許 夢, 徐皓男, 周功強, 陳 浩

(1.安徽科技學院 動物科學學院,安徽 鳳陽 233100;2.安徽科技學院 生命與健康科學學院,安徽 鳳陽 233100;3.固鎮(zhèn)縣立業(yè)養(yǎng)殖專業(yè)合作社,安徽 固鎮(zhèn) 233704)

2019年7月10日,中國正式出臺了有關(guān)“飼料禁抗”的政策法規(guī),畜禽養(yǎng)殖業(yè)進入“無抗時代”[1],因此,尋找“綠色、高效、無副作用”的替抗產(chǎn)品已經(jīng)成為畜禽養(yǎng)殖業(yè)的研究熱點。百蕊草是我國民間常用的中草藥,且是具有較好的廣譜抗菌作用,屬檀香科、百蕊草屬半寄生多年生草本植物[2],分布于我國南北各地區(qū)。百蕊草最早記載于《圖經(jīng)本草》中,性辛,味苦澀,性寒而平緩,歸肺、脾、腎經(jīng),具有“植物抗生素”之美稱[3]。百蕊草主要包含黃酮類、有機酸、生物堿、甾醇、鞣質(zhì)、酚類、多糖、揮發(fā)油以及甘露醇等多種化學成分,具有抗菌消炎、清熱解毒、通順氣脈、補腎澀精、調(diào)氣等作用[4]。臨床上多用來治療呼吸道感染、各種肺炎、急性扁桃體炎、咽喉炎等病癥,且具有廣譜的抑菌作用[5]。蘇兵[6]研究了百蕊草片對呼吸系統(tǒng)感染患者的臨床治療效果,證明了百蕊草對呼吸系統(tǒng)感染疾病具有良好的治療效果。

百蕊草作為一種天然富含廣譜抗菌成分的中草藥,主要分布在我國南北各地,是安徽省傳統(tǒng)優(yōu)質(zhì)道地藥材代表之一,其中滁州產(chǎn)的百蕊草產(chǎn)品市場潛力巨大,對呼吸道感染疾病具有令人滿意的效果,但國內(nèi)外極少有關(guān)于百蕊草應用到肉雞方面的研究報道,因此,本試驗旨在研究不同濃度的百蕊草水提液對AA肉雞生長性能、免疫功能、血清抗氧化功能的影響,探究其作為中草藥飼料添加劑的功效,為推動畜禽健康養(yǎng)殖奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗百蕊草由安徽九華華源藥業(yè)有限公司提供。百蕊草水提液的制備:稱量1.25 kg干燥百蕊草置于鍋內(nèi),加入25 L水浸泡1 h,煎煮30 min后過濾,藥渣加12.5 L水,繼續(xù)煎煮30 min后過濾,合并2次濾液,濃縮成5 L百蕊草水提液,置于4 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗設(shè)計

試驗選擇遺傳背景相同、同一批次、體質(zhì)量均勻、健康狀況良好的1日齡健康A(chǔ)A肉雞300只(購自嘉吉動物蛋白(安徽)有限公司),隨機分為5組,分別為空白對照組、陽性對照組、0.075、0.150、0.300 g/kg百蕊草水提液組,每組3個重復,每個重復20只?？瞻讓φ战M在日常飼養(yǎng)中不添加抗生素和百蕊草水提液,陽性對照組在日常飼養(yǎng)中只使用抗生素不添加百蕊草水提液(抗生素種類見表1),百蕊草水提液組分別在飲用水中添加0.075、0.150和0.300 g/kg(百蕊草生藥量/雞體質(zhì)量)的百蕊草水提液。飲水中添加百蕊草水提物分前期(8～21日齡)和后期(22～42日齡)2期進行。

表1 抗生素種類

1.3 試驗飼糧及飼養(yǎng)管理

基礎(chǔ)飼糧采用玉米-豆粕型日糧,參照《雞飼養(yǎng)標準》(NY/T 33—2004)分兩階段配制,第Ⅰ階段為1～21日齡,第Ⅱ階段為22～42日齡,其組成及營養(yǎng)水平見表2(風干基礎(chǔ))。試驗在安徽省蚌埠市固鎮(zhèn)縣立業(yè)養(yǎng)殖專業(yè)合作社進行。試驗開始前徹底清掃消毒雞舍,檢查出風口和進風口,設(shè)置適宜的溫度(20～30 ℃),確保飲水器能正常使用等,試驗采用全封閉式籠養(yǎng),雞籠分為上、中、下3層。試驗期間百蕊草水提液組在每天08:00—11:00飲水給藥,其余時間自由飲水,采食、光照時間、免疫及日常管理等參照《愛拔益加商品代肉雞飼養(yǎng)管理手冊》。

表2 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 指標檢測

1.4.1 生長性能 試驗前以每個重復為單位稱量空腹雞只的體質(zhì)量,并記錄試驗雞只的初質(zhì)量、末質(zhì)量、采食量及剩余采食量,計算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G),試驗期間記錄雞只的死淘數(shù)以計算淘汰率。

1.4.2 免疫器官指數(shù) 第21、42日齡時,從各個組每個重復中隨機選取2只雞稱其體質(zhì)量,屠宰,剔除法氏囊、胸腺及脾臟周圍脂肪,用生理鹽水清洗后稱重,記錄數(shù)據(jù),計算各免疫器官與體質(zhì)量的比值,結(jié)果以免疫器官指數(shù)表示,免疫器官指數(shù)=免疫器官質(zhì)量(g)/宰前活體質(zhì)量(kg)。

1.4.3 血清免疫及抗氧化指標 第21、42日齡時,從每個重復中隨機選取2只雞,于翅靜脈采血,靜置后離心并吸取上層血清,于-80 ℃保存,待測。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法測定血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)的含量,試劑盒均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。血清新城疫抗體效價采用ELISA法測定,試劑盒購自泉州市睿信生物科技有限公司。采用比色法測定血清總抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性,采用WST-1法測定總超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用硫代巴比妥酸(TBA)法測定丙二醛(MDA)含量,所有指標均按照試劑盒說明書測定,試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 25.0軟件進行單因素方差分析,采用LSD法進行多重比較,結(jié)果用“平均值±標準差”表示,P<0.05表示差異顯著,P<0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 百蕊草水提液對AA肉雞生長性能的影響

由表3可知,8～21日齡時,百蕊草水提液組AA肉雞平均日增重、平均日采食量均極顯著高于空白對照組(P<0.01),極顯著降低了AA肉雞的料重比(P<0.01);與陽性對照組相比,0.300 g/kg百蕊草水提液組AA肉雞的平均日增重極顯著提高(P<0.01),料重比極顯著降低(P<0.01)。22～42日齡時,與空白對照組相比,百蕊草水提液組AA肉雞的平均日增重、平均日采食量均極顯著提高(P<0.01),料重比極顯著降低(P<0.01);0.300 g/kg百蕊草水提液組AA肉雞的平均日增重極顯著高于陽性對照組(P<0.01),料重比極顯著低于陽性對照組(P<0.01)。

表3 百蕊草水提液對AA肉雞生長性能的影響

2.2 百蕊草水提液對AA肉雞免疫器官指數(shù)的影響

由表4可知,21日齡時,與空白對照組相比,各百蕊草水提液組胸腺指數(shù)均極顯著提高(P<0.01),陽性對照組胸腺指數(shù)顯著提高(P<0.05),0.300 g/kg百蕊草水提液組脾臟指數(shù)顯著提高(P<0.05),0.150、0.300 g/kg百蕊草水提液組法氏囊指數(shù)顯著高于空白對照組(P<0.05);與陽性對照組相比,各百蕊草水提液組胸腺指數(shù)均極顯著提高(P<0.01)。42日齡時,0.150、0.300 g/kg百蕊草水提液組胸腺指數(shù)極顯著高于空白對照組(P<0.01)和陽性對照組(P<0.01),0.075 g/kg百蕊草水提液組胸腺指數(shù)顯著高于空白對照組(P<0.05),空白對照組與陽性對照組胸腺指數(shù)未見顯著差異(P>0.05),0.300 g/kg百蕊草水提液組脾臟指數(shù)極顯著高于空白對照組(P<0.01)和陽性對照組(P<0.01),0.300 g/kg百蕊草水提液組法氏囊指數(shù)顯著高于空白對照組(P<0.05)。

表4 百蕊草水提液對AA肉雞免疫器官指數(shù)的影響

2.3 百蕊草水提液對AA肉雞血清中免疫指標的影響

由表5可知,與空白對照組相比,0.075、0.300 g/kg百蕊草水提液組極顯著提高了21日齡AA肉雞血清IgA含量(P<0.01),對21日齡AA肉雞血清IgG和IgM含量無顯著差異(P>0.05),0.150、0.300 g/kg百蕊草水提液組顯著提高了AA肉雞血清新城疫抗體效價(P<0.05),21日齡的0.075、0.300 g/kg百蕊草水提液組AA肉雞血清IgA含量極顯著高于陽性對照組(P<0.01)。在42日齡,各百蕊草水提液組AA肉雞血清IgA含量與空白對照組無顯著差異(P>0.05),但添加百蕊草水提液提高了AA肉雞血清IgG和IgM含量,與空白對照組相比,添加0.075 g/kg百蕊草水提液可顯著提高AA肉雞血清IgM含量(P<0.05),各百蕊草水提液組極顯著提高了AA肉雞血清新城疫抗體效價(P<0.01)。

表5 百蕊草水提液對AA肉雞血清中免疫指標的影響

2.4 百蕊草水提液對AA肉雞抗氧化指標的影響

由表6可知,21日齡時,與空白對照組相比,各百蕊草水提液組極顯著提高了AA肉雞血清T-AOC、GSH-Px活性,極顯著降低了MDA含量(P<0.01),0.150、0.300 g/kg百蕊草水提液組SOD活性極顯著高于空白對照組(P<0.01),各百蕊草水提液組AA肉雞血清T-AOC、SOD活性和GSH-Px活性均極顯著高于陽性對照組(P<0.01),各百蕊草水提液組MDA含量與陽性對照組無顯著差異(P>0.05)。42日齡時,各百蕊草水提液組AA肉雞血清T-AOC、SOD活性和GSH-Px活性均極顯著高于空白對照組(P<0.01),MDA含量均極顯著低于空白對照組(P<0.01),0.150 g/kg百蕊草水提液組AA肉雞血清T-AOC極顯著高于陽性對照組(P<0.01),0.075、0.150 g/kg百蕊草水提液組AA肉雞血清SOD活性極顯著高于陽性對照組(P<0.01),0.300 g/kg百蕊草水提液組GSH-Px活性極顯著高于陽性對照組(P<0.01),0.075 g/kg百蕊草水提液組MDA含量極顯著低于陽性對照組(P<0.01)。

表6 百蕊草水提液對AA肉雞抗氧化指標的影響

3 結(jié)論與討論

3.1 百蕊草水提液對AA肉雞生長性能的影響

中草藥中富含多種成分,包括糖類、黃酮類、氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素、有機酸、鞣質(zhì)、揮發(fā)油、生物堿、苷類等有效成分,可以提升動物的生長性能、肉品質(zhì)、免疫功能及抗病能力等。肉雞在養(yǎng)殖過程中生長品質(zhì)好壞可以通過生長性能指標來觀察,也是評估經(jīng)濟效益的重要指標。百蕊草作為一種天然富含廣譜抗菌成分的草藥,常用來治療呼吸系統(tǒng)疾病,但其應用于肉雞生產(chǎn)的研究尚未見報道。試驗結(jié)果表明,在日常飼喂中添加百蕊草水提液對AA肉雞的生長性能有一定的影響,對AA肉雞日增重有所提高的同時降低了料重比,特別是隨著添加劑量的提高,AA肉雞的生長性能也在提高,可能是由于百蕊草水提液相較于其他中藥味甜、適口性好[5],富含黃酮類有效成分,可有效改善AA肉雞腸道營養(yǎng)物質(zhì)的吸收率[7],提高了飼料利用率,從而使AA肉雞的生長性能得到提高。

3.2 百蕊草水提液對AA肉雞免疫器官指數(shù)的影響

免疫器官主要是由淋巴組織組成,按功能不同可分為中樞性免疫器官和外周免疫器官,雞的中樞性免疫器官包括骨髓、胸腺和法氏囊,外周免疫器官包括脾臟、扁桃體、哈德氏腺、盲腸扁桃體、黏膜相關(guān)淋巴組織,其中脾臟是最大的周圍免疫器官[8]。各種免疫功能的發(fā)育是以免疫器官的正常發(fā)育為基礎(chǔ)的,通?？捎闷鞴俚馁|(zhì)量和指數(shù)來判斷機體的發(fā)育狀況、健康程度和免疫機能情況,動物在健康狀態(tài)下,免疫器官指數(shù)越高,免疫功能則越強[9]。試驗表明,在AA肉雞飲水中添加百蕊草水提液可促進免疫器官發(fā)育,提高免疫器官指數(shù),從而增強AA肉雞的免疫力。梁英等[10]通過研究在飼糧中添加黃芩黃酮對肉仔雞生長性能和免疫功能的影響發(fā)現(xiàn),黃芩黃酮能提高肉仔雞的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù),促進免疫器官的發(fā)育。上述研究與本研究結(jié)果相似,本試驗中AA肉雞的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)隨著百蕊草水提液含量的增加,呈現(xiàn)出升高的趨勢,而對法氏囊的發(fā)育也有一定的促進作用。試驗結(jié)果表明,不同劑量的百蕊草水提液極顯著提高了整個試驗期AA肉雞的胸腺指數(shù),添加0.300 g/kg百蕊草水提液組的AA肉雞脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)效果最好,但21日齡時AA肉雞脾臟指數(shù)未達到顯著水平,原因可能是生長前期肉雞免疫器官發(fā)育迅速,營養(yǎng)消耗大,機體調(diào)節(jié)能力不完善,隨著時間的增長,肉雞的胸腺和法氏囊逐漸退化,脾臟則發(fā)揮重要作用。上述試驗所用的黃芩含有較高的黃酮類化合物,黃酮類化合物能夠增強動物機體抗病力,改善動物機體免疫機能。試驗所添加的百蕊草水提液中同樣含有黃酮類化合物,這可能是百蕊草水提液在AA肉雞機體中發(fā)揮作用的原因,但具體的作用機制有待進一步驗證。

3.3 百蕊草水提液對AA肉雞血清中免疫指標的影響

血清免疫球蛋白是機體中一種具有抗體活性的球狀蛋白,是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分,主要包括IgA、IgG和IgM[11]。IgA是外分泌液中主要的免疫球蛋白,能阻止微生物的入侵,參與機體局部黏膜免疫,具有十分重要的防衛(wèi)屏障作用;IgG是雞血液中含量最高的免疫球蛋白,具有抗菌、抗病毒和抗外毒素等多種活性;IgM作為血清中分子質(zhì)量最大的免疫球蛋白,在機體的初始免疫保護中起重要作用[12],因此,血清免疫球蛋白含量的變化直接關(guān)系到動物的免疫功能。中草藥能促進血清免疫球蛋白的產(chǎn)生和體液免疫應答反應,提高動物機體的免疫功能[13]。試驗結(jié)果表明,在AA肉雞的日常飼喂中添加百蕊草水提液不同程度提高了血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量,表明百蕊草水提液可通過提高血清中免疫球蛋白的含量增強AA肉雞免疫功能。本試驗各添加組免疫球蛋白含量均高于陽性對照組,說明添加不同含量的百蕊草水提液均可提高AA肉雞的免疫性能,可能是因為百蕊草中含有多糖、黃酮等多種活性成分,促進機體的發(fā)育從而改善機體免疫功能[14]。

雞新城疫是由新城疫病毒感染引起的禽類疾病,具有發(fā)病快、病程短、死亡率高的特點[15]。雞新城疫是一種高度接觸性傳染病,如果雞感染了這種疾病,會給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失,所以在家禽養(yǎng)殖過程中對這類疾病的預防和免疫是非常普遍的。注射新城疫疫苗后,肉雞機體會產(chǎn)生免疫應答,進而分泌抗體,抗體效價越高,抗病能力越強[16]。試驗表明,在日常飼喂中添加百蕊草水提液可顯著提高21日齡和極顯著提高42日齡AA肉雞血清新城疫抗體效價,說明百蕊草水提液可能刺激了機體的免疫系統(tǒng),從而促進機體新城疫抗體的產(chǎn)生,具體原因還需進一步試驗驗證。

3.4 百蕊草水提液對AA肉雞抗氧化指標的影響

抗氧化劑是保護生物免受氧化損害的物質(zhì),根據(jù)來源分為外源抗氧化劑和內(nèi)源抗氧化劑兩類[17]。黃酮類化合物是一組公認的天然抗氧化劑,因為具有抑制自由基形成和清除自由基的能力[18]。已經(jīng)有試驗證實黃酮類化合物可以提高細胞內(nèi)GSH-Px和SOD的水平[19]。試驗所添加的百蕊草水提液中含有黃酮類物質(zhì),可以提高機體抗氧化能力,降低氧化損傷。動物機體抗氧化能力可以通過T-AOC、SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量來反映[20]。T-AOC是反映機體整體的抗氧化能力[21]。SOD可反映機體對于氧化損傷的緩解能力,是緩解氧化損傷的重要物質(zhì)之一[22]。GSH-Px是機體內(nèi)廣泛存在的一種重要的抗氧化酶,通過催化過氧化氫(H2O2)和脂質(zhì)過氧化物的還原來減少脂質(zhì)過氧化物的形成,增強機體抗氧化損傷能力[23]。MDA是脂質(zhì)過氧化反應鏈式終止階段產(chǎn)生的產(chǎn)物,其含量可反映動物體受攻擊的嚴重程度,從而反映動物機體的抗氧化能力,MDA含量越低,動物機體抗氧化能力越強[24]。李奎[2]通過體外抗氧化試驗表明,百蕊草多糖有較強的清除羥基自由基、超氧陰離子自由基的能力,且具有一定清除DPPH自由基的能力,并有較高的抗氧化活性。本試驗中,在AA肉雞日常飼喂中添加不同濃度的百蕊草水提液顯著或極顯著提高了42日齡AA肉雞血清SOD和GSH-Px活性及總抗氧化能力,極顯著降低了21和42日齡AA肉雞血清MDA含量。試驗結(jié)果表明,飲水中添加百蕊草水提液可提高抗氧化酶活性,降低MDA含量,從而提高機體抗氧化能力,原因可能是百蕊草具有清除機體內(nèi)過多的自由基的功效,保護機體免受自由基的損傷,從而來提高機體的抗氧化能力。綜合試驗前期和后期結(jié)果來看,在日常飲水中添加0.300 g/kg百蕊草水提液可增強AA肉雞抗氧化能力,但藥物最佳添加量有可能會隨著品種和生長階段的變化而變化,因此,在畜禽飼養(yǎng)中百蕊草水提液的添加量可根據(jù)品種、飼養(yǎng)階段、飼養(yǎng)環(huán)境和特殊生理需要等各種因素做適當?shù)恼{(diào)整。

綜上,在日常飲水中添加0.075、0.150、0.300 g/kg百蕊草水提液可提高AA肉雞的生長性能、免疫器官指數(shù)、血清免疫球蛋白和抗氧化能力,具備在AA肉雞中應用的可行性,適宜添加量為0.300 g/kg。