紫外分光光度法對(duì)藥物中人參皂苷Rb1含量的測(cè)定

蔣麗萍,孫月新,陳波,干鈺珅

(浙江海運(yùn)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,浙江 舟山 316021)

人參皂苷是一種固醇類的化合物,主要存在于一些中草藥中,這些中草藥中有效活性成分人參皂苷類化合物種類多種多樣,其中人參皂苷Rb1 是多種人參皂苷中較豐富和較有生物活性的大分子化合物,研究表明人參皂苷Rb1具有調(diào)節(jié)血糖、消炎、抗氧化和保護(hù)神經(jīng)組織等多種藥理活性,具有增強(qiáng)膽堿系統(tǒng)的功能,增加乙酰膽堿的合成和釋放以及改善記憶力作用。它屬于三萜皂苷類化合物,主要分布于五加科植物人參、三七、西洋參等中草藥中,具有抗衰老、抗腦缺血損傷、促進(jìn)周圍神經(jīng)細(xì)胞再生、改善學(xué)習(xí)記憶功能、抗腫瘤、降血糖和抗應(yīng)激等作用[1],尤其是在神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)以及抗腫瘤、抗肝損傷等方面具有很好的藥用價(jià)值[2-3]。除了藥用,近年來(lái)人參用在護(hù)膚保養(yǎng)方面的效果尤為突出,多位學(xué)者研究證實(shí)人參中的多種活性成分對(duì)皮膚有非常好的保護(hù)和保養(yǎng)作用。人參皂苷對(duì)自由基所造成的細(xì)胞組織代謝反應(yīng)有著延長(zhǎng)和減少的作用,并且可以改善細(xì)胞、組織、器官和機(jī)體功能,幫助皮膚保持活力,延緩衰老。對(duì)皮膚美白、抗氧化、清除自由基、防輻射都有著非常好的作用[4-5]。

目前隨著科技的發(fā)展,人參皂苷檢測(cè)方法越來(lái)越多,也越來(lái)越先進(jìn),常見的人參皂苷測(cè)定方法有很多[6],張俏等人采用薄層色譜法[7-9]對(duì)復(fù)視明膠囊中人參皂苷Rb1等進(jìn)行定性鑒別與含量,薄層色譜斑點(diǎn)顯色清晰,陰性對(duì)照無(wú)干擾;楊艷文等利用高效液相色譜法[10-14]對(duì)存在于人參制劑中的20種人參皂苷進(jìn)行含量測(cè)定;李佳等用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法[15-16]在214 nm波長(zhǎng)處對(duì)西洋參中所含的人參皂苷Rg1、Re及Rb1進(jìn)行分離測(cè)定;石婧婧等采用超快速液相色譜質(zhì)譜連用[17-18]對(duì)處于不同貯藏條件下的紅參中人參皂苷Rc、Rb2、Rb1、Rd、Re、Rg1 等多種皂苷類成分同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定;孟軍等采用MS和核磁共振譜法[19]對(duì)人參葉里分離得到的 5個(gè)未知微量化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定;杜金鳳等用比色法[20]對(duì)人參保健飲料中人參總皂苷含量進(jìn)行了測(cè)定。本試驗(yàn)選用紫外可見分光光度法測(cè)定人參皂苷Rb1的含量,紫外可見分光光度法有簡(jiǎn)單易操作和檢測(cè)快速實(shí)用等多種優(yōu)點(diǎn)[21],應(yīng)用范圍非常廣泛,是日常常用的快速分析和檢測(cè)方法之一。

1 試藥與儀器

人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品(成都曼斯特生物科技有限公司),參苓白術(shù)丸(山東孔圣堂制藥有限公司),實(shí)驗(yàn)所用的試劑均為分析純,水為超純水。

紫外可見分光光度計(jì)(北京普西T6),去離子純水機(jī)(力康Heal Force Easy15),離心機(jī)(賽默飛ST16),分析天平(奧豪斯 PR124ZH/E)等。

2 方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

本試驗(yàn)考察了超純水和多種有機(jī)溶劑對(duì)人參皂苷Rb1溶解度和吸光度的影響,人參皂苷Rb1在水、甲醇和乙醇中溶解度較大,吸光度在超純水中比較大,且安全性較好,也符合日常使用人參皂苷的生活習(xí)慣,最終選擇超純水做為溶劑。

在分析天平上準(zhǔn)確稱取0.200 0 g人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品,用超純水配置成50.00 mL溶液。然后準(zhǔn)確移取適量該溶液,用超純水配置成800.00 μg/ml的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

將配置好的人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至適宜的濃度,用紫外可見分光光度計(jì)在190～250 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)該溶液的吸光度進(jìn)行測(cè)量,檢測(cè)結(jié)果如圖1所示,待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品在波長(zhǎng)λ=200 nm處有最大吸收值,因此本試驗(yàn)選用200 nm為人參皂苷Rb1的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品紫外吸收光譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

從人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)溶液中分別移取不同量的溶液進(jìn)行稀釋,分別得到溶液濃度為8.00,40.00,80.00,160.00,320.00,480.00 μg/mL的人參皂苷Rb1溶液。然后用紫外可見分光光度計(jì)對(duì)其吸光度進(jìn)行了測(cè)定,并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,試驗(yàn)結(jié)果如圖2所示,人參皂苷Rb1含量在8.00～480.00 μg/mL時(shí)吸光度與濃度呈成較好的線性關(guān)系。該線性方程為A=0.003 93c+0.033 19,R=0.998 7。

圖2 人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)曲線

3 結(jié)果與分析

3.1 藥品中人參皂苷的測(cè)定

取含有人參皂苷Rb1的藥物適量,用研缽將其研磨,準(zhǔn)確稱取適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量,用超純水在超聲破碎儀中超聲提取數(shù)小時(shí),然后定容至一定體積,再用離心機(jī)離心,經(jīng)過(guò)濾器過(guò)濾后,用紫外分光光度計(jì)于200 nm處,測(cè)定其吸光度。通過(guò)試驗(yàn)對(duì)藥品參苓白術(shù)丸中人參皂苷Rb1進(jìn)行檢測(cè)(表1),平行測(cè)定6次,人參皂苷Rb1的平均含量為24.40 mg/g,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.45%。

表1 藥品中人參皂苷的含量

3.2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

如表2對(duì)試樣進(jìn)行了加標(biāo)回收試驗(yàn),測(cè)得回收率在95.5%～102.0%之間,此方法的回收率良好,適用于對(duì)人參皂苷Rb1的檢測(cè)。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)論

通過(guò)試驗(yàn)可知,人參皂苷Rb1在波長(zhǎng)為200 nm 處吸光度與其濃度呈良好的線性關(guān)系,樣品的加標(biāo)回收率在95.5%～102.0%之間,此方法回收率較好,操作簡(jiǎn)單方便快速,所用試劑綠色環(huán)保,是檢測(cè)人參皂苷Rb1簡(jiǎn)單方便快速的優(yōu)良方法之一。