、離心時間越短，對血小板成分的破壞及白細胞成分丟失更明顯，離心方式的選擇對PRF內(nèi)部細胞、纖維蛋白結構以及生長因子等均帶來巨大的影響[14]。分析原因可能是A-PRF能夠對生長因子的釋放起到積極作用，隨著離心力的減少，PRF內(nèi)部的白細胞以及各類細胞因子數(shù)量被保留，致使在纖維蛋白的凝塊中能夠更好的分布，從而促進牙周組織的再生和修復[15，16]。

綜上所述，PRF的生物學結構會受到離心力及離心時長的影響，對慢性牙周炎患者組織愈合也會造成一定的影響，降低相對離心力延長制備時間得到的A-PRF在生長因子釋放性能、促進成纖維細胞增殖和遷移的作用優(yōu)于L-PRF，A-PRF在促進牙周組織再生和修復中的應用價值較高。

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編輯 扶田