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      補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠胃腸功能及腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

      2023-09-26 05:46:50王欣史磊磊張雨涵李溪張雪航曾憲軍劉繼平
      現(xiàn)代藥物與臨床 2023年8期
      關(guān)鍵詞:食積消積口服液

      王欣,史磊磊,張雨涵,李溪,張雪航,曾憲軍,劉繼平*

      1.陜西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,陜西 咸陽(yáng) 712046

      2.西安天一秦昆制藥有限責(zé)任公司,陜西 西安 710077

      小兒厭食癥是常見(jiàn)的脾胃系統(tǒng)疾病,其主要癥狀為長(zhǎng)時(shí)間食欲不振,甚至厭惡進(jìn)食,多發(fā)于1~6歲兒童,發(fā)病率為12%~34%,并有逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì)[1]。長(zhǎng)期厭食會(huì)影響小兒生長(zhǎng)發(fā)育,導(dǎo)致貧血、營(yíng)養(yǎng)不良,并可造成機(jī)體免疫力下降,危害兒童身體健康[2]。小兒脾胃虛弱臟腑嬌嫩,若飲食不節(jié),或喂養(yǎng)無(wú)度,極易引發(fā)厭食癥,其根本病位在于脾胃,脾胃不和為基本病機(jī)。小兒厭食癥證型多樣,包括脾失健運(yùn)、脾胃氣虛、肝胃不和、胃陰不足、飲食積滯、脾胃濕熱、脾胃虛寒、及脾虛蟲(chóng)積等[3]。《證治匯補(bǔ)·卷二》載:“不能食有虛有實(shí),實(shí)則心下痞滿,惡心口苦,宜消導(dǎo);虛則倦怠,面色萎黃,必心下軟和,實(shí)則飲食積滯中焦,壅遏脾胃運(yùn)化,虛則脾胃虛損,運(yùn)化無(wú)力”,因此基于“補(bǔ)”“通”兩法論治,可暢通中焦氣機(jī),促進(jìn)氣血運(yùn)行和生化和順并補(bǔ)益脾胃之虛損,恢復(fù)其正常的生理功能,化生精氣、濡養(yǎng)五臟。

      補(bǔ)脾消積口服液由水紅花子、山楂、雞內(nèi)金等9 味中藥組成,為淡紅色至黃棕色液體,具有健脾燥濕、益氣消積的功效,用于小兒積滯、厭食,疳癥等屬脾虛夾有食積者。本品臨床療效確切,但缺乏實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)支撐,作用機(jī)制不明晰。因此本實(shí)驗(yàn)采用冰水及豬油灌胃聯(lián)合飲食失節(jié)方法制備脾虛食積小鼠模型,給予補(bǔ)脾消積口服液進(jìn)行干預(yù),探究補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積癥胃腸功能及腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響,為該藥的臨床用藥提供理論依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 主要材料與儀器

      SPF 級(jí)昆明種小鼠,體質(zhì)量(20±2)g,購(gòu)自于成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK(川)2020-030。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理實(shí)驗(yàn)室,室溫控制在(23±3)℃,飼養(yǎng)動(dòng)物期間給予正常飲水飲食。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(SUCMDL20220515001)。補(bǔ)脾消積口服液由西安天一秦昆制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn),規(guī)格10 mL/支,產(chǎn)品批號(hào)220 422098;小兒健脾丸由北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠生產(chǎn),規(guī)格3 g/丸,產(chǎn)品批號(hào)22010013?;钚蕴坑商旖蚴锌泼軞W化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn),產(chǎn)品批號(hào)Q/12HB 5029-2015。小鼠胃泌素(GAS)、胃動(dòng)素(MTL)、血管活性腸肽(VIP)酶聯(lián)免疫法測(cè)定試劑盒購(gòu)自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司。

      BSA224S 型分析電子天平(北京賽多利);UPHW-II-90T 型純水儀(成都超純科技);1-15K 低溫高速離心機(jī)(美國(guó)Sigma);Donatello 型脫水機(jī)(意大利Diapath);JB-P5 型包埋機(jī)(武漢俊杰電子);RM2016 型病理切片機(jī)、ICC50 W 型光學(xué)顯微鏡(德國(guó)徠卡儀器);酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio Tek Instruments)。

      1.2 方法

      1.2.1 動(dòng)物分組及造模 將50 只昆明小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d 后,按隨機(jī)數(shù)字表法分為5 組,分別為空白組、脾虛食積模型組、補(bǔ)脾消積口服液低劑量組(臨床等效劑量)和高劑量組(臨床2 倍劑量)、小兒健脾丸陽(yáng)性對(duì)照組,每組10 只。除空白組外,其余小鼠通過(guò)冰水及豬油ig 聯(lián)合飲食失節(jié)方法造成脾虛食積模型,第1 天小鼠自由進(jìn)食,以10 mL/kg ig 4 次冰水混合物,第2 天小鼠禁食不禁水,以10 mL/kg ig 4 次冰水混合物;第3 天小鼠以4 ℃ ig 冰氫氧化鈉0.3 mol/L,每只0.1 mL,并每日以10 mL/kg ig 豬油1 次[4-5],每3 天為1 個(gè)周期。造模40 d后,根據(jù)臨床給藥劑量以人體質(zhì)量60 kg 換算補(bǔ)脾消積口服液小鼠等效劑量即低劑量為6 mL/kg,并據(jù)此設(shè)置臨床2 倍劑量組即高劑量為12 mL/kg,并根據(jù)陽(yáng)性藥臨床給藥劑量換算得出小兒健脾丸給藥劑量為2.7 g/kg,空白組和模型組每日ig 等體積生理鹽水1 次,連續(xù)給藥10 d。

      1.2.2 各組小鼠腸推進(jìn)及胃排空測(cè)定 給予禁食不禁水24 h 的小鼠新鮮配制的5%炭末混懸液0.2 mL/10 g。20 min 后處死小鼠,取胃,濾紙拭干后稱全質(zhì)量,沿胃大彎剪開(kāi)胃體,預(yù)冷的生理鹽水洗去胃內(nèi)容物后擦干,稱凈質(zhì)量,計(jì)算胃內(nèi)殘留率。迅速取出小腸,剝離腸系膜后鋪平,測(cè)量小腸全長(zhǎng)與炭末混懸液從幽門括約肌推至小腸末端的距離,計(jì)算小腸推進(jìn)率。

      胃內(nèi)殘留率=(胃全質(zhì)量-胃凈質(zhì)量)/灌服碳末混懸液質(zhì)量

      小腸推進(jìn)率=幽門至碳末混懸液前沿的距離/幽門至回盲部全長(zhǎng)

      1.2.3 血清中胃泌素(GAS)、胃動(dòng)素(MTL)、血管活性腸肽(VIP)的檢測(cè) 末次給藥后,各組小鼠禁食不禁水24 h,眼球取血后于4 ℃離心機(jī),3 000 r/min 離心15 min,取上層血清。采用酶聯(lián)免疫試劑盒,按照說(shuō)明書(shū)操作程序測(cè)定血清中胃腸激素水平。

      1.2.4 胃腸組織形態(tài)的檢測(cè) 各組小鼠眼球取血后脫頸椎處死,取胃組織及距胃幽門1 cm 處的小腸1 cm,用生理鹽水沖洗胃腸組織表面后將其置入4%多聚甲醛固定液中固定。組織切片經(jīng)蘇木素-伊紅(HE)染色后,進(jìn)行顯微鏡觀察及圖像采集分析。

      1.2.5 高通量測(cè)序技術(shù)測(cè)定腸道菌群結(jié)構(gòu) 末次ig 24 h 后,收集空白組、模型組、補(bǔ)脾消積口服液低劑量組及陽(yáng)性組小鼠盲腸內(nèi)容物,置于滅菌的EP 管中,-80 ℃凍存。采用SDS 方法對(duì)樣本的基因組DNA 進(jìn)行提取,之后利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA 的純度和濃度,取適量的樣本DNA 于離心管中,使用無(wú)菌水稀釋樣本至1 ng/μL,以稀釋后的基因組DNA 為模板,根據(jù)16S V4 區(qū)引物(515F 和806R)進(jìn)行擴(kuò)增,使用帶Barcode 的特異引物,進(jìn)行PCR。PCR 產(chǎn)物使用2%濃度的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè);對(duì)檢測(cè)合格的PCR 產(chǎn)物進(jìn)行磁珠純化,采用酶標(biāo)定量,根據(jù)PCR 產(chǎn)物濃度進(jìn)行等量混樣,充分混勻后使用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR 產(chǎn)物,對(duì)目的條帶使用qiagen 公司提供的膠回收試劑盒回收產(chǎn)物,使用TruSeq?DNA PCR-Free Sample Preparation Kit 建庫(kù)試劑盒進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建,構(gòu)建好的文庫(kù)經(jīng)過(guò)Qubit 和Q-PCR 定量,文庫(kù)合格后,使用NovaSeq 6000進(jìn)行上機(jī)測(cè)序。采用Tukey和Kruskal-Wallis 秩和檢驗(yàn),分析組間物種α 多樣性物種β 多樣性差異是否顯著。

      α 多樣性可以反映物種的豐富度和均勻度,Simpson 指數(shù)表征群落內(nèi)物種分布的多樣性和均勻度,Simpson 指數(shù)越大物種均勻度越好;Shannon 指數(shù)為樣品中的分類總數(shù)及其占比,Shannon 指數(shù)越大,群落多樣性越高,物種分布越均勻;Chao1 為估計(jì)群落樣品中包含的物種總數(shù),ACE 為估計(jì)群落中OTU 數(shù)目。β 多樣性分析是對(duì)不同樣本的微生物群落構(gòu)成進(jìn)行比較分析,基于weighted-unifrac算法得到各組小鼠UPGMA 聚類樹(shù)狀圖。NMDS 是基于Bray-Curtis 距離來(lái)進(jìn)行分析的非線性模型,根據(jù)樣本中包含的物種信息,以點(diǎn)的形式反映在二維平面上。

      1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

      使用SPSS 26.0 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)結(jié)果以表示,方差齊使用ANOVA 分析,不齊使用非參數(shù)檢驗(yàn)。

      2 結(jié)果

      2.1 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠腸推進(jìn)及胃排空的影響

      與空白組相比,模型組小腸推進(jìn)率顯著降低(P<0.05),胃內(nèi)殘留率顯著升高(P<0.05);與模型組相比,補(bǔ)脾消積口服液低劑量組及小兒健脾丸組小腸推進(jìn)率顯著升高(P<0.01),胃內(nèi)殘留率顯著降低(P<0.05、0.01),補(bǔ)脾消積口服液高劑量組小腸推進(jìn)率升高,胃內(nèi)殘留率降低,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明補(bǔ)脾消積口服液可顯著增強(qiáng)脾虛食積小鼠胃腸蠕動(dòng)能力,見(jiàn)表1。

      表1 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠腸推進(jìn)和胃內(nèi)殘留率的影響(,n=10)Table 1 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on intestine impelling and gastric residual rate in spleen deficient dyspepsia mice (,n=10)

      表1 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠腸推進(jìn)和胃內(nèi)殘留率的影響(,n=10)Table 1 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on intestine impelling and gastric residual rate in spleen deficient dyspepsia mice (,n=10)

      與空白組比較:△P<0.05;與模型組比較:*P<0.05 **P<0.01△P <0.05 vs blank group;*P <0.05 **P <0.01 vs model group

      2.2 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠胃腸組織病理學(xué)變化的影響

      由圖1 可見(jiàn)空白組小鼠胃黏膜組織結(jié)構(gòu)清楚,上皮細(xì)胞完整,腺體排列整齊;模型組胃黏膜基本完整,腺體排列紊亂,部分上皮細(xì)胞脫落破壞,胃腺體少量表層壞死,胃黏膜輕微充血;補(bǔ)脾消積口服液低劑量組胃黏膜較完整,腺體排列整齊,胃黏膜未見(jiàn)充血現(xiàn)象;補(bǔ)脾消積口服液高劑量組胃黏膜基本完整,腺體排列較紊亂,部分上皮細(xì)胞脫落破壞;小兒健脾丸組胃黏膜組織結(jié)構(gòu)清楚,上皮細(xì)胞完整,腺體排列較整齊。

      圖1 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠胃組織形態(tài)的影響(HE 染色,×100)Fig.1 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on the morphology of gastric tissue in spleen deficient dyspepsia mice (HE,×100)

      由圖2 可見(jiàn)空白組腸黏膜結(jié)構(gòu)完整,黏膜肌層下層細(xì)胞排列整齊、層次清晰,腸絨毛排列整齊規(guī)則;模型組黏膜肌層變薄,腸絨毛變短且不規(guī)則、萎縮、缺失、脫落較嚴(yán)重并排列紊亂,絨毛數(shù)量減少,間距增寬;補(bǔ)脾消積口服液低劑量組腸黏膜結(jié)構(gòu)完整,層次清晰,黏膜較厚,腸絨毛排列整齊;補(bǔ)脾消積口服液高劑量組黏膜肌層變薄,腸絨毛變短并排列紊亂,絨毛數(shù)量減少;小兒健脾丸組腸黏膜結(jié)構(gòu)完整,層次清晰,黏膜較厚,腸絨毛排列整齊。

      圖2 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠腸組織形態(tài)的影響(HE 染色,×40)Fig.2 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on the morphology of intestinal tissue in spleen deficient dyspepsia mice(HE,×40)

      2.3 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠血清中GAS、MTL、VIP 的影響

      與空白組相比,模型組小鼠血清中GAS與MTL水平顯著降低(P<0.05),VIP 水平顯著升高(P<0.01);與模型組相比,補(bǔ)脾消積口服液低劑量組及小兒健脾丸組小鼠血清中GAS 和MTL 水平顯著升高(P<0.05、0.01),VIP 水平顯著降低(P<0.05),補(bǔ)脾消積口服液高劑量組小鼠血清中GAS 與MTL水平升高,VIP 水平降低,但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)表2。

      表2 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠胃腸激素的影響(,n=10)Table 2 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on gastrointestinal hormones in spleen deficient dyspepsia mice (,n=10)

      表2 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠胃腸激素的影響(,n=10)Table 2 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on gastrointestinal hormones in spleen deficient dyspepsia mice (,n=10)

      與空白組比較:△P<0.05 △△P<0.01;與模型組比較:*P<0.05 **P<0.01△P <0.05 △△P <0.01 vs blank group;*P <0.05 **P <0.01 vs model group

      2.4 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠體內(nèi)腸道菌群的影響

      2.4.1 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)小鼠腸道菌群測(cè)序質(zhì)量評(píng)估結(jié)果 由圖3A 可知,各組小鼠稀釋曲線逐漸趨于平坦,提示測(cè)序數(shù)據(jù)量漸進(jìn)合理。由圖3B 可知,各組小鼠在水平方向上曲線在橫軸上的跨度越大,豐富度越高。

      圖3 各樣本稀釋曲線圖(A)和等級(jí)聚類曲線圖(B)Fig.3 Rarefaction curve (A) and rank abundance (B) of each sample

      2.4.2 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)小鼠腸道菌群多樣性及豐度影響

      (1)α 多樣性分析:與空白組相比,模型組Simpson 指數(shù)、Shannon 指數(shù)顯著降低(P<0.05),ACE 指數(shù)與Chao1 指數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組相比,補(bǔ)脾消積口服液低劑量組與小兒健脾丸組Simpson 指數(shù)、Shannon 指數(shù)、ACE 指數(shù)和Chao1指數(shù)均升高(P<0.05、0.01),說(shuō)明補(bǔ)脾消積口服液可以改善脾虛食積小鼠腸道菌群的豐度和多樣性,見(jiàn)表3。

      表3 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠腸道菌群多樣性指數(shù)的影響(,n=4)Table 3 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on Intestinal microbial population diversity index in spleen deficient dyspepsia mice (,n=4)

      表3 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠腸道菌群多樣性指數(shù)的影響(,n=4)Table 3 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on Intestinal microbial population diversity index in spleen deficient dyspepsia mice (,n=4)

      與空白組比較:△P<0.05;與模型組比較:*P<0.05 **P<0.01△P <0.05 vs blank group;*P <0.05 **P <0.01 vs model group

      (2)β 多樣性分析:由圖4A 可知,模型組與補(bǔ)脾消積口服液低劑量組及小兒健脾丸組差異最大。由圖4B 可知,空白組、補(bǔ)脾消積口服液低劑量組與小兒健脾丸組大部分樣本點(diǎn)聚在一起,并與模型組區(qū)分開(kāi)來(lái),說(shuō)明脾虛食積小鼠的腸道群落結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變,經(jīng)補(bǔ)脾消積口服液治療后改善了腸道群落結(jié)構(gòu)。

      圖4 各組小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的UPGMA 聚類樹(shù)狀圖(A)和NMDS 圖(B)Fig.4 UPGMA clustering tree (A) and NMDS (B) of intestinal microbes in mice from each group

      2.4.3 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)小鼠腸道菌群門水平的影響 各組小鼠在厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidota)、變形桿菌門(Proteobacteria)為優(yōu)勢(shì)菌群,3 個(gè)門的總比例>85%,各處理組菌群結(jié)構(gòu)相似,但菌群組成比例不同。與空白組相比,模型組小鼠腸道內(nèi)的有益菌擬桿菌門相對(duì)豐度下降,有害菌厚壁菌門相對(duì)豐度增加,但比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組相比,補(bǔ)脾消積口服液低劑量組及小兒健脾丸組擬桿菌門相對(duì)豐度有所增加,厚壁菌門相對(duì)豐度有下降趨勢(shì)(P<0.05),提示補(bǔ)脾消積口服液可通過(guò)改善腸道菌群達(dá)到治療效果,見(jiàn)圖5。

      圖5 各組小鼠腸道菌群在門水平下的群落組成Fig.5 Intestinal microbes community composition in mice from each group at level of phylum

      2.4.4 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)小鼠腸道菌群屬水平的影響 屬水平上優(yōu)勢(shì)菌為葡萄球菌屬Staphylococcus、杜氏桿菌屬Dubosiella、乳桿菌屬Lactobacillus。與空白組相比,模型組葡萄球菌屬豐度升高(P<0.05),杜氏桿菌屬、乳酸桿菌屬豐度降低,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組比較,補(bǔ)脾消積口服液低劑量組葡萄球菌屬豐度降低(P<0.01),杜氏桿菌屬及乳桿菌屬豐度升高;小兒健脾丸組葡萄球菌屬豐度降低(P<0.05)、杜氏桿菌屬豐度降低,乳酸桿菌屬豐度升高,見(jiàn)圖6。

      圖6 各組小鼠腸道菌群在屬水平下的群落組成Fig.6 The intestinal microbes community composition in mice from each group at level of genus

      3 討論

      根據(jù)小兒厭食癥的臨床特點(diǎn),將之認(rèn)定在中醫(yī)學(xué)中的“疳證”“積滯”“不食”等范疇中[6],中醫(yī)藥治療脾虛食積型小兒厭食癥有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),從病因病機(jī)的探討到施治均有理論指導(dǎo),且中醫(yī)治法有較高的療效,不良反應(yīng)少[7]。補(bǔ)脾消積口服液中多味藥口味酸甜,相比中藥湯劑患兒更易接受,且方中諸藥已經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期中醫(yī)實(shí)踐的考察,安全性良好,對(duì)緩解脾虛食積型小兒厭食癥具有一定優(yōu)勢(shì)。

      補(bǔ)脾消積口服液由水紅花子、山楂、雞內(nèi)金、六神曲、陳皮、檳榔、白術(shù)、白扁豆和大棗組成。方中各藥大多入脾胃經(jīng)發(fā)揮功效,為臨床治療脾胃虛弱常用藥物,各藥配伍可疏通氣機(jī)、消除氣滯、補(bǔ)氣健脾,全方補(bǔ)而不滯、滋而不膩,共奏益氣健脾和胃之功。本實(shí)驗(yàn)將小腸推進(jìn)率及胃內(nèi)殘留率作為補(bǔ)脾消積口服液的藥效評(píng)價(jià)指標(biāo),結(jié)果表明補(bǔ)脾消積口服液低劑量組可顯著增強(qiáng)脾虛食積小鼠胃腸蠕動(dòng)能力,改善胃腸動(dòng)力,高劑量組療效與模型組無(wú)顯著性差異,提示藥效為臨床等效劑量時(shí),治療效果最優(yōu)。

      胃腸道可分泌消化酶和吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)消化機(jī)體攝入的物質(zhì),胃腸道的正常功能對(duì)于維持生命至關(guān)重要,當(dāng)胃腸道受到外界刺激超出自身負(fù)荷時(shí),胃腸道屏障功能的動(dòng)態(tài)平衡會(huì)被打破,從而引發(fā)各種疾病[7]。腸道屏障由黏液層、上皮細(xì)胞以及黏膜免疫系統(tǒng)3 個(gè)部分組成,腸道屏障受損時(shí),細(xì)菌、內(nèi)毒素會(huì)浸染機(jī)體,使胃腸道發(fā)生損傷,引起炎癥反應(yīng)等[8]。補(bǔ)脾消積口服液可明顯改善脾虛食積小鼠胃黏膜充血、腺體排列紊亂、小腸絨毛脫落、腸黏膜變短的現(xiàn)象,提示補(bǔ)脾消積口服液調(diào)節(jié)脾虛食積小鼠胃腸功能的機(jī)制可能與其改善胃腸組織形態(tài)相關(guān)。

      胃腸激素是消化道內(nèi)分泌細(xì)胞和神經(jīng)元釋放的肽,目前已知30 多種激素基因在胃腸道中表達(dá)[9]。GAS 是胃腸道上皮發(fā)育和腫瘤轉(zhuǎn)化過(guò)程中的營(yíng)養(yǎng)因子,可刺激胃底黏膜的酸分泌和生長(zhǎng),促進(jìn)消化功能[10];MTL 為上腸黏膜的內(nèi)分泌細(xì)胞,是胃腸運(yùn)動(dòng)的重要調(diào)節(jié)劑,MTL 與GAS 均為興奮性胃腸激素,可促進(jìn)胃腸道運(yùn)動(dòng),調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力。VIP 為抑制性胃腸激素,會(huì)使食管下括約肌松弛,當(dāng)VIP 表達(dá)增強(qiáng)后,食管下括約肌在行使其運(yùn)動(dòng)功能時(shí)會(huì)受到阻礙[11]。本實(shí)驗(yàn)表明補(bǔ)脾消積口服液可提高脾虛食積小鼠血清GAS、MTL 水平,降低VIP 水平,提示補(bǔ)脾消積口服液調(diào)節(jié)脾虛食積小鼠胃腸功能的機(jī)制可能與調(diào)節(jié)胃腸激素水平有關(guān)。

      腸道是人體內(nèi)細(xì)菌存在的主要場(chǎng)所,這些復(fù)雜多樣的細(xì)菌形成了腸道菌群。人類腸道中有1 000多種細(xì)菌,腸道菌群的組成和比例與人體健康密切相關(guān),擾亂腸道微生物平衡會(huì)導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)引發(fā)各種胃腸或全身性疾病[12]。研究表明,腸道菌群可能是中醫(yī)“脾”的物質(zhì)基礎(chǔ),而“脾”亦可能是維持腸道菌群穩(wěn)態(tài)的重要前提,脾主運(yùn)化功能健旺與腸道菌群維持穩(wěn)態(tài)共同保障機(jī)體吸收、代謝營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),腸道菌群平衡是“脾氣健運(yùn)”的重要體現(xiàn),腸道菌群紊亂是“脾失健運(yùn)”的病理體現(xiàn)。有研究證明,飲食結(jié)構(gòu)改變會(huì)影響腸道菌群結(jié)構(gòu),如高脂肪高糖飲食小鼠腸道菌群中擬桿菌門的比例降低,厚壁菌門的比例增加,并降低了腸道菌群多樣性[13]。本實(shí)驗(yàn)表明補(bǔ)脾消積口服液可提升脾虛食積小鼠腸道菌群多樣性,增加擬桿菌門比例,降低厚壁菌門比例,改善腸道菌群結(jié)構(gòu),提示補(bǔ)脾消積口服液調(diào)節(jié)脾虛食積小鼠胃腸功能的機(jī)制可能與其恢復(fù)腸道菌群結(jié)構(gòu)相關(guān)

      本研究結(jié)果通過(guò)小鼠胃排空及腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)表明補(bǔ)脾消積口服液可顯著促進(jìn)脾虛食積小鼠胃腸功能,其機(jī)制可能與補(bǔ)脾消積口服液改善脾虛食積小鼠胃腸組織形態(tài)、調(diào)節(jié)胃腸激素水平及恢復(fù)腸道菌群結(jié)構(gòu)等相關(guān)。

      利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

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