基于UPLC-Q-TOF/MS及CORT誘導(dǎo)的低分化PC12抑郁細(xì)胞模型的柴胡抗抑郁活性成分研究*

于靜波，韓越，周梓洋，牟晴蕊，陳靜梅，歐陽煜欽，費(fèi)璋，王宇紅**

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)科技創(chuàng)新中心/中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地 長沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)抑郁類疾病中醫(yī)藥防治湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 長沙 410208；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 長沙 410208）

抑郁癥是以情緒功能障礙、思維遲緩、意志力減退、認(rèn)知功能損害和社會功能障礙為主要臨床特征的精神疾病[1]。抑郁癥現(xiàn)已成為自殺的首要因素，嚴(yán)重影響人類生活質(zhì)量[2]。柴胡Bupleuri Radix為傘形科植物柴胡Bupleurum chinenseDC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifoliumWilld.的干燥根，性微寒，味辛、苦，歸肝、膽、肺經(jīng)，具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽氣之功[3]。柴胡為臨床治療抑郁癥中最為常用的中藥，是多個抗抑郁療效明確的復(fù)方如《傷寒論》中四逆散、《太平惠民和劑局方》中逍遙散、《景岳全書》中柴胡疏肝散等的基礎(chǔ)藥物[4]。

從柴胡中已分離鑒定得到皂苷類、黃酮類、多糖類、木脂素類等成分。研究表明柴胡皂苷類成分具有抗抑郁作用[5]。在柴胡抗抑郁活性成分研究中，關(guān)于柴胡總皂苷、柴胡皂苷A和柴胡皂苷D的研究報道較多。由于柴胡皂苷極性強(qiáng)、結(jié)構(gòu)相似、同分異構(gòu)體較多，其他成分的抗抑郁作用尚需進(jìn)一步探明。因此本實(shí)驗(yàn)通過超高效液相色譜串聯(lián)四極桿飛行時間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF/MS）技術(shù)獲得柴胡代謝輪廓，鑒定柴胡中的化學(xué)成分，并利用皮質(zhì)酮（CORT）誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷模型對關(guān)鍵成分進(jìn)行活性篩選，最終探究柴胡抗抑郁活性成分。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AcquityTMUPLC液相色譜儀、XEVO G2-XS QTOF/MS質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI）、MassLynx V4.1工作站（美國Waters公司）；LE204E/02型電子天平（梅特勒托利多儀器有限公司）；KQ5200DV型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Mini-Q Intergral純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

1.2 試藥

柴胡飲片（產(chǎn)地為河北，批號20180601），購于北京同仁堂藥店；對照品柴胡皂苷A（批號P03M9F5059 3）、柴胡皂苷D（批號P26N11F132137）、6″-O-乙酰基柴胡皂苷A（批號Z02A10L94589）、柴胡皂苷E（批號M28GB150097）和阿魏酸（批號G27A11L112005）購于上海源葉生物科技有限公司；柴胡皂苷C（批號wkq21101907）、柴胡皂苷F（批號wkq21070102）、柴胡皂苷B2（批號wkq21070611）和槲皮苷（批號wkq21022402）購于四川維克奇生物科技有限公司；前柴胡皂苷F（批號21121701）購于成都普菲德生物技術(shù)有限公司；綠原酸（批號110753-201817）和異槲皮苷（批號111809-201804）購于中國食品藥品鑒定研究院；以上標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98.00%。質(zhì)譜純甲醇、乙腈購于美國Thermo Fisher公司；甲酸購于德國CNW公司，其他試劑均為分析純；CCK-8試劑盒（批號CK04）購于日本同仁化學(xué)研究所；乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒（批號C0017）購于上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm ×2.1 mm i.d., 1.7 μm）；流動相為0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），洗脫梯度為0-2 min，98%-90% A；2-6 min，90%-80% A；6-12 min，80%-65% A；12-15 min，65%-60% A；15-22 min，60%-50% A；22-26 min，50%-20% A；26-27 min，20%-0% A；柱溫40℃；樣品倉溫度10℃；流速為0.3 mL·min-1；進(jìn)樣體積6 μL；色譜儀流出液不經(jīng)分流直接注入質(zhì)譜儀進(jìn)行正負(fù)離子掃描。

2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（ESI），正負(fù)離子檢測的全模式，質(zhì)量掃描范圍：m/z50-1500 Da，毛細(xì)管電壓正負(fù)模式下分別為3.0 kV、2.5 kV，樣品錐孔電壓：40 V，離子源溫度100℃，去溶劑化氣流溫度400℃，錐孔氣流50 L·h-1，去溶劑氣流量800 L·h-1。利用亮氨酸-腦啡肽（[M+H]+=556.2771，[M-H]-=554.2615）作為內(nèi)標(biāo)液進(jìn)行質(zhì)量實(shí)時校正，流速10 μL·min-1。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸、綠原酸、槲皮苷、異槲皮苷、柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F、前柴胡皂苷F、6″-O-乙?；窈碥誂對照品適量，以甲醇溶解，分別配置成濃度為1.0 mg·mL-1的單一對照品儲備液。精密量取各對照品儲備液適量，置于同一容量瓶中，再用逐級甲醇稀釋，得到混合對照品溶液。過0.22 μm濾膜供液質(zhì)分析。

2.4 供試品溶液的制備

將柴胡飲片在15倍量水中浸泡1 h，煎煮2 h，紗布過濾，收集濾液；濾渣加10倍量水，煎煮1.5 h，紗布過濾，合并兩次濾液。將濾液旋轉(zhuǎn)濃縮，冷凍干燥制備成凍干粉。取柴胡凍干粉50 mg左右，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加50%甲醇溶液定容至刻度，密封，并超聲30 min，溶液于4 ℃，13 000 r·min-1離心15 min，取上清液。上清液過0.22 μm濾膜供液質(zhì)分析。

2.5 柴胡抗抑郁活性成分篩選

2.5.1 細(xì)胞分組、造模及給藥

低分化PC12細(xì)胞培養(yǎng)在含10%胎牛、100 U·mL-1青霉素和100 μg·mL-1鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，放置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待2-3天后進(jìn)行細(xì)胞傳代處理。

取對數(shù)生長期的PC12細(xì)胞，以1×104·mL-1接種于96孔板中，分為對照組、模型組和給藥組等，每組設(shè)置5個復(fù)孔。培養(yǎng)24 h后，棄去培養(yǎng)基，模型組加入含200 μmol·L-1CORT的無血清培養(yǎng)基；給藥組加入含25 μmol·L-1待測單體和200 μmol·L-1CORT的無血清培養(yǎng)基；對照組加入等量的無血清培養(yǎng)基。各組繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，根據(jù)試劑盒進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.5.2 細(xì)胞活力的測定

取待測96孔板，每孔加入10 μL CCK-8溶液，在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4 h后，用酶標(biāo)儀測定在450 nm處的吸光度。細(xì)胞活力=（A實(shí)驗(yàn)組-A培養(yǎng)液）/（A對照組-A培養(yǎng)液）×100%

2.5.3 乳酸脫氫酶（LDH）的測定

取待測96孔板，2100 r·min-1離心5 min，收集細(xì)胞培養(yǎng)液于新的96孔板，向各孔中加入LDH檢測工作液，混勻后室溫避光孵育30 min，在490 nm處測定LDH吸光度值。LDH釋放率=（A實(shí)驗(yàn)組-A培養(yǎng)液）/（A對照組-A培養(yǎng)液）×100%。

2.6 統(tǒng)計學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）形式表示。利用SPSS 17.0進(jìn)行ANOVA差異分析，P＜0.05表示具有顯著性差異，P＜0.01表示具有極顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 基于UPLC-Q-TOF/MS的柴胡水提物化學(xué)成分鑒定

采用UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)對柴胡水提物中的化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，獲得其代謝產(chǎn)物的化學(xué)信息。正、負(fù)離子模式下，代表性的柴胡水提物代謝輪廓見圖1。根據(jù)采集的化合物MS/MS質(zhì)譜信息結(jié)合UNIFI數(shù)據(jù)庫、參考文獻(xiàn)[6-14]及標(biāo)準(zhǔn)品等對柴胡體外成分進(jìn)行分析表征。利用采集的精確分子量計算化合物的元素組成，利用采集的二級碎片信息對該成分進(jìn)行表征。最終鑒定柴胡中54個化學(xué)成分，其中酚酸及其苷類10個，包括綠原酸、隱綠原酸、阿魏?；鼘幩岬?；黃酮及其苷類5個，如蘆丁、異槲皮苷、水仙苷等；皂苷類35個，如柴胡皂苷A、柴胡皂苷C、柴胡皂苷B2等；其他有機(jī)酸類、氨基酸類、核苷酸類4個成分，結(jié)果見表1。

表1 柴胡體外成分鑒定

圖1 正離子模式（A）和負(fù)離子模式（B）下，基于UPLC-Q-TOF/MS的柴胡水提物代謝輪廓

3.1.1 酚酸及其苷類成分鑒定

從柴胡中共鑒定了10個酚酸類成分，包括化合物4-7、9-12、15、17。該類化合物的主要裂解途徑為H2O、COOH、CO等小分子丟失，且羰基處易于斷裂而產(chǎn)生相應(yīng)的碎片離子。以綠原酸為例（圖2），保留時間3.60 min，ESI-模式下檢測到綠原酸的準(zhǔn)分子離子峰為m/z353.0863 [M-H]-，計算其元素組成為C16H18O9；二級質(zhì)譜顯示母離子酯鍵斷裂產(chǎn)生碎片峰m/z191.0542 [M-H-C9H6O3]-和m/z161.0222 [M-HC7H12O6]-；碎片離子m/z191.0542脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片峰m/z173.0441，再脫去CH2O2產(chǎn)生碎片峰m/z127.0378；母離子C-O鍵斷裂產(chǎn)生碎片離子m/z179.0316 [M-H-C7H10O5]-和碎片離子m/z173.0441[M-H-C9H8O4]-；碎片離子m/z179.0316脫去CO2產(chǎn)生碎片峰m/z135.0421。

圖2 負(fù)離子模式下，綠原酸全掃描質(zhì)譜圖（A）、二級質(zhì)譜（B）和裂解途徑（C）

3.1.2 黃酮及其苷類成分鑒定

從柴胡中共鑒定了5個黃酮及其苷類成分，其中14、16、18、19均為黃酮醇苷類化合物。該類化合物的主要裂解途徑為苷鍵斷裂、苷元C環(huán)RDA裂解發(fā)生1，3鍵和0，2鍵的斷裂及CO、H2O等中性離子丟失。以異槲皮苷為例（圖3），保留時間6.21 min，ESI-模式下檢測到異槲皮苷的準(zhǔn)分子離子峰為m/z463.0895 [MH]-，計算其元素組成為C21H20O12；二級質(zhì)譜顯示母離子脫去葡萄糖殘基產(chǎn)生苷元m/z301.0345 [M-H-Glu]-及m/z300.0276 [M-2H-Glu]-；苷元脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片峰m/z283.0264，再丟失CO產(chǎn)生碎片峰m/z255.0295；苷元丟失CH2O產(chǎn)生碎片峰m/z271.0246，再丟失CO產(chǎn)生碎片峰m/z243.0290；苷元C環(huán)1，3鍵斷裂產(chǎn)生碎片峰m/z151.0028 [1,3A]-；苷元C環(huán)0，2鍵斷裂產(chǎn)生碎片峰m/z135.0074 [0,2B]-。

圖3 負(fù)離子模式下，異槲皮苷全掃描質(zhì)譜圖（A）、二級質(zhì)譜（B）和裂解途徑（C）

3.1.3 柴胡皂苷類成分鑒定

柴胡皂苷結(jié)構(gòu)均為五環(huán)三萜齊墩果烷型衍生物，其苷元可分為環(huán)氧醚型（Ⅰ型），異環(huán)雙稀型（Ⅱ型），12-稀型（Ⅲ型），同環(huán)雙稀型（Ⅳ型），12-稀-28-羧酸型（Ⅴ型），異環(huán)雙稀-30-羧酸型（Ⅵ型），18-稀型（Ⅶ型）7種不同類型，柴胡皂苷中一般只含有葡萄糖，夫糖，鼠李糖，木糖和戊糖醇[15]。通過分析對照品柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷F等的二級質(zhì)譜圖對柴胡皂苷類成分質(zhì)譜裂解途徑進(jìn)行歸納。

柴胡皂苷A屬于Ⅰ型柴胡皂苷。如圖4所示，保留時間16.15 min，ESI+模式下檢測到柴胡皂苷A的準(zhǔn)分子離子峰為m/z781.4736 [M+H]+，另外還存在加合形式為[M+Na]+的離子m/z803.4551，計算其元素組成為C42H68O13；二級質(zhì)譜顯示母離子脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z763.4595 [M+H-H2O]+，再脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z745.4531 [M+H-2H2O]+；碎片離子m/z763.4595脫去1個葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z601.4061，進(jìn)一步脫去1個夫糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z455.3508；碎片離子m/z745.4531脫去1個葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z583.3939，進(jìn)一步脫去1個夫糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z437.3431。柴胡皂苷D與柴胡皂苷A為差向異構(gòu)體，產(chǎn)生的二級碎片相同。

圖4 正離子模式下，柴胡皂苷A全掃描質(zhì)譜圖（A）、二級質(zhì)譜（B）和裂解途徑（C）

柴胡皂苷B2屬于Ⅱ型柴胡皂苷。如圖5所示，保留時間16.30 min，ESI+模式下檢測到柴胡皂苷B2的準(zhǔn)分子離子峰為m/z781.4766 [M+H]+，另外還存在加合形式為[M+Na]+的離子m/z803.4597，計算其元素組成為C42H68O13；二級質(zhì)譜顯示母離子脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z763.4666 [M+H-H2O]+，再脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z745.4558 [M+H-2H2O]+；碎片離子m/z763.4666脫去1個葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z601.4129，進(jìn)一步脫去1個夫糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z455.3533，還可同時脫去C16位羥基與C17位羥甲基產(chǎn)生碎片峰m/z407.3314；碎片離子m/z745.4558脫去1個葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z583.4021，再脫去1個夫糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z437.3425。

圖5 正離子模式下，柴胡皂苷B2全掃描質(zhì)譜圖（A）、二級質(zhì)譜（B）和裂解途徑（C）

柴胡皂苷F屬于Ⅲ型柴胡皂苷。如圖6所示，保留時間13.57 min，ESI+模式下檢測到柴胡皂苷F的準(zhǔn)分子離子峰為m/z929.5519 [M+H]+，另外還存在加合形式為 [M+Na]+的離子m/z951.5340，計算其元素組成為C48H80O17；二級質(zhì)譜顯示母離子脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z911.5388 [M+H-H2O]+，再脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z893.5281 [M+H-2H2O]+；碎片離子m/z911.5388脫去1個鼠李糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z765.4766，再脫去1個葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z 603.4261，進(jìn)一步脫去1個葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z441.3725，還可同時脫去C16位羥基與C17位羥甲基產(chǎn)生碎片峰m/z393.3501；碎片離子m/z893.5281脫去1個鼠李糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z747.4681，再脫去1個葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z585.4155，再脫去1個葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z423.3621。故推測柴胡皂苷的裂解方法主要為糖基及苷元上取代基的丟失，并以此為基礎(chǔ)對柴胡中其他皂苷類成分進(jìn)行表征。

圖6 正離子模式下，柴胡皂苷F全掃描質(zhì)譜圖（A）、二級質(zhì)譜（B）和裂解途徑（C）

根據(jù)BPI色譜圖中各成分的相對峰面積與總相對峰面積比值判斷其對柴胡代謝輪廓貢獻(xiàn)程度大小，進(jìn)而篩選活性成分[16]。經(jīng)計算得到柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷F、柴胡皂苷E、6″-O-乙?；窈碥誂對柴胡代謝輪廓的貢獻(xiàn)度較大，作為柴胡潛在抗抑郁活性成分。其中，柴胡皂苷A的貢獻(xiàn)度最大，占總輪廓的23.12%，見表2。

表2 鑒定化合物對柴胡代謝輪廓的貢獻(xiàn)度

3.2 柴胡關(guān)鍵成分對CORT誘導(dǎo)的低分化PC12細(xì)胞活力的影響

細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)中，如圖7所示，在200 μmol·L-1CORT作用下，PC12細(xì)胞活力為（58.27%±3.04%）。與對照組比較，模型組PC12細(xì)胞活力顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，柴胡皂苷A組、柴胡皂苷B2組、柴胡皂苷C組、柴胡皂苷E組、柴胡皂苷F組、6″-O-乙?；窈碥誂組細(xì)胞活力顯著升高（P＜0.01或P＜0.05）。

圖7 柴胡關(guān)鍵成分對CORT誘導(dǎo)的低分化PC12細(xì)胞活力的影響

3.3 柴胡關(guān)鍵成分對CORT誘導(dǎo)的低分化PC12細(xì)胞LDH釋放率的影響

LDH釋放率實(shí)驗(yàn)中，如圖8所示，在200 μmol·L-1CORT作用下，PC12細(xì)胞的LDH實(shí)驗(yàn)率為（154.26%±24.50%）。與對照組比較，模型組PC12細(xì)胞LDH釋放率顯著升高（P＜0.05）；柴胡皂苷A組、柴胡皂苷B2組、柴胡皂苷C組、柴胡皂苷E組、柴胡皂苷F組LDH釋放率顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）。

圖8 柴胡關(guān)鍵成分對CORT誘導(dǎo)的低分化PC12細(xì)胞LDH釋放率的影響

4 討論

抑郁癥是一種具有廣泛臨床表現(xiàn)及多系統(tǒng)發(fā)病機(jī)制的精神疾病[17]，以整體觀念為指導(dǎo)原則的中醫(yī)藥在抑郁癥防治中具有獨(dú)特優(yōu)勢[18]。大量臨床及實(shí)驗(yàn)研究報道柴胡提取物、藥對及類方抗抑郁癥作用明確[19-21]。但除柴胡皂苷A、柴胡皂苷D和柴胡皂苷B2，柴胡其他成分在抗抑郁作用方面的研究還未見報道。

本研究首先利用UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)對柴胡水提取物進(jìn)行成分分析，共鑒定包括酚類、黃酮類、皂苷類等54個化學(xué)成分，其中8個化學(xué)成分為從柴胡中首次報道，并推測鑒定出化合物45和54這2個苷元16位為羰基的新型柴胡皂苷類化合物。柴胡水提物中化學(xué)成分主要為Ⅰ型、Ⅱ型及Ⅲ型柴胡皂苷類成分，且化學(xué)結(jié)構(gòu)之間具有聯(lián)系。柴胡皂苷A、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、柴胡皂苷E和6″-O-乙?；窈碥誂等均屬于I型柴胡皂苷。其中，柴胡皂苷A與2″-O-乙?；窈碥誂、3″-O-乙?；窈碥誂、4″-O-乙?；窈碥誂和6″-O-乙?；窈碥誂苷元相同，柴胡皂苷C與柴胡皂苷E苷元相同。柴胡皂苷A，可在體內(nèi)代謝為前柴胡皂苷F和柴胡皂苷元F[22]。柴胡皂苷B2、柴胡皂苷M和柴胡皂苷N等屬于Ⅱ型柴胡皂苷，柴胡皂苷F屬于Ⅲ型柴胡皂苷。柴胡皂苷B2可由Ⅰ型柴胡皂苷柴胡皂苷D轉(zhuǎn)化而來。

根據(jù)各成分相對峰面積與總相對峰面積比值判斷柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷F、柴胡皂苷E、6″-O-乙?；窈碥誂對柴胡代謝輪廓的貢獻(xiàn)度較大。四逆散為具有明確抗抑郁療效的中藥復(fù)方，周佳等[23]利用UPLC-MS/MS法同時測定四逆散水提物中主要成分的含量，測得柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D的含量分別為886.60 μg·g-1、122.32 μg·g-1、160.16 μg·g-1、29.61 μg·g-1，證明柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2和柴胡皂苷C對方中君藥柴胡的重要貢獻(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)同時通過測定細(xì)胞活力和LDH釋放率發(fā)現(xiàn)，具有較高貢獻(xiàn)度的柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷F、柴胡皂苷E、6″-O-乙?；窈碥誂對CORT誘導(dǎo)的低分化PC12抑郁細(xì)胞模型產(chǎn)生保護(hù)作用。文獻(xiàn)報道柴胡皂苷A可改善慢性不可預(yù)知性溫和應(yīng)激誘導(dǎo)的圍絕經(jīng)期雌性大鼠的抑郁樣行為，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)海馬體中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的表達(dá)及炎癥因子相關(guān)[24]。Wang等[25]研究發(fā)現(xiàn)柴胡皂苷A可通過p-CREB/BDNF信號通路改善中風(fēng)化抑郁大鼠模型快感缺失、自主活動降低、絕望等抑郁行為及抑制海馬神經(jīng)元凋亡。柴胡皂苷B2能夠保護(hù)CORT誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷，其作用機(jī)制主要與調(diào)節(jié)D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代謝、減少線粒體凋亡通路和抑制p38/NF-κB信號通路等密切相關(guān)[26]。曲中原等[27]利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、柴胡皂苷F可作用于MAPK1、FGF2、CASP3、MAPK8等14個核心靶點(diǎn)，通過PI3K-Akt、Ras、MAPK等信號通路發(fā)揮抗抑郁、抗炎、抗腫瘤作用。綜上推斷，由于柴胡皂苷結(jié)構(gòu)相近，如I型柴胡皂苷為具有13,28-環(huán)氧結(jié)構(gòu)的化合物，氧環(huán)不穩(wěn)定，在煎煮過程中或體內(nèi)代謝過程中轉(zhuǎn)化為II型柴胡皂苷，可協(xié)同發(fā)揮抗抑郁作用。

本研究基于UPLC-Q-TOF/MS及CORT誘導(dǎo)的低分化PC12抑郁細(xì)胞模型，確定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F可能為柴胡主要的抗抑郁活性成分，為柴胡質(zhì)量控制及抗抑郁藥物研發(fā)提供依據(jù)。