高睿 劉慧穎 王福鑫

【摘要】目的：建立氨磷汀中甲醇、乙醇有機(jī)殘留的檢測方法。方法：采用DB-1301毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.25μm），F(xiàn)ID檢測器，進(jìn)行測定。結(jié)果：甲醇和乙醇的線性范圍分別為2.994～598.9μg·mL1（r=0.9997）和4.997～999.4μg·mL-1（r= 0.9998）（n= 6）；平均回收率分別為101.66%（RSD：1.65%）、104.9%（RSD%：1.38%）（n=9）；檢測限（LOD）分別為：0.07486μg·mL-1，0.1249μg·mL-1。結(jié)論：采用此方法，可便捷、準(zhǔn)確的檢驗(yàn)氨磷汀中殘留溶劑的檢測。

【關(guān)鍵詞】氨磷??；頂空氣相色譜法；殘留溶劑

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.02.038

【基金項(xiàng)目】遼寧省自然基金資助計(jì)劃（2019-MS-185）。

Determination of Residual Organic Solvents in Amifostine by Headspace GC

GAO Rui，LIU Huiying，WANG Fuxin

（Liaoning Institute for Drug Control，Shenyang 110036，China）

Abstract：Objective：To establish a headspace gas chromatography method for the determination of residual solvents in Amifostine. Methods：A headspace gas chromatography was used with a capillary column DB-1301（30 m×0.32 mm，0.25μm），and with nitrogen as the carrier and an FID as the detector.Results：The linear range for methanol，ethanol was 2.994～598.9μg·mL-1（r= 0.9991），4.997～ 999.4μg·mL-1（r=0.9997）（n=7），respectively.The average recovery was 101.66%（RSD：1.65%）、104.9%（RSD%：1.38%）（n=9），and the LOD were 0.07486μg·mL-1，0.1249μg·mL-1，respectively.Conclusion：It is a simple，accurate method，can be used for the determination of various residual solvents inAmifostine.

Key words：Amifostine；headspace gas chromatography；residual solvents

氨磷汀是中國CFDA于2001年批準(zhǔn)的唯一泛細(xì)胞保護(hù)劑，用于減輕放化療因細(xì)胞毒藥物及輻射引起的毒副反應(yīng)。目前，國內(nèi)對氨磷汀質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求較低，對其在生產(chǎn)工藝過程中產(chǎn)生雜質(zhì)的限度控制不夠嚴(yán)密，且沒有對殘留溶劑進(jìn)行限度檢查，導(dǎo)致臨床用藥副作用比例較大，影響其臨床用藥安全。結(jié)合氨磷汀的相關(guān)文獻(xiàn)，其在制備工藝中均使用甲醇、乙醇重結(jié)晶[1-2]，故根據(jù)ICH中有機(jī)殘留量檢測的指導(dǎo)原則，采用頂空氣相色譜法對氨磷汀中甲醇、乙醇的有機(jī)殘留量進(jìn)行控制，提高氨磷汀生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性，確保臨床用藥安全。

1儀器與試藥

島津GC-2010Plus氣相色譜儀、Satorius分析天平（0.0001 g）BSA224S-CW、7697A頂空進(jìn)樣器（美國安捷倫科技有限公司）。甲醇、無水乙醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，色譜純）。10批測試樣品（190911、190912、190913、191006、191012、 191103、191105、191201、191203、191206）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

DB-1301毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.25μm），F(xiàn)ID離子化檢測器，檢測器溫度250℃，進(jìn)樣器溫度140℃，載氣為氮?dú)?，分流?0，柱流速1.5 mL·mL-1，氫氣流速60 mL·mL-1，空氣流速400 mL·mL-1。柱溫采用程序升溫：初始柱溫40℃，維持8 min，以40℃·min-1的速度升溫至200℃，維持5 min。頂空瓶的平衡溫度80℃，平衡時(shí)間45 min。

2.2溶液的制備

2.2.1空白溶液

精密量取水2 mL，置10 mL頂空瓶中，密封。

2.2.2對照品貯備液

分別精密稱取甲醇0.5 g、乙醇1.0 g，置200 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，分別制成上述各對照品貯備液。

2.2.3對照品溶液

精取對照品貯備液各10 mL置50 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得溶液a。精取1 mL溶液a，置10 mL頂空瓶，精密加入1 mL水，密封，作為對照品溶液。

2.2.4供試品溶液

精密稱取氨磷汀原料藥0.2 g，置于10 mL頂空瓶，精密加入2 mL水，振搖溶解，密封，作為供試品溶液。

2.3專屬性與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

在上述色譜條件下，將對照品溶液和空白溶液分別進(jìn)樣。結(jié)果表明：空白溶劑（見圖1）對甲醇、乙醇的檢測均無干擾，方法專屬性符合要求；各組分均能完全分離（見圖2）。

2.4線性關(guān)系考察

取對照品貯備液精密量取適量，配制成1%、5%、25%、50%、100%、150%和200%的對照品溶液，分別精密量取1 mL，置10 mL頂空瓶中，再精密加水1 mL，密封后測定。結(jié)果表明：在濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1、圖3、圖4。

2.5重復(fù)性試驗(yàn)

取“2.2.3”項(xiàng)下對照品溶液置頂空瓶中，進(jìn)樣，重復(fù)測試6次，測定峰面積，結(jié)果甲醇、乙醇響應(yīng)因子的RSD%分別為3.8%，4.0%（n=6），符合2020年版《中華人民共和國藥典》殘留溶劑重復(fù)性要求（RSD%≤5%），見表2。

2.6準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取已知?dú)埩羧軇┝康陌绷淄。ㄅ枮?90911）0.2 g（共9份），分別置10 mL頂空瓶中，分別加入對照品貯備液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL，再精密加入水1.5 mL、1.0 mL、0.5 mL，密封，振搖溶解，作為供試品溶液；檢測并記錄色譜圖，計(jì)算回收率。甲醇、乙醇的平均回收率分別為：101.66%（RSD%= 3.5%），104.92%（RSD%=3.8%）（n=9），均在80%～120%之間（見表3、4），均符合殘留溶劑準(zhǔn)確度測定的要求。

2.7檢測限和定量限的測定

取對照品溶液用稀釋劑逐級稀釋，置頂空瓶中進(jìn)樣，重復(fù)測試3次，按信噪比（S/N）10和3，測得甲醇和乙醇的檢測限，見表5。

2.8樣品測定

按“2.2.3”和“2.2.4”項(xiàng)下方法制備對照品和供試品溶液（10批次樣品），分別取對照品溶液和供試品溶液置頂空瓶中進(jìn)樣，各平行測試2次，計(jì)算樣品中的有機(jī)溶劑殘留量，含量均在規(guī)定限度范圍之內(nèi)，見表6。

3討論

1）氨磷汀在水易溶，故以水為溶劑，可以減少溶劑對待測有機(jī)組分的干擾。

2）根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[3-8]，氨磷汀國內(nèi)氨磷汀的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求較低，對其生產(chǎn)工藝過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)的限度控制不夠嚴(yán)密，且沒有對殘留溶劑進(jìn)行限度檢查，而導(dǎo)致臨床用藥副作用比例較大，影響其臨床用藥安全。結(jié)合氨磷汀的相關(guān)文獻(xiàn)，其在制備工藝中均使用甲醇、乙醇重結(jié)晶。經(jīng)試驗(yàn)確定：采用頂空氣相色譜法，用中等極性的（6%氰丙基-苯基）-甲基聚硅氧烷色譜柱（DB-1301），起始溫度為40℃時(shí)，甲醇、乙醇能夠有效分離。因?yàn)榧状己鸵掖紭O性相近，且在色譜系統(tǒng)中響應(yīng)值較大，為了更好地分離效果，分流比設(shè)定為10，兩者分離度能滿足ICH和《中華人民共和國藥典》中的規(guī)定。試驗(yàn)證明，此條件下，分離效果較好，靈敏度高，重現(xiàn)性好。

4結(jié)語

本文建立了氨磷汀原料藥中有機(jī)溶劑殘留的檢測方法，甲醇和乙醇分離效果好，重復(fù)性和準(zhǔn)確度良好。采用此方法可以控制氨磷汀制備工藝的穩(wěn)定性，保障人體用藥安全。

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【作者簡介】

高睿，男，1983年出生，主管藥師，研究方向?yàn)榛瘜W(xué)藥品、原輔料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究及標(biāo)準(zhǔn)起草。

（編輯：侯睿琪）