化妝品中黃體酮的安全性評價

張小媚，曾子君，周智明，李彥君

（廣東省藥品檢驗(yàn)所國家藥品監(jiān)督管理局化妝品風(fēng)險評估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510663）

黃體酮是卵巢分泌的具有生物活性的主要孕激素，作為藥物使用具有調(diào)經(jīng)和保胎等作用[1-2]。相對于藥品，在我國現(xiàn)行《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》[3]中，黃體酮被列為禁用物質(zhì)，禁止其作為原料添加在化妝品中。但因其具有促進(jìn)毛發(fā)生長、美白、除皺和增加皮膚彈性等作用，故常被一些不法生產(chǎn)商非法添加到化妝品中，以達(dá)到祛斑美白、抗皺等功效。但若長期使用這類化妝品會產(chǎn)生較大的副作用，甚至致癌[4]。因此，加強(qiáng)對黃體酮的監(jiān)管對確?；瘖y品產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要的意義。

近年來，隨著我國對化妝品監(jiān)管力度的不斷加大，化妝品中非法添加黃體酮的情況得到有效遏制。然而，最近廣東省藥監(jiān)部門通過化妝品安全風(fēng)險監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，化妝品中的某些原料、植物提取物等本身含有黃體酮，因此容易把黃體酮帶入到化妝品中。例如，川芎、羌活提取物具有防脫養(yǎng)發(fā)、美白、保濕、抗炎等功效，是很好的化妝品原料，但由于這些植物來源的原料本身含有或經(jīng)提取后可能生成黃體酮，所以使用過程中有一定的安全隱患。因此，有必要對黃體酮的安全性進(jìn)行風(fēng)險評估，并根據(jù)評估結(jié)果調(diào)整相應(yīng)的管理規(guī)定，確保黃體酮若無法避免作為雜質(zhì)被帶入化妝品時，在正常、合理及可預(yù)見的適用條件下不會對人體健康產(chǎn)生危害。

黃體酮分為內(nèi)源性黃體酮和合成黃體酮制劑，不同來源、不同用量的黃體酮帶來的安全風(fēng)險不盡相同[5]。本文對化妝品中黃體酮的安全性評價研究進(jìn)行綜述，旨在為黃體酮的風(fēng)險監(jiān)管提供依據(jù)。

1 黃體酮的理化性質(zhì)

黃體酮（C21H30O2）又稱孕酮激素、黃體激素，CAS 號為57-83-0，EINECS 登錄號為200-350-6，結(jié)構(gòu)式如圖1 所示。黃體酮為白色或類白色的結(jié)晶性粉末，無臭，需避光、密封保存，在三氯甲烷中極易溶解，在乙醇、乙醚或植物油中溶解，在水中不溶[6]。

圖1 黃體酮結(jié)構(gòu)式

2 黃體酮的代謝與經(jīng)皮吸收

天然黃體酮溶解度低，體內(nèi)吸收差，口服后經(jīng)胃腸道迅速吸收，2 ～4 h 達(dá)到最大血藥濃度，但其主要在肝臟代謝，生物利用度不足5%，首過效應(yīng)強(qiáng)，肝臟毒性明顯，臨床應(yīng)用效果較差[7]。目前，黃體酮使用和研究較多的劑型為肌內(nèi)注射液和陰道緩釋凝膠。但由于肌內(nèi)注射需要多次往返醫(yī)院，且可引起過敏反應(yīng)，而陰道給藥起效慢，因此臨床應(yīng)用需結(jié)合患者實(shí)際情況進(jìn)行選擇。近年有研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)皮給藥可避免肝臟的首過效應(yīng)和胃腸道破壞，顯著提高某些半衰期較短的藥物的療效，并能使血藥濃度在較長時間內(nèi)維持穩(wěn)定[8-9]。

陶虹等[10]選用小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、比格犬和小型豬的離體皮膚，采用Franz 擴(kuò)散池法，用高效液相色譜法測定接收液中的黃體酮含量，并進(jìn)行不同模型的擬合。結(jié)果顯示，小鼠腹部皮膚對黃體酮的穩(wěn)態(tài)透皮速率[（8.854 3±0.741 1）μg/（cm2·h），時滯1.6 h]在6 種動物皮膚中最高，小型豬皮膚的穩(wěn)態(tài)透皮速率[（0.415 3±0.020 6）μg/（cm2·h），時滯2.9 h]較低。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，豬的皮膚特性與人的最為接近[11]，從豬的實(shí)驗(yàn)參數(shù)大致推斷出黃體酮在人皮膚上的滲透情況，其穩(wěn)態(tài)透皮速率數(shù)據(jù)可以作為人體透皮吸收過程的參考。

3 黃體酮的毒理學(xué)安全性評價

3.1 急性毒性

關(guān)于黃體酮制劑的臨床前毒性研究較少，其急性毒性有待進(jìn)一步研究。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，小鼠靜脈注射黃體酮的半數(shù)致死量LD50為100 mg/kg，大鼠腹腔內(nèi)注射黃體酮的LD50為327 mg/kg[7]。通過急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)和LD50的測定可評價受試物的毒性；急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)研究和經(jīng)皮LD50的確定可評價受試物經(jīng)皮染毒的毒性[3]。由于判斷黃體酮毒性分級的試驗(yàn)數(shù)據(jù)有限，因此暫無法評價黃體酮的急性毒性，判斷其毒性分級需要更多的研究數(shù)據(jù)。

3.2 皮膚刺激性和致敏性

皮膚刺激性和致敏性是化妝品安全風(fēng)險評價中的一項(xiàng)重要毒理學(xué)指標(biāo)。前文提到，豬的皮膚特性與人的最為接近，因此皮膚刺激性與致敏性試驗(yàn)采用豬皮膚會更好，但有關(guān)黃體酮對豬皮膚的刺激性、致敏性的研究極少，且家兔和豚鼠皮膚非常敏感，故常作為皮膚刺激性和致敏性試驗(yàn)的首選[3]。

研究發(fā)現(xiàn)，黃體酮不具有皮膚刺激性和致敏性。趙文惠等[12]采用2%黃體酮乳膏、陶虹等[13]采用黃體酮熱熔壓敏膠透皮貼劑，以及鄒毅等[14]采用黃體酮藥膜分別對家兔進(jìn)行皮膚刺激性試驗(yàn)和對豚鼠進(jìn)行皮膚致敏性試驗(yàn)，結(jié)果均顯示黃體酮對皮膚不具有刺激性和致敏性。

3.3 細(xì)胞毒性

黃體酮具有一定的細(xì)胞毒性。在一項(xiàng)毒性試驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，向子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的組織培養(yǎng)物中添加高濃度的黃體酮（50～200 μg/mL）會抑制DNA合成，從而導(dǎo)致細(xì)胞存活率降低。對于腎上腺細(xì)胞，使用7 μg/mL 黃體酮可實(shí)現(xiàn)50%的生長抑制。雞心室細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞生長抑制值為4 μg/mL 黃體酮[15]。表明不同濃度黃體酮會對不同細(xì)胞的生長產(chǎn)生抑制。

3.4 遺傳毒性

自1989 年以來，歐盟已禁止黃體酮在動物飼料中作為生長促進(jìn)劑使用，因此關(guān)于其遺傳毒性的可用數(shù)據(jù)有限。早期研究者們發(fā)現(xiàn)，黃體酮無明顯致突變、致癌和致畸的遺傳毒性。例如，在沙門氏菌致突變試驗(yàn)（Ames 試驗(yàn)）中，研究者發(fā)現(xiàn)黃體酮不是誘變劑[16]。趙達(dá)亞等[17]通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，黃體酮具有誘變效應(yīng)，但機(jī)體染色體隨著藥物的排泄能夠進(jìn)行修復(fù)。黃體酮對女性及子代影響的研究顯示，黃體酮無明顯致突變、致癌和致畸的遺傳學(xué)效應(yīng)[18]。

非整倍體主要由染色體丟失和不分離產(chǎn)生，在化學(xué)品和輻射的常規(guī)測試中，非整倍體被認(rèn)為意義重大。在過去的幾年中，胞質(zhì)分裂阻斷微核（CBMN）技術(shù)已發(fā)展成為檢測非整倍體誘導(dǎo)的可靠檢測方法。目前，將基本方法與適當(dāng)?shù)姆肿犹綔y技術(shù)（如著絲粒的免疫熒光標(biāo)記和熒光原位雜交）相結(jié)合即可作為檢測染色體丟失和不分離的檢測方法。為了彌合這一差距，某研究機(jī)構(gòu)采用細(xì)胞質(zhì)分裂阻斷微核（CBMN）測定結(jié)合熒光原位雜交探索黃體酮的非整倍體誘導(dǎo)力。研究表明，黃體酮具有遺傳毒性并通過不分離機(jī)制誘導(dǎo)產(chǎn)生非整倍體[19]。

3.5 重復(fù)劑量毒性

重復(fù)劑量毒性是指連續(xù)暴露后對組織和靶器官所產(chǎn)生的功能性和/或器質(zhì)性改變。為了確定風(fēng)險物質(zhì)的毒性反應(yīng)與暴露劑量之間的關(guān)系，需要進(jìn)行劑量反應(yīng)關(guān)系評估。而對風(fēng)險物質(zhì)的有閾值毒性效應(yīng)的劑量反應(yīng)關(guān)系評估，需獲得未觀察到有害作用劑量（NOAEL）或基準(zhǔn)劑量（BMD）。此結(jié)果可為評價受試物經(jīng)皮滲透性、作用靶器官和慢性皮膚毒性試驗(yàn)劑量選擇提供依據(jù)。

為了測試黃體酮的重復(fù)劑量毒性，某研究對黃體酮和大鼠進(jìn)行了劑量反應(yīng)關(guān)系評估，并獲得了黃體酮的NOAEL 值。該研究對4 組[對照組、低劑量（75 mg/kg）、中劑量（150 mg/kg）和高劑量（300 mg/kg）黃體酮微粉膠囊組]健康SD 大鼠（每組20 只）連續(xù)灌胃給藥14 周，觀察大鼠產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，停藥恢復(fù)4 周后再觀察。常規(guī)毒理學(xué)指標(biāo)觀察結(jié)果顯示，黃體酮膠囊粉低劑量組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；病理組織學(xué)檢查提示劑量組和停藥后各臟器及組織未見特殊改變；實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示黃體酮膠囊粉可引起可逆性毒性反應(yīng)，停藥后有延遲反應(yīng)。這項(xiàng)研究表明重復(fù)劑量在75 mg/（kg bw）以內(nèi)的黃體酮不會對機(jī)體產(chǎn)生不可逆的毒性反應(yīng)[20]。

3.6 生殖發(fā)育毒性

生殖發(fā)育毒性是指動物接觸化妝品原料和/或風(fēng)險物質(zhì)后引起生殖功能、胚胎的初期發(fā)育（如致畸）、出生前后發(fā)育、母體機(jī)能以及胚胎和胎兒發(fā)育障礙的可能性。生殖發(fā)育毒性評價是化妝品安全評估的重要組成部分。

相關(guān)動物實(shí)驗(yàn)表明黃體酮具有一定生殖發(fā)育毒性。例如，梁燕秋等[21]將斑馬魚受精后144 h 的胚胎分別暴露在含0 ng/L、6 ng/L、45 ng/L 和90 ng/L 的黃體酮水環(huán)境中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃體酮能夠改變斑馬魚早期胚胎發(fā)育階段下丘腦-垂體-生長軸相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平，進(jìn)而對斑馬魚的生長發(fā)育產(chǎn)生潛在的危害。還有研究者在Wistar 大鼠妊娠期間，分別肌注0.1 mg/kg、1.0 mg/kg、5.0 mg/kg、20.0 mg/kg 黃體酮，發(fā)現(xiàn)除了最低劑量外，其余劑量均會導(dǎo)致胎兒缺陷甚至死亡。同時，相關(guān)試驗(yàn)表明產(chǎn)前暴露于黃體酮的雌性大鼠、兔子、小鼠、恒河猴和豚鼠后代性發(fā)育也會受到一定的影響[22]。此外，還有研究發(fā)現(xiàn)新生小鼠對黃體酮表現(xiàn)出高度敏感，新生小鼠出生0 ～24 h，LD50達(dá)到70 mg/kg；出生49 ～72 h，LD50為1 200 mg/kg；出生121 ～168 h，LD50為2 700 mg/kg[15]。以上研究結(jié)果表明黃體酮對部分生物體具有一定的生殖發(fā)育毒性，人們尤其是孕婦對日?；瘖y品（含植物來源的原料）的使用需引起重視。

3.7 慢性毒性

慢性毒性是指動物在正常生命期的大部分時間內(nèi)接觸受試物所引起的不良反應(yīng)。化學(xué)物質(zhì)在體內(nèi)的蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的基礎(chǔ)。為了研究黃體酮是否具有慢性毒性，有研究者對雌狗進(jìn)行74 周皮下注射黃體酮的毒性實(shí)驗(yàn)[23]，每組5 只，前12 周皮下注射劑量為0.083 mg/（kg·d）、0.250 mg/（kg·d）或0.750 mg/（kg·d），第13 ～36 周，皮下注射劑量為0.830 mg（/kg·d），2.500 mg（/kg·d）或7.500 mg（/kg·d），第37 ～74 周皮下注射劑量為2.500 mg/（kg·d）、7.500 mg/（kg·d）或22.500 mg/（kg·d）。結(jié)果表明，在試驗(yàn)期內(nèi)，對照組（賦形劑組）及受試組的注射部位均出現(xiàn)慢性炎癥。此外，受試組體重、血漿膽固醇及血糖量均超標(biāo)，子宮體、內(nèi)膜、卵泡均受到影響。在中、高劑量的受試組中，乳腺呈顯著小葉增生，并有纖維腺瘤樣結(jié)節(jié)。但這種結(jié)節(jié)的形成并不表明其會導(dǎo)致女性產(chǎn)生腫瘤，需要進(jìn)一步研究。

3.8 致癌性

自1985 年以來，美國國家毒理學(xué)計(jì)劃（NTP）將黃體酮列為“合理預(yù)期的人類致癌物”。美國衛(wèi)生及公共服務(wù)部發(fā)布的第十五版致癌物報(bào)告中指出，黃體酮在大鼠、小鼠、狗中均能引起乳腺或雌性生殖道腫瘤。黃體酮與其他化學(xué)物質(zhì)（已知的致癌物）聯(lián)合使用有協(xié)同致癌作用。研究發(fā)現(xiàn)，在感染乳腺腫瘤病毒的雌性小鼠中，皮下注射黃體酮增加了3-甲基膽蒽引起的乳腺腫瘤的發(fā)生概率；在未感染的小鼠中，它會導(dǎo)致腫瘤的早期發(fā)病。去卵巢小鼠中，通過在子宮內(nèi)給予3-甲基膽蒽后，皮下注射黃體酮促進(jìn)了子宮腫瘤（子宮內(nèi)膜肉瘤）的發(fā)展。黃體酮的皮下注射和3-甲基膽蒽的局部應(yīng)用導(dǎo)致雌性小鼠發(fā)生陰道癌和宮頸癌（鱗狀細(xì)胞癌）。大鼠中，暴露于7,12-二甲基苯并[a]蒽或3-甲基膽蒽后，皮下或肌肉注射黃體酮會導(dǎo)致乳腺腫瘤發(fā)病率增加或發(fā)病提前。在飲食中給予2-乙酰胺氟烯的雌性大鼠中，肌肉注射黃體酮能夠促進(jìn)乳腺腫瘤的發(fā)展[24]。

有研究發(fā)現(xiàn)，黃體酮可能會抑制大鼠乳腺腫瘤的消退，卵巢切除后則刺激腫瘤生長，但其機(jī)制尚不清楚[25]。石青梅等[26]通過分別連續(xù)用低（0.2 mg/d）、中（0.4 mg/d）、高（0.8 mg/d）劑量黃體酮對裸鼠受試組、裸鼠對照組（0.04 mL/d 的茶油）各肌注一周，觀察血管瘤大小，發(fā)現(xiàn)早期血管瘤形成的因素之一可能是過量補(bǔ)充外源性黃體酮。

盡管國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）和NTP 都沒有找到足夠的證據(jù)來證明黃體酮暴露與人類癌癥的發(fā)展有關(guān)，但I(xiàn)ARC 審查了關(guān)于黃體酮的致癌性的證據(jù)，認(rèn)定黃體酮“可能對人類致癌”。

3.9 人群安全資料

人們在日常生活、工作中可能會通過各種途徑接觸到黃體酮，人類潛在的外源性黃體酮暴露的主要途徑是經(jīng)口、經(jīng)皮、吸入以及注射。消費(fèi)者可能會通過使用不同劑型的藥物、化妝品以及食用牛奶、乳制品等途徑接觸到黃體酮，還可能在黃體酮生產(chǎn)或配制成藥物的過程中通過吸入和皮膚接觸發(fā)生潛在的黃體酮職業(yè)暴露[24]。監(jiān)測數(shù)據(jù)表明，一般人群通過攝入飲用水可能會接觸到遠(yuǎn)低于治療劑量的黃體酮[27]。因此，對黃體酮的安全風(fēng)險進(jìn)行評估，確定其在不同領(lǐng)域的安全管理限值，以預(yù)防人們在日常生活、工作中過量地?cái)z入黃體酮十分必要。

3.10 其他毒理學(xué)試驗(yàn)資料

研究發(fā)現(xiàn)，黃體酮會增加可卡因?qū)Υ笫蠛腿焉锬秆虻男难芏拘訹28-29]。楊宏[30]對經(jīng)豬丹毒弱毒菌苗免疫的雌性小鼠注射黃體酮，并與常規(guī)的豬丹毒弱毒菌苗免疫的雌性小鼠同時做效力對比試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃體酮能降低雌性小鼠的免疫功能。這些研究都表明黃體酮與某些已知藥物合用可能會增加其安全風(fēng)險。

4 結(jié)語

基于目前對黃體酮的安全評價研究發(fā)現(xiàn)，黃體酮不具有皮膚刺激性和致敏性，其急性毒性需進(jìn)一步研究，但具有一定的遺傳毒性和生殖發(fā)育毒性，可能對人類致癌。此外，黃體酮還具有一定的心血管和免疫功能毒性等。綜合分析可推斷出人們使用含有黃體酮的化妝品時存在一定的安全風(fēng)險，但由于其安全性評價研究較少，相關(guān)毒理學(xué)研究仍不充分，需要未來更多的研究數(shù)據(jù)支持。目前，我國《化妝品安全評估技術(shù)導(dǎo)則（2021 年版）》[31]，歐盟化妝品法規(guī)（No.1223/2009）[32]和東盟化妝品指令都禁止將黃體酮用于化妝品中，但當(dāng)黃體酮無法避免作為雜質(zhì)帶入化妝品，有關(guān)部門在對黃體酮進(jìn)行安全風(fēng)險監(jiān)測及評估時，需根據(jù)現(xiàn)有的毒理學(xué)數(shù)據(jù)，結(jié)合風(fēng)險監(jiān)測的結(jié)果，并參考國際法規(guī)，確定黃體酮的安全管理限值，及時調(diào)整相關(guān)法規(guī)對該物質(zhì)的管理規(guī)定。