綿馬貫眾的研究進(jìn)展及質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測(cè)△

郭文勇，廖翠平，代金剛，高雅，阿拉坦朝魯門，額尼日勒，黨海霞，圖雅

1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中醫(yī)臨床基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，北京 100700；

2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，北京 100700；

3.內(nèi)蒙古民族大學(xué) 蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000；

4.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中醫(yī)藥研究發(fā)展中心，北京 100700

綿馬貫眾為鱗毛蕨科植物粗莖鱗毛蕨Dryopteris crassirhizomaNakai.的干燥根莖及葉柄殘基，異名貫眾、東北貫眾，主要產(chǎn)于黑龍江、遼寧、吉林等地[1-2]。其味苦、澀，性微寒，有小毒，歸肝、胃經(jīng)，具有清熱解毒、涼血止血、殺蟲(chóng)的功效，臨床多用于治療風(fēng)熱感冒，溫毒濕熱斑疹，吐血，咳血，便血，崩漏，血痢，帶下，鉤、蛔、絳蟲(chóng)等腸道寄生蟲(chóng)病，風(fēng)寒濕痹，腰膝酸軟，遺尿等[3-4]?，F(xiàn)代藥理研究表明，綿馬貫眾具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化等藥理活性[2]。綿馬貫眾近緣植物較多，臨床使用品種不一，影響其臨床用藥的安全性和有效性。本文基于中藥質(zhì)量標(biāo)志物（Q-marker）的核心概念[5]，結(jié)合文獻(xiàn)資料綜合分析預(yù)測(cè)綿馬貫眾的Q-marker，從化學(xué)成分的特有性、傳統(tǒng)藥性藥效理論、化學(xué)成分可測(cè)性、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方面對(duì)綿馬貫眾Q-marker 進(jìn)行預(yù)測(cè)，推動(dòng)建立科學(xué)合理的綿馬貫眾藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)體系。

1 本草考證

綿馬貫眾始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為下品，曰：“一名貫節(jié)，一名貫渠，一名百頭”[6]?！吨袊?guó)藥材學(xué)》中對(duì)貫眾原植物的描述為“多年生草本，根莖短，斜生或直立，連同葉柄基部密生闊卵狀披針形黑褐色大鱗片。葉簇生，羽片鐮狀披針形，基部上側(cè)呈耳狀，邊緣有細(xì)鋸齒，葉脈網(wǎng)狀。孢子囊群生于羽片下面的內(nèi)藏小脈頂端，囊群蓋大，圓盾形”[7]。中藥貫眾基原植物構(gòu)成較為復(fù)雜，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道我國(guó)中藥貫眾的基原植物不少于35 種，分屬于6科12 屬[8]?！吨兴幋筠o典》中記載貫眾的原植物有7種[9]。其中，鱗毛蕨科植物粗莖鱗毛蕨D.crassirhizomaNakai.是貫眾最主要的基原植物，綿馬貫眾為貫眾的正品。在《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）1977 年版中對(duì)貫眾相關(guān)近緣藥用植物的記載為粗莖鱗毛蕨D.crassirhizomaNakai.和紫萁貫眾Osmunda japonicaThunb.2 種[10]，自《中國(guó)藥典》1995 年版起均將綿馬貫眾單列[4,11]。因綿馬貫眾基原植物歷史記載較為混亂，目前研究多通過(guò)紅外指紋圖譜[12]、質(zhì)體基因組及組成分析[13]、基因測(cè)序技術(shù)[14-15]等方法對(duì)綿馬貫眾進(jìn)行鑒定和質(zhì)量評(píng)價(jià)。

2 化學(xué)成分

綿馬貫眾中含有多種類型化合物，如間苯三酚類、黃酮類、萜類、甾體類、苯丙素類、脂肪族類、苷類和多糖等物質(zhì)[18-50]。

2.1 間苯三酚類

間苯三酚類化合物是綿馬貫眾的主要活性成分[16]，且是抗流感病毒的主要有效成分[17]。目前從綿馬貫眾中分離得到的間苯三酚類化合物有39個(gè)，并根據(jù)環(huán)數(shù)目將其分類[2]。綿馬貫眾中間苯三酚類化合物詳情見(jiàn)表1，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)增強(qiáng)出版附加材料。

表1 綿馬貫眾中的間苯三酚類化合物

2.2 黃酮類

綿馬貫眾中黃酮類化合物見(jiàn)表2，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)增強(qiáng)出版附加材料。高增平[23]對(duì)綿馬貫眾進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，分離鑒定獲得 [2R,3R]-2,3-順-3,5,7,3′,5′-五羥基黃烷-8-C-α-D-吡喃葡萄糖苷（[2R,3R]-2,3-cis-3,5,7,3′,5′-pentahydroxyflavan-8-C-α-Dglucopyranoside）。Lee等[35]通過(guò)生物追蹤分離法從綿馬貫眾中分離鑒定獲得包括綿馬貫眾苷A（crassirhizomoside A）在內(nèi)的10個(gè)黃酮類化合物。

表2 綿馬貫眾中的黃酮類化合物

2.3 萜類

目前，已從綿馬貫眾中分離獲得24 個(gè)萜類化合物，主要為單萜類及三萜類化合物，詳情見(jiàn)表3，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)增強(qiáng)出版附加材料。

2.4 甾體類

周榮華[38]通過(guò)色譜和化學(xué)分離技術(shù)從綿馬貫眾中獲得牛膝甾酮A（inokosterone A）和坡那甾酮A（ponasterone A）2 種甾體類化合物。袁麗鵬等[49]采用液相色譜等方法從綿馬貫眾石油醚提取物中分離鑒定出3 個(gè)甾體類化合物。綿馬貫眾中甾體類化合物詳情見(jiàn)表4，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)增強(qiáng)出版附加材料。

2.5 苯丙素類

有研究利用波譜技術(shù)和化學(xué)方法從綿馬貫眾中分離出咖啡酸（caffeic acid，92）[23]。Min 等[36]報(bào)道運(yùn)用多種現(xiàn)代分離和波譜技術(shù)從綿馬貫眾乙醇部位獲得 (7S,8R)-二氫脫氫二松柏基醇-9′-O-β-葡萄糖苷（93）和4,7,9,9′-四羥基-3,3′-二甲氧基-8-O-4′-新木質(zhì)素-9′-O-β-D-葡萄糖苷（94）。鄒月紅[50]利用硅膠、十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）及高效液相色譜法（HPLC）等多種分離手段對(duì)東北貫眾60%乙醇組分進(jìn)行分離純化獲得對(duì)羥基苯基丙烯酸（95）。

2.6 脂肪族類

高增平等[41]采用氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）從綿馬貫眾中首次分離鑒定獲得9 個(gè)脂肪族類化合物，分別為丁基環(huán)己烷、1-甲基乙基-環(huán)己烷、9-(1-甲基亞乙基)-二環(huán)[6.1.0]壬烷、環(huán)己烷基環(huán)己烷、3,7,11-三甲基-2,6,10-三烯十二烷-1-醇、順式十氫萘、2,3,4,4a,5,6-六氫-1,4a-二甲基-7-(1-甲基乙基)-萘、[1aR-(1aα,7α,7a,7b)]-1a,2,3,5,6,7,7a,7b-八氫-1,1,7,7a-四甲基-1H-環(huán)丙烷[a]萘、2-[(2R)-羥基-正二十一碳?；鵠-(3R,4S)-二羥基-(2S,3R,4S)-正十八烷三醇。綿馬貫眾中脂肪族類化合物詳情見(jiàn)表5，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)增強(qiáng)出版附加材料。

2.7 糖類

Chang等[34]通過(guò)多種色譜技術(shù)從綿馬貫眾中分離鑒定出鱗毛蕨苷和1-β-D-glucopyranosyloxy-3-methoxy-5-hydroxybenzene 2 種糖苷類化合物。有研究報(bào)道從綿馬貫眾乙醇部位獲得3-甲基-2,6-二羥基-4-O-β-D-半乳糖基-苯乙酮[36]。高增平等[22-23]從綿馬貫眾甲醇提取物中測(cè)得蔗糖、β-D-吡喃果糖、α-D-呋喃果糖和β-D-呋喃果糖。綿馬貫眾中糖類化合物詳情見(jiàn)表6，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)增強(qiáng)出版附加材料。

表6 綿馬貫眾中的糖類化合物

2.8 色原酮類

有研究通過(guò)多種色譜技術(shù)從綿馬貫眾中分離鑒定出色原酮類化合物雙花母草素（biflorin，123）、異雙花母草素（isobiflorin，124）[34]，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)增強(qiáng)出版附加材料。

3 藥理作用

3.1 抑菌、抗菌作用

胡昌江等[51]以金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、類白喉?xiàng)U菌等9 個(gè)菌種的生長(zhǎng)活性為指標(biāo)，對(duì)綿馬貫眾飲片進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其具有較強(qiáng)的抑菌活性。陳紅云等[52]采用藥敏實(shí)驗(yàn)篩選了綿馬貫眾的抗菌活性部位，發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾甲醇總提取物的抗菌活性弱于單個(gè)提取部位，其中石油醚提取物和正丁醇提取物具有明顯的抗金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌的活性。賈小舟等[53]研究了綿馬貫眾中3個(gè)間苯三酚類成分對(duì)3種真菌的抑菌活性，發(fā)現(xiàn)3個(gè)間苯三酚類成分對(duì)紅色毛癬菌和犬小孢子菌的抑菌活性均優(yōu)于對(duì)須癬毛癬菌的抑菌活性。此外，有研究表明，綿馬貫眾不同萃取部位的抑菌活性與用藥量呈正相關(guān)，其中三氯甲烷萃取部位和乙酸乙酯萃取部位的抑菌活性較強(qiáng)，水萃取部位的抑菌活性最小[54]。劉釗[55]采用正己烷、三氯甲烷、丙酮和乙醇對(duì)綿馬貫眾中抗感染部位進(jìn)行洗脫，并對(duì)這4 個(gè)部分分別進(jìn)行藥理活性篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)4 個(gè)部分均具有抗菌活性，且抗革蘭陽(yáng)性菌活性優(yōu)于抗革蘭陰性菌和真菌，其中正己烷部分抗革蘭陽(yáng)性菌能力較強(qiáng)；同時(shí)進(jìn)一步對(duì)正己烷部分分離出的4 個(gè)間苯三酚類化合物進(jìn)行活性篩選，發(fā)現(xiàn)黃綿馬酸AB抗菌活性較強(qiáng)。董小云[56]以金黃色葡萄球菌血管性血友病因子結(jié)合蛋白（vWbp）作為藥物作用靶點(diǎn)，研究綿馬貫眾素對(duì)vWbp活性、金黃色葡萄球菌體外導(dǎo)管感染模型和金黃色葡萄球菌感染小鼠腎膿腫的影響，結(jié)果表明綿馬貫眾素可直接與vWbp 相結(jié)合，通過(guò)抑制vWbp 活性而降低金黃色葡萄球菌毒力。Li 等[57]研究發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾素ABBA 可減輕由金黃色葡萄球菌引起的小鼠肺組織損傷和炎癥，并采用分子動(dòng)力學(xué)模擬研究方法證實(shí)ABBA 可通過(guò)蛋白殘基Arg-70、His-71、Ala-72、Gly-73、Tyr-74、Glu-75、Tyr-83、Gln-87與vWbp 相互作用，從而干擾vWbp 與凝血酶原的結(jié)合。高云飛等[58]采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定綿馬貫眾素ABBA 對(duì)馬鈴薯干腐病4 種主要致病鐮孢菌的抑制效果，并研究不同質(zhì)量濃度的綿馬貫眾素ABBA 對(duì)接骨木鐮孢菌菌絲和孢子萌發(fā)率的影響，結(jié)果顯示其對(duì)4 種鐮孢菌均有一定的抑制作用，質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1時(shí)對(duì)接骨木鐮孢菌抑制率高達(dá)95.2%，且在0.5 mg·mL-1時(shí)可有效抑制接骨木鐮孢菌孢子的萌發(fā)。Jung 等[59]發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾正己烷餾分中的亞油酸是其最有效的抗菌成分，可通過(guò)抑制生物膜形成而降低變形鏈球菌的細(xì)胞活力。并且有研究報(bào)道綿馬貫眾的甲醇提取物對(duì)變形鏈球菌具有殺菌和抑菌活性[60]。

3.2 抗病毒作用

3.2.1 抗流感病毒 楊關(guān)林等[61]采用雞胚體外抗病毒實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)了綿馬貫眾、黃芩、金銀花、苦參和連翹的抗病毒活性，結(jié)果顯示綿馬貫眾對(duì)甲型流感病毒FM1 株的預(yù)防和治療作用均優(yōu)于其他4 味中藥。陳建新等[30]采用高效液相色譜-質(zhì)譜法對(duì)綿馬貫眾抗禽流感病毒活性部位進(jìn)行分離檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)多聚間苯三酚類衍生物是其主要活性成分。孫科峰等[62]通過(guò)小鼠實(shí)驗(yàn)觀察綿馬貫眾水、乙醇2 種提取物對(duì)滴鼻感染FM1 株流感病毒的小鼠肺指數(shù)的影響，發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾的水和乙醇提取物均有一定的抗病毒作用，可減低病毒引起的肺損傷。閆艷韜等[63]通過(guò)分子對(duì)接方法篩選出與H1N1 流感病毒神經(jīng)氨酸酶（NA）有較好結(jié)合的4 種化合物（綿馬酸ABA、綿馬酸ABB、綿馬酸ABP、綿馬貫眾素ABBA），并對(duì)其進(jìn)行活性驗(yàn)證，結(jié)果表明綿馬貫眾素ABBA 對(duì)NA 抑制作用最強(qiáng)，半數(shù)抑制濃度（IC50）值為（26.73±0.57）μmol·L-1。王娟[64]采用分子對(duì)接技術(shù)篩選獲得6 個(gè)間苯三酚類候選化合物，通過(guò)體內(nèi)外活性實(shí)驗(yàn)及免疫機(jī)制研究，發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾素ABBA、綿馬酸ABA 具有較強(qiáng)的抗NA 作用，且與陽(yáng)性對(duì)照藥奧司他韋相比綿馬貫眾素ABBA 具有較好的直接殺滅病毒的作用，其作用靶點(diǎn)可能為神經(jīng)氨酸酶；體內(nèi)小鼠實(shí)驗(yàn)也表明綿馬貫眾素ABBA 可通過(guò)降低促炎因子白細(xì)胞介素-6（IL-6）、IL-12、γ-干擾素（INFγ）、IL-10 和增加抗炎因子人單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等表達(dá)減輕感染病毒小鼠的肺部炎癥。劉暢等[65]采用犬腎MDCK 細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞病變法（CPE）對(duì)具有NA 抑制活性的綿馬貫眾素ABBA 抗病毒活性進(jìn)行驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其對(duì)多種流感病毒毒株均具有良好的抑制作用。此外，有研究報(bào)道綿馬貫眾中化合物綿馬貫眾素ABBA 具有較好的抗H5N1、H7N9 流感病毒NA的作用[66-68]。

3.2.2 抗冠狀病毒 Jin 等[69]通過(guò)免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾素ABBA 和綿馬酸ABA 可抑制嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2 型（SARS-CoV-2）蛋白酶活性，并對(duì)新型冠狀病毒（COVID）-19 等冠狀病毒感染有一定治療作用。

3.2.3 抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）Yang 等[70]采用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃綿馬酸AB 可通過(guò)誘導(dǎo)豬肺泡巨噬細(xì)胞中的IFN-α、IFN-b、IL-1b表達(dá)，達(dá)到抑制PRRSV復(fù)制的作用。

3.2.4 抗乙肝病毒及護(hù)肝降酶作用 袁麗鵬[71]通過(guò)反相被動(dòng)血凝抑制實(shí)驗(yàn)（RPHI）發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾具有抗乙肝病毒活性。鄭民實(shí)等[72]利用ELISA技術(shù)對(duì)250種中草藥水提物進(jìn)行HBsAg 實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明貫眾水提物（0.05 mg·mL-1）可有效地抗乙肝病毒。有文獻(xiàn)報(bào)道綿馬貫眾有效組分（100 mg·kg-1）能使α-半乳糖胺鹽誘導(dǎo)的小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（SGPT）水平升高、血清蛋白水平降低，恢復(fù)至正常水平；能使小鼠肝糖原含量顯著升高，但不能恢復(fù)到正常水平[73]。韋四煌等[74]發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾提取物高、中、低3個(gè)劑量（50、100、200 mg·kg-1）均可明顯降低CCl4肝損傷小鼠模型組和D-氨基半乳糖肝損傷小鼠模型組的血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）含量和肝勻漿的丙二醛（MDA）含量，但對(duì)血清天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）的含量無(wú)明顯影響。

3.2.5 抗艾滋病毒（HIV）有研究發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾和其他多種藥物具有抑制HIV 的作用[75]。張麗霞[37]從綿馬貫眾根的甲醇提取液中分離得到了5 種化合物，并對(duì)其進(jìn)行HIV 逆轉(zhuǎn)錄活性篩選，結(jié)果顯示綿馬貫眾A、綿馬貫眾苷C、霍苷A和山柰素對(duì)與HIV逆轉(zhuǎn)錄相關(guān)的DNA 聚合酶（DDDP）有較好的抑制活性。

3.2.6 抗腺病毒Ⅲ型和單純皰疹病毒Ⅰ型 有研究報(bào)道綿馬貫眾對(duì)腺病毒Ⅲ型、皰疹病毒有較強(qiáng)的作用；其水和醇提取物對(duì)腺病毒Ⅲ型、脊髓灰質(zhì)炎Ⅱ型、?？垄?、柯薩奇A9 型、柯薩奇B3 型、柯薩奇B5型、乙型腦炎、單純皰疹等代表性病毒株有較強(qiáng)的抗病毒作用[32,76-78]。

3.3 抗腫瘤作用

Lee等[79]建立牙齦鱗狀細(xì)胞癌侵襲下頜小鼠模型和無(wú)胸腺小鼠模型，采用人類蛋白酶陣列研究方法，發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾乙醇提取物具有抗侵襲和抗牙齦鱗狀細(xì)胞癌作用。有研究報(bào)道綿馬貫眾素ABBA 可能通過(guò)半胱天冬酶介導(dǎo)的線粒體途徑誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡[80]。金哲[81]采用MTT 法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，綿馬貫眾素ABBA可抑制人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞、人肝癌HepG2 細(xì)胞和人乳腺癌MCF-7 細(xì)胞，其中HepG2細(xì)胞對(duì)其最敏感。劉釗[55]研究發(fā)現(xiàn)，黃綿馬酸AB具有抗腫瘤活性。

3.4 抗氧化作用

劉乙等[82]采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）法和鐵離子還原/總抗氧化能力（FRAP）法發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾甲醇提取液可有效清除DPPH 自由基，且其對(duì)DPPH 自由基清除活性與鐵離子還原能力增強(qiáng)的趨勢(shì)基本一致。李佳穎等[83]報(bào)道綿馬貫眾多糖具有很強(qiáng)的DPPH 自由基清除活性、羥基自由基清除活性，且對(duì)DNA 的氧化損傷有顯著的保護(hù)作用。多項(xiàng)研究表明，綿馬貫眾總多酚、黃綿馬酸PB及黃綿馬酸AB 具有有效的抗氧化活性，其中，黃綿馬酸PB、黃綿馬酸AB 可抑制脂質(zhì)過(guò)氧化[84-85]。Zhao 等[86]利用陰離子交換色譜法（DEAE-52）和Sephadex G-100柱從綿馬貫眾中純化獲得1種新型三螺旋多糖的酸性多糖組分（DCP-3），發(fā)現(xiàn)其對(duì)DPPH 自由基、羥基自由基和超氧陰離子具有很強(qiáng)的清除活性，并能還原鐵離子。

3.5 驅(qū)蟲(chóng)作用

有研究表明，綿馬貫眾可通過(guò)破壞線蟲(chóng)體表的防御結(jié)構(gòu)和體內(nèi)的超微結(jié)構(gòu)，干擾線蟲(chóng)體內(nèi)的新陳代謝，使線蟲(chóng)體內(nèi)的保護(hù)酶系和神經(jīng)傳導(dǎo)酶系活性表達(dá)失衡，而抑制南方根結(jié)線蟲(chóng)；總間苯三酚含量與綿馬貫眾殺蟲(chóng)活性存在一定的相關(guān)性，乙酸乙酯萃取段是魚(yú)類指環(huán)蟲(chóng)的最佳殺蟲(chóng)部位[87-88]；白綿馬素AP、霍苷A 和山柰苷具有顯著的殺滅線蟲(chóng)活性，其中，白綿馬素AP 可使指環(huán)蟲(chóng)體壁結(jié)構(gòu)出現(xiàn)應(yīng)激變化，皮層產(chǎn)生孔洞、突起等多種損傷[89-90]。Lu等[91]研究發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾甲醇提取物對(duì)金魚(yú)鰓部的中型指環(huán)蟲(chóng)有顯著的殺滅作用。趙玉敏等[92]利用均勻設(shè)計(jì)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，發(fā)現(xiàn)粗莖鱗毛蕨乙醇提取物對(duì)菜青蟲(chóng)有拒食作用。

3.6 止血作用

熊威等[93]采用小鼠斷尾和肝臟出血實(shí)驗(yàn)研究綿馬貫眾炭碳點(diǎn)（DCC-CDs）的止血作用，發(fā)現(xiàn)DCC-CDs 具有良好的止血效果，能顯著減少小鼠斷尾和肝臟出血時(shí)間。

3.7 調(diào)節(jié)免疫

張強(qiáng)等[94]建立人工感染雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）模型，研究綿馬貫眾可溶性粉對(duì)IBDV的治療效果，結(jié)果顯示，綿馬貫眾可溶性粉（50 mg·kg-1）連續(xù)口服給藥5 d，可提高胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)而發(fā)揮免疫增強(qiáng)功效。Fu 等[95]通過(guò)體外脂多糖（LPS）刺激活化的小鼠骨髓衍生樹(shù)突狀細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)同種異體皮膚抑制實(shí)驗(yàn)研究綿馬貫眾素的免疫調(diào)節(jié)活性，結(jié)果顯示綿馬貫眾素可抑制樹(shù)突狀細(xì)胞的免疫刺激功能，并延長(zhǎng)了皮膚同種異體移植物的存活時(shí)間。有研究報(bào)道綿馬貫眾中的山柰素-3-O-α-L-(4-O-乙?；?鼠李糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷可提高草魚(yú)的溶菌酶活性、補(bǔ)體C3、超氧化物歧化酶（SOD）、吞噬活性和免疫球蛋白M（IgM）水平[33]。Wang 等[96]測(cè)定了經(jīng)粗莖鱗毛蕨（DCR）處理的斑馬魚(yú)胚胎中黑色素含量和酪氨酸酶活性，結(jié)果表明DCR 以劑量依賴性方式顯著降低了斑馬魚(yú)胚胎中的黑色素含量和酪氨酸酶活性。

3.8 其他

田雪松等[97]研究綿馬貫眾水煎劑對(duì)去卵巢肥胖大鼠的影響，發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾水煎劑可明顯抑制去卵巢肥胖大鼠的體質(zhì)量增加、降低血清MDA水平、升高血清雌激素水平。Ha 等[98]通過(guò)小鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)粗莖鱗毛蕨水提物不僅通過(guò)抑制破骨細(xì)胞前體中的核轉(zhuǎn)錄因子受體激活劑-κB配體（RANK）信號(hào)通路抑制破骨細(xì)胞分化，并可破壞成熟破骨細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白環(huán)而抑制骨吸收。有研究報(bào)道綿馬貫眾中的丁酰-3-甲基間苯三酚對(duì)膠原和花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集有顯著的抑制活性[99]。高增平等[100]發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾的石油醚和乙酸乙酯萃取部位具有抗瘧活性。

4 綿馬貫眾的Q-marker的預(yù)測(cè)

中藥Q-marker 由劉昌孝院士于2016 年針對(duì)中藥質(zhì)量研究提出，以有效性、特有性、傳遞性與溯源性、可測(cè)性和處方配伍為核心內(nèi)容，追蹤可反映中藥安全性和有效性的標(biāo)志性物質(zhì)的概念[5]。本研究基于植物親緣學(xué)及化學(xué)成分特有性證據(jù)、傳統(tǒng)藥性藥效、化學(xué)成分可測(cè)性和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)5 個(gè)方面對(duì)綿馬貫眾進(jìn)行Q-marker預(yù)測(cè)分析。

4.1 基于植物親緣學(xué)及化學(xué)成分特有性的Q-marker預(yù)測(cè)分析

藥用植物親緣學(xué)研究是用于探索藥用植物的親緣關(guān)系-化學(xué)成分-療效間相關(guān)性，對(duì)中藥植物資源開(kāi)發(fā)具有重要指導(dǎo)意義[101]?；瘜W(xué)成分特有性可作為中藥鑒別、質(zhì)量評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制的衡量標(biāo)準(zhǔn)[102]，也是進(jìn)行藥用植物Q-marker 預(yù)測(cè)分析不可或缺的一部分。

據(jù)調(diào)查，全國(guó)中藥貫眾的原植物至少有35 種，分屬于6科12屬，曾用作貫眾的原植物有11科18屬58 種（含2 變種1 變形），經(jīng)1986—1987 年對(duì)全國(guó)商品貫眾品種的調(diào)查，確定了10 個(gè)主要品種[7,22,77]。高增平等[103]對(duì)我國(guó)31 省市56 份商品貫眾樣品進(jìn)行研究，結(jié)果表明目前我國(guó)臨床上使用的商品貫眾共有7 種植物來(lái)源，分屬于4 個(gè)科5 個(gè)屬，分別為鱗毛蕨科鱗毛蕨屬植物粗莖鱗毛蕨D.crassirhizomaNakai.、遼東鱗毛蕨D.peninsulaeKitag.，蹄蓋蕨科峨眉蕨屬植物峨眉蕨Lunathyrium acrostichoides，烏毛蕨科狗脊蕨屬植物狗脊蕨Woodwardia japonica、單芽狗脊蕨Woodwardia unigemmata，烏毛蕨科烏毛蕨屬植物烏毛蕨Blechnum orientale，球子蕨科莢果蕨屬植物莢果蕨Matteuccia struthiopteris。羅愛(ài)國(guó)等[104]對(duì)我國(guó)5 個(gè)地區(qū)（河北、內(nèi)蒙古、山西、重慶及山東）商品貫眾進(jìn)行品種鑒定，結(jié)果表明5 個(gè)地區(qū)的貫眾分屬3 個(gè)種，河北、內(nèi)蒙古及山西商品貫眾為綿馬貫眾正品（粗莖鱗毛蕨），重慶的貫眾為狗脊蕨，山東地區(qū)的貫眾為莢果蕨，5 個(gè)地區(qū)的貫眾均含有活性成分間苯三酚類化合物、鞣質(zhì)，間苯三酚類化合物含量最高為粗莖鱗毛蕨，其次為莢果蕨，最少為狗脊蕨。有研究報(bào)道，烏毛蕨、狗脊蕨、莢果蕨等蕨類植物是富含黃酮類化合物的植物資源[105-106]。因此，基于上述藥用植物親緣性和化學(xué)成分特有性分析，間苯三酚類、黃酮類成分可作為綿馬貫眾Q-marker篩選的重要參考。

4.2 基于傳統(tǒng)藥性藥效的Q-marker預(yù)測(cè)分析

綿馬貫眾味苦澀，性微寒，具有清熱解毒等功效。中藥臨床藥理研究表明，寒涼性藥物主要抑制機(jī)體能量和物質(zhì)代謝，具有抗細(xì)菌、抗真菌作用，其含有的化學(xué)成分以苷類、生物堿類、黃酮類居多[107-109]。陶瑾等[110]以中藥藥性理論為基礎(chǔ)，并利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法，發(fā)現(xiàn)苦味藥以黃酮和生物堿為主要活性成分。因此黃酮可被初步篩選為綿馬貫眾Q-marker 的參考。綿馬貫眾多用于預(yù)防流行性感冒，治療溫毒濕熱斑疹，吐血，咳血，便血，崩漏，血痢，帶下，鉤、蛔、絳蟲(chóng)等腸道寄生蟲(chóng)病[5]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾具有抗病毒[60]、抗菌[50]、抗腫瘤[78]、抗氧化[81]、止血[92]、驅(qū)蟲(chóng)[86]等藥理作用。綿馬貫眾中含有的間苯三酚類成分，如黃綿馬酸AB、綿馬酸ABA、綿馬酸ABB、綿馬酸ABP、綿馬貫眾素ABBA 等，也具有抗菌[52]、抗真菌[57]、抗病毒[68]、抗腫瘤[54,79]、抗氧化[84]、驅(qū)蟲(chóng)[86-89]、調(diào)節(jié)免疫[93]等藥理活性；其黃酮類成分，如綿馬貫眾苷、山柰素、霍苷A，具有抗艾滋病毒[37]、驅(qū)蟲(chóng)[88-89]、調(diào)節(jié)免疫[32]等藥理作用；綿馬貫眾多糖成分具有抗氧化[82,85]等藥理活性，與綿馬貫眾傳統(tǒng)功效清熱解毒、涼血止血、殺蟲(chóng)相呼應(yīng)。因此，間苯三酚類、黃酮類及多糖類化合物可作為綿馬貫眾Q-marker 篩選的參考。

4.3 基于化學(xué)成分可測(cè)性的Q-marker預(yù)測(cè)分析

化學(xué)成分可測(cè)性是確定中藥Q-marker 的基本條件之一，目前主要采用超高效液相色譜法（UPLC）、氣相色譜法、薄層色譜法、紫外-可見(jiàn)分光光度法、陰離子交換樹(shù)脂法等對(duì)中藥成分進(jìn)行定性和定量分析。賈瑩瑩等[111]使用紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)綿馬貫眾總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示綿馬貫眾總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.033 mg·g-1。劉暢等[31]采用UPLC同時(shí)測(cè)定綿馬貫眾抗病毒有效部位中綿馬酸ABB、綿馬貫眾素ABBA 和綿馬貫眾素ABBP 的含量，可為綿馬貫眾及其抗流感病毒有效部位的質(zhì)量控制提供參考。司云珊等[112]建立反向高效液相色譜法（RPHPLC）對(duì)綿馬貫眾中綿馬貫眾素進(jìn)行分離，定量測(cè)定綿馬貫眾素的含量，用于綿馬貫眾的質(zhì)量控制。曹廣尚等[113]利用陰離子交換樹(shù)脂分離純化綿馬貫眾總多酚，該方法效率高、成本低。劉計(jì)權(quán)等[114]采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定綿馬貫眾不同萃取部位總間苯三酚的含量，測(cè)得綿馬貫眾中總間苯三酚類化合物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10.03%。由此可見(jiàn)，間苯三酚類成分如綿馬貫眾素ABBA、綿馬貫眾素ABBP 可能與綿馬貫眾藥效作用密切相關(guān)，可作為綿馬貫眾Qmarker的候選化合物。

4.4 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的Q-marker預(yù)測(cè)分析

通過(guò)PubChem 小分子化合物數(shù)據(jù)庫(kù)（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）、中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)及分析平臺(tái)（TCMSP，http：//tcmspw.com/tcmsp.php）和已發(fā)表文獻(xiàn)，建立綿馬貫眾的化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)集共124 個(gè)化合物。依據(jù)口服生物利用度（OB）和類藥性（DL）進(jìn)行篩選，共篩選出26個(gè)候選活性成分。將活性成分輸入SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行目標(biāo)靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，以置信度（probability）>0.1 為條件[115]，篩選去重后獲得258 個(gè)靶點(diǎn) [白綿馬素AA、綿馬酸BBB、(+)-兒茶素和 (-)-兒茶素?zé)o符合條件靶點(diǎn)]，并進(jìn)一步預(yù)測(cè)了其可能的蛋白作用靶點(diǎn)，活性成分靶點(diǎn)圖見(jiàn)增強(qiáng)出版附加材料。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)，建議以鐵線蕨酮、白綿馬素AP、白綿馬素BB、綿馬素BB、雙花母草素、丁基環(huán)己烷、咖啡酸、石竹烯、海綿甾醇、大豆素、胡蘿卜苷、里白烯、里白醇、雁齒烯、二十六烷酸、22(29)-何帕烯、何帕醇、山柰素、橙花叔醇、二十五烷醇、十八烷酸、蔗糖22 個(gè)化合物作為綿馬貫眾的Qmarker篩選范圍。

5 結(jié)語(yǔ)與展望

綿馬貫眾是常用中藥，具有廣泛的藥理作用，臨床療效顯著。本文通過(guò)文獻(xiàn)考證，鱗毛蕨科植物粗莖鱗毛蕨D.crassirhizomaNakai.的干燥根莖及葉柄殘基為綿馬貫眾的正品?；谥兴嶲-marker 理論，結(jié)合其化學(xué)成分、現(xiàn)代藥理活性研究等方面，推測(cè)間苯三酚類和黃酮類可作為其Q-marker，例如，黃綿馬酸AB、綿馬酸ABA、綿馬酸ABB、綿馬酸ABP、綿馬貫眾素ABBA、綿馬貫眾苷、山柰素、霍苷A 等化合物?；谥兴幩幮浴⒅兴幩幮曰瘜W(xué)等理論對(duì)綿馬貫眾Q-marker 的預(yù)測(cè)分析結(jié)果，將進(jìn)一步對(duì)綿馬貫眾的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、炮制、藥動(dòng)學(xué)等方面進(jìn)行深入的研究，以期為建立綿馬貫眾臨床運(yùn)用的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)體系提供科學(xué)依據(jù)。