楊青青　楊峰　趙永強(qiáng)　陸信娟　劉燦玉　葛潔　張碧薇　樊繼德

摘要： 熱激轉(zhuǎn)錄因子（HSF）基因是植物熱脅迫響應(yīng)的重要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基因，在植物脅迫應(yīng)答和其他抗逆反應(yīng)過程中起著關(guān)鍵作用。為研究大蒜熱激反應(yīng)的分子機(jī)制，本研究基于大蒜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，以徐蒜6號(hào)為試驗(yàn)材料，采用同源克隆方法獲得編碼HSF的AsHSFB1基因。序列分析結(jié)果顯示，AsHSFB1含有882 bp的開放閱讀框，編碼293個(gè)氨基酸，其蛋白質(zhì)含有熱激轉(zhuǎn)錄因子的特征結(jié)構(gòu)域。在進(jìn)化關(guān)系上，AsHSFB1與擬南芥AT4G11660（AtHSFB2B）同源性最高。亞細(xì)胞定位結(jié)果表明，AsHSFB1蛋白主要定位在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)上。本研究采用同源重組技術(shù)成功構(gòu)建pCAMBIA1305-AsHSFB1過表達(dá)載體，為進(jìn)一步研究該轉(zhuǎn)錄因子基因的功能，培育耐熱大蒜品種奠定基礎(chǔ)。RT-PCR分析結(jié)果表明，不同大蒜品種中，AsHSFB1基因在葉片中相對(duì)表達(dá)水平均最高，具有組織表達(dá)特異性；38 ℃高溫脅迫處理下，徐蒜6號(hào)中的AsHSFB1基因相對(duì)表達(dá)水平在24 h時(shí)明顯上調(diào)；4 ℃低溫脅迫下，徐蒜815和徐蒜6號(hào)中AsHSFB1基因相對(duì)表達(dá)水平的變化趨勢相似，均先上升后下降，在處理4 h時(shí)相對(duì)表達(dá)水平達(dá)到峰值。

關(guān)鍵詞： 大蒜；AsHSFB1基因；同源重組技術(shù)；亞細(xì)胞定位；相對(duì)表達(dá)水平

中圖分類號(hào)： S633.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1000-4440（2023）01-0169-09

Cloning， subcellular localization and expression analysis of garlic heat shock transcription factor gene AsHSFB1

YANG Qing-qing， YANG Feng， ZHAO Yong-qiang， LU Xin-juan， LIU Can-yu， GE Jie， ZHANG Bi-wei， FAN Ji-de

（Xuzhou Institute of Agricultural Sciences in Jiangsu Xuhuai Area， Xuzhou 221121， China）

Abstract：Heat shock transcription factor （HSF） is an important transcription regulation gene and plays a key role in plant stress response and other stress tolerance processes. In order to investigate the molecular mechanism of heat stress response in garlic， based on the transcriptome data of garlic， the experiment was conducted to obtain AsHSFB1 gene. This gene encoding HSF transcription factor was isolated by homologous cloning of Xusuan NO.6. Sequence analysis indicated that open reading frame （ORF） length of AsHSFB1 was 882 bp， encoding 293 amino acids. Its protein contained characteristic domain of heat shock transcription factor. Phylogenetic tree analysis result showed that AsHSFB1 was close to AT4G11660 （AtHSFB2B）. Subcellular localization results showed that AsHSFB1 was mainly localized in the nucleus and cytoplasm. In this study， overexpression vector pCAMBIA1305-AsHSFB1 was successfully constructed by homologous recombination technology， which provided a theoretical basis for the subsequent study on the function of AsHSFB1 gene and the cultivation of heat-resistant garlic varieties. RT-PCR analysis showed that the relative expression level of AsHSFB1 gene in garlic leaves was highest， indicating that it had tissue specificity. Compared with the control， the relative expression level of AsHSFB1 gene in Xusuan No.6 increased significantly at 24 h under 38 ℃ high temperature stress. Under 4 ℃ low temperature stress， the relative expression level of AsHSFB1 gene in Xusuan No.6 and Xusuan 815 showed a similar trend， which increased first and then decreased and reached the peak at 4 h.

Key words： garlic;AsHSFB1 gene;homologous recombination technology;subcellular localization;relative expression level

隨著全球氣候的變化，熱脅迫已成為限制植物代謝和作物生產(chǎn)力的主要環(huán)境脅迫之一^[1-2]。熱激反應(yīng)是真核生物響應(yīng)熱脅迫廣泛存在的保守進(jìn)化反應(yīng)，通常表現(xiàn)為停止正常的蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞活動(dòng)以實(shí)現(xiàn)熱激蛋白（HSP）的表達(dá)^[3-4]。熱激轉(zhuǎn)錄因子（HSF）可以通過直接或間接調(diào)控一些應(yīng)答基因的表達(dá)來調(diào)節(jié)植物對(duì)高溫脅迫的響應(yīng)^[5-6]。

HSF基因在植物中普遍存在，其數(shù)量、結(jié)構(gòu)和調(diào)控過程遠(yuǎn)比動(dòng)物體內(nèi)的HSF復(fù)雜。目前根據(jù)序列相似性和寡聚化結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)特征，可以將植物HSF基因家族成員劃分Class A、Class B和Class C 3類^[7]。HSF結(jié)構(gòu)一般由識(shí)別并結(jié)合熱激元件（HSE）的N端DNA結(jié)合域、調(diào)控HSP轉(zhuǎn)錄的寡聚化結(jié)構(gòu)域、核定位信號(hào)和核輸出信號(hào)組成^[8]。Scharf等^[9]首次在番茄中克隆得到HSF基因。Mishra等^[10]對(duì)番茄植株進(jìn)行高溫處理，發(fā)現(xiàn)SlHsfA1基因的表達(dá)量顯著增加。在擬南芥HSFA2基因的熱脅迫研究中發(fā)現(xiàn)，該基因在高溫脅迫下大量表達(dá)，可能主導(dǎo)了擬南芥的抗高溫脅迫響應(yīng)^[11]。Li等^[12]發(fā)現(xiàn)，玉米ZmHsf06基因可能在提高過表達(dá)擬南芥植株的耐高溫、抗旱能力中發(fā)揮主要作用。在42 ℃高溫處理下，不同時(shí)間段百合LlHSF1基因均有響應(yīng)，證實(shí)該基因與百合的耐熱性相關(guān)^[13]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，HSF轉(zhuǎn)錄因子還參與調(diào)控植物配子形成和根發(fā)育等過程^[14]。例如，在擬南芥和向日葵中，發(fā)現(xiàn)HsfA9與胚胎發(fā)育、種子形成有關(guān)^[15-16]。因而挖掘植物HSF相關(guān)基因，對(duì)植物耐熱性分子機(jī)制與育種途徑、耐熱性生理基礎(chǔ)等研究具有重要意義。

大蒜（Allium sativum L.）是具有醫(yī)藥作用的蔬菜作物，在世界范圍內(nèi)廣泛種植^[17-18]。大蒜植株的耐寒能力較強(qiáng)，但不耐高溫，是低溫長日照作物，因此在栽培過程中，高溫天氣會(huì)嚴(yán)重影響大蒜的產(chǎn)量和品質(zhì)^[19-20]。但目前關(guān)于大蒜中AsHSFB1的表達(dá)是否響應(yīng)高溫、低溫脅迫的研究卻鮮有報(bào)道。本研究擬對(duì)大蒜中AsHSFB1基因進(jìn)行克隆，并進(jìn)行生物信息學(xué)分析，研究其在特定溫度下的表達(dá)特性，以期為進(jìn)一步探索其功能提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 植物材料及其試驗(yàn)設(shè)計(jì)

以徐蒜6號(hào)、徐蒜815（江蘇徐淮地區(qū)徐州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所園藝研究室保存）為試驗(yàn)材料，選取已經(jīng)解除休眠、飽滿、無傷的鱗莖，播種于基質(zhì)中，14 d之后將大蒜幼苗移栽到添加霍格蘭氏（Hoagland）營養(yǎng)液的水培箱中。此外，選擇生長一致、健壯的植株進(jìn)行高溫（38 ℃）、低溫（4 ℃）脅迫處理?？諝庀鄬?duì)濕度設(shè)置為30%，每個(gè)處理重復(fù)3次。在處理0 h、4 h、8 h、24 h和48 h時(shí)取大蒜植株上部葉片，用液氮冷凍，并在-80 ℃條件下儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 RNA提取和cDNA反轉(zhuǎn)錄

利用RNA提取試劑盒提取大蒜的RNA，并使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒ReverTra Ace qPCR RT Master Mix將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，并將該cDNA用去離子水稀釋15倍用于基因克隆。

1.3 AsHSFB1基因的擴(kuò)增

根據(jù)課題組建立的大蒜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫，檢索得到大蒜AsHSFB1基因序列。使用軟件Primer Premier 6設(shè)計(jì)AsHSFB1基因全長引物，根據(jù)同源重組引物設(shè)計(jì)原則，選擇Bam H Ⅰ、Hind III 2個(gè)限制性內(nèi)切酶，設(shè)計(jì)克隆正向引物：5′-CGGGATCCCGATGACGCCAGCGGTCGAT-3′）和反向引物5′-CGAAGCTTCGTCACATTGCACTATGCTTTCTCCC-3′。程序設(shè)置為：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，54 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，共34個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min?；厥誔CR目的條帶。本研究所有引物合成、測序工作均由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

1.4 利用同源重組法構(gòu)建大蒜AsHSFB1基因表達(dá)載體

利用Bam H Ⅰ、Hind III 2個(gè)內(nèi)切酶對(duì)pCAMBIA1305載體進(jìn)行雙酶切，獲得線性化的載體，將含有酶切位點(diǎn)的目的片段重組到pCAMBIA1305空載體上，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α，篩選陽性克隆測序。

1.5 大蒜AsHSFB1基因的生物信息學(xué)分析

不同植物的HSFB1氨基酸序列比對(duì)利用DNAMAN 6.0軟件完成；運(yùn)用ExPASy蛋白質(zhì)組分析工具中的Prot-Param（http：//www.expasy.ch/tools/protparam.html）分析蛋白質(zhì)的基本性質(zhì)；利用CDD（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/cdd/）預(yù)測大蒜AsHSFB1氨基酸保守域；用SOPMA軟件對(duì)大蒜AsHSFB1蛋白進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測及分析；利用MEGA 5.0軟件以Neighbor-Joining算法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹^[21]；運(yùn)用plantCARE在線分析工具分析AsHSFB1啟動(dòng)子。

1.6 AsHSFB1蛋白的亞細(xì)胞定位

利用基因和載體的序列設(shè)計(jì)、重組新的引物，對(duì)去掉終止密碼子的AsHSFB1基因進(jìn)行擴(kuò)增。選取Bsa Ⅰ/Eco31 Ⅰ酶切位點(diǎn)，設(shè)計(jì)特異性引物（正向引物5′-CAGTCGTCTCACAACATGACGCCAGCGGTCGATTCAC-3′，反向引物5′-CAGTCGTCTCATACACATTGCACTATGCTTTCTCCCCAACGG-3′）來擴(kuò)增AsHSFB1基因，切膠回收PCR產(chǎn)物檢測無誤后與線性化載體pBWA（V）HS-GFP進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α，挑取陽性單克隆進(jìn)行測序驗(yàn)證后，即獲得重組質(zhì)粒pBWA（V）HS-AsHSFB1-GFP，利用電擊法將其重組融合表達(dá)載體pBWA（V）HS-AsHSFB1-GFP導(dǎo)入農(nóng)桿菌GV3101。通過懸浮農(nóng)桿菌、收集菌體，再經(jīng)過重懸后，用1 ml注射器分別將含有綠色熒光蛋白（GFP）和pBWA（V）HS-AsHSFB1-GFP的緩沖液注射到30 d左右苗齡煙草的葉片背面，將侵染后的煙草弱光培養(yǎng)48 h后使用激光共聚焦顯微鏡觀察亞細(xì)胞定位情況。

1.7 RT-qPCR分析

使用Primer Premier 6軟件設(shè)計(jì)AsHSFB1基因的RT-qPCR定量引物（正向引物：5′-CAGCAGCAGTGACAGTAG-3′，反向引物：5′-CTTGGACATAAGCGAGTAGA-3′）。選擇SNAD基因作為大蒜內(nèi)參基因（BD-SAND-F：5′-GCGTCAACGAATGTTCCAATTACCA-3′，BD-SAND-R：5′-TCTCTTCAGTCTCAACTTCATCAGCAT-3′）。通過IQTM5 Real-time PCR System完成RT-qPCR檢測?；蛳鄬?duì)表達(dá)水平的計(jì)算采用2^-△△Ct法^[22]。

2 結(jié)果與分析

2.1 大蒜AsHSFB1基因的克隆及其編碼的蛋白質(zhì)理化性質(zhì)的分析

以徐蒜6號(hào)未經(jīng)脅迫處理葉片的cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增，得到1個(gè)長約800 bp的目的片段（圖1）。測序結(jié)果顯示AsHSFB1基因含有1個(gè)長度為882 bp的開放閱讀框，編碼293個(gè)氨基酸。NCBI BlastP結(jié)果顯示，AsHSFB1屬于HSF家族成員。

通過ExPaSy-ProtParam預(yù)測顯示AsHSFB1蛋白的分子式為C₁363H₂170N₃88O₄47S₁1，相對(duì)分子質(zhì)量為3.149×104，理論等電點(diǎn)（pI）為6.76，帶正電荷的殘基總數(shù)[精氨酸（Arg）+賴氨酸（Lys）]為33個(gè)，帶負(fù)電荷的殘基總數(shù)[天冬氨酸（Asp）+谷氨酸（Glu）]為33個(gè)；不穩(wěn)定系數(shù)為53.37，說明AsHSFB1蛋白屬于不穩(wěn)定蛋白質(zhì)；AsHSFB1蛋白富含絲氨酸（Ser，14.7%）、甘氨酸（Gly，8.2%）、亮氨酸（Leu，7.5%）（圖2）。AsHSFB1蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要由螺旋（33.11%）、延伸結(jié)構(gòu)（12.36%）、轉(zhuǎn)角（4.1%）和無規(guī)則卷曲（50.17%）構(gòu)成。

2.2 大蒜AsHSFB1基因相關(guān)生物信息學(xué)分析

2.2.1 保守域結(jié)構(gòu)預(yù)測 通過NCBI CDS對(duì)徐蒜6號(hào)中AsHSFB1蛋白的保守域進(jìn)行預(yù)測，結(jié)果（圖3）表明，AsHSFB1的第14位至第106位氨基酸間含有HSF-DNA結(jié)構(gòu)域，屬于HSF家族。

2.2.2 同源性比對(duì)分析 將大蒜AsHSFB1與NCBI數(shù)據(jù)庫中水仙（Narcissus tazetta，登錄號(hào)：QBC36000.1）、薯蕷（Dioscorea cayenensis，登錄號(hào)：QBC36000.1）、楊梅（Morella rubra，登錄號(hào)：KAB1210726.1）、金杜鵑（Rhodamnia argentea，登錄號(hào)：XP_030536717.1）和獼猴桃（Actinidia chinensis，登錄號(hào)：PSR93425.1）5種植物的HSFB1氨基酸序列通過DNAMAN 6.0進(jìn)行序列比對(duì)，結(jié)果（圖4）表明，大蒜AsHSFB1氨基酸序列與水仙、金杜鵑的HSFB1氨基酸序列的一致性較高，說明HSFB1具有較高的保守性。

2.2.3 親水性/疏水性分析 對(duì)大蒜的AsHSFB1蛋白進(jìn)行疏水性/親水性預(yù)測，結(jié)果（圖5）表明，該蛋白質(zhì)的親水性平均系數(shù)（GRAVY）為-0.502，具有較強(qiáng)的親水性，屬于親水性蛋白質(zhì)。

2.2.4 AsHSFB1進(jìn)化樹的分析 通過MEGA 5.0軟件對(duì)大蒜AsHSFB1與擬南芥HSF家族進(jìn)行同源性分析。圖6顯示，AsHSFB1與AT4G11660、AT5G62020.1、AT2G41690進(jìn)化距離最近，且屬于同一分支。AsHSFB1與AT4G11660（AtHSFB2B）的同源性最高，其次與AT5G62020.1（AtHSFB2A）類熱激轉(zhuǎn)錄因子的同源性也比較高，因此，大蒜AsHSFB1屬于HSFB亞家族成員。

2.2.5 AsHSFB1啟動(dòng)子的生物信息學(xué)分析 利用PlantCARE啟動(dòng)子預(yù)測元件分析AsHSFB1啟動(dòng)子的順式調(diào)節(jié)元件，并列出11種常見的元件（圖7、表1），這些元件包括厭氧誘導(dǎo)必需的順式作用調(diào)節(jié)元件ARE，赤霉素響應(yīng)元件GARE-motif，參與MeJA反應(yīng)的順式調(diào)控元件CGTCA-motif，參與脫落酸反應(yīng)的順式作用元件ABRE，核心啟動(dòng)子元件TATA-box，蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)HD-Zip3，啟動(dòng)子增強(qiáng)的順式調(diào)節(jié)元件CAAT-box以及4個(gè)光響應(yīng)元件（Box 4、G-Box、Gap-box和ACE）。

2.3 基于同源重組克隆技術(shù)構(gòu)建大蒜AsHSFB1表達(dá)載體

將重組得到pCAMBIA1305-AsHSFB1質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定，能夠切出大小為800 bp左右的片段（圖8），說明成功構(gòu)建了pCAMBIA1305-AsHSFB1植物過表達(dá)載體（圖9）。

不同顏色的片段是推定的元素序列。

2.4 大蒜AsHSFB1蛋白亞細(xì)胞定位

為明確AsHSFB1在細(xì)胞中的位置，以GFP空載體為陽性對(duì)照，在本氏煙草中進(jìn)行亞細(xì)胞定位測定。圖10顯示，細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)上均有熒光信號(hào)，說明AsHSFB1蛋白主要定位在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。

2.5 AsHSFB1基因在不同組織中、不同溫度處理下的表達(dá)

RT-qPCR分析結(jié)果（圖11）表明，徐蒜815、徐蒜6號(hào)AsHSFB1基因在葉片中的相對(duì)表達(dá)水平均表現(xiàn)為顯著高于其在根和鱗莖中的相對(duì)表達(dá)水平，而根和鱗莖間AsHSFB1基因的相對(duì)表達(dá)水平差異不顯著。

圖12顯示，38 ℃高溫處理下，徐蒜815中AsHSFB1相對(duì)表達(dá)水平在高溫處理4 h、24 h時(shí)與0 h（對(duì)照）相比顯著升高，在處理24 h時(shí)達(dá)到峰值，是對(duì)照的12.48倍；徐蒜6號(hào)中AsHSFB1相對(duì)表達(dá)水平在高溫處理24 h時(shí)達(dá)到最高，是對(duì)照的17.82倍。4 ℃低溫處理下，隨著處理時(shí)間的增長，徐蒜815和徐蒜6號(hào)中AsHSFB1基因的相對(duì)表達(dá)水平均呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢，并且均在處理4 h和48 h分別達(dá)到最高和最低。

3 討論

在熱激反應(yīng)中HSF作為關(guān)鍵調(diào)控因子，主要通過調(diào)控下游熱激蛋白基因以及耐熱性相關(guān)基因的表達(dá)來發(fā)揮抗逆作用^[23-24]。當(dāng)植物遭受高溫脅迫時(shí)，HSF不再以單體的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中，而是形成特殊結(jié)構(gòu)三聚體進(jìn)入細(xì)胞核，通過特異性識(shí)別啟動(dòng)子區(qū)的熱激元件來激活熱激基因轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而生成HSP來抵抗高溫脅迫^[25-26]。本研究從大蒜品種徐蒜6號(hào)中克隆得到AsHSFB1基因，保守結(jié)構(gòu)域分析結(jié)果表明AsHSFB1屬于HSF家族，具有典型的HSF-DNA結(jié)構(gòu)域。通過多重序列比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)大蒜AsHSFB1氨基酸序列與水仙、金杜鵑HSFB1氨基酸序列的一致性較高，表明HSFBL具有較高的保守性。大蒜AsHSFB1與擬南芥HSF家族成員構(gòu)建的進(jìn)化樹顯示，大蒜AsHSFB1屬于HSFB亞家族成員。RT-qPCR結(jié)果顯示：不同大蒜品種中AsHSFB1基因?qū)?8 ℃高溫和4 ℃低溫2種逆境環(huán)境均有響應(yīng)。對(duì)大蒜AsHSFB1基因表達(dá)特性進(jìn)行深入研究，發(fā)現(xiàn)不同品種大蒜AsHSFB1基因在不同組織（根、鱗莖、葉片）中均有表達(dá)且具有組織表達(dá)特異性，在葉片中的相對(duì)表達(dá)水平最高。

目前，關(guān)于植物中HSF家族B亞族的研究并不多。在番茄中，HSFB1作為協(xié)同激活因子，與HSFA家族成員共同參與對(duì)高溫脅迫的調(diào)節(jié)^[27]。擬南芥中過表達(dá)鷹嘴豆CarHSFB2基因增強(qiáng)了擬南芥的耐熱性^[28]。擬南芥中的HSFB2a、HSFB2b可以通過與HSFA1a、HSFA1b結(jié)合，從而提高擬南芥的耐熱性，屬于熱誘導(dǎo)型轉(zhuǎn)錄因子^[29]。由于大蒜AsHSFB1是HSFB亞家族成員，而B亞家族成員不含芳香族-疏水-酸性氨基酸尾巴（AHA）序列，因此大蒜AsHSFB1基因可能是通過與HSFA類基因的協(xié)同作用來增強(qiáng)植株的抗熱能力。在魔芋^[30]和香石竹^[31]中都成功克隆到HSFB1基因，發(fā)現(xiàn)魔芋AaHSFB1和香石竹DcHSFB1蛋白N端均有典型的DBD結(jié)構(gòu)域，這一點(diǎn)與大蒜AsHSFB1蛋白N端也具有DBD結(jié)構(gòu)域的結(jié)果一致，并且大蒜AsHSFB1與來源于其他物種的HSFB1均存在HSF保守結(jié)構(gòu)域。HSFB基因的表達(dá)存在物種、組織的差異，芹菜品種津南實(shí)芹中AgHSFB2基因在葉片和根中的相對(duì)表達(dá)水平明顯高于莖^[32]。魔芋AaHSFB1基因在球莖中的表達(dá)量低于根和葉片^[30]。在本研究中，大蒜AsHSFB1基因在葉片中的相對(duì)表達(dá)水平顯著高于根和鱗莖。

通過對(duì)大蒜幼苗進(jìn)行高溫、低溫逆境脅迫處理，在不同的處理時(shí)間（0 h、4 h、8 h、24 h和48 h）進(jìn)行取樣，可以較為深入地研究溫度對(duì)大蒜AsHSFB1表達(dá)模式的影響。結(jié)果表明：38 ℃高溫脅迫處理下，徐蒜815和徐蒜6號(hào)中AsHSFB1基因均能響應(yīng)熱脅迫，并且都在處理24 h時(shí)相對(duì)表達(dá)水平達(dá)到最高；4 ℃低溫處理時(shí)，在大蒜幼苗經(jīng)歷低溫的48 h之內(nèi)，徐蒜815和徐蒜6號(hào)中AsHSFB1基因相對(duì)表達(dá)水平總體呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢，均在低溫脅迫4 h時(shí)達(dá)到峰值，隨后開始下降。AsHSFB1基因在相同溫度處理下表現(xiàn)出品種的差異，38 ℃高溫處理下，徐蒜6號(hào)中AsHSFB1基因的相對(duì)表達(dá)水平總體高于徐蒜815。綜上所述，大蒜熱激轉(zhuǎn)錄因子基因AsHSFB1可能參與其對(duì)高溫、低溫逆境的響應(yīng)過程，但作用機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。

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（責(zé)任編輯：王 妮）