血清因子表達(dá)與乙肝纖維化及病理變化程度的關(guān)系

安仲武 薄維波 李 欣 常煥顯

（南京醫(yī)科大學(xué)康達(dá)學(xué)院附屬連云港東方醫(yī)院，江蘇 連云港 222042）

乙肝是一種感染性疾病，乙型肝炎病毒陽(yáng)性，在世界范圍內(nèi)均較常見(jiàn)，極易向肝硬化或肝細(xì)胞癌發(fā)展，嚴(yán)重威脅患者生命健康[1]。在肝硬化進(jìn)展中，肝纖維化是必經(jīng)階段，具有可逆性，積極治療能延緩疾病向肝硬化進(jìn)展[2]。本研究探討了血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)與乙肝纖維化及病理變化程度的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年2 月至2023 年2 月我院乙肝患者100 例，年齡25～52 歲，平均（34.25±5.16）歲，女40 例，男60 例。炎癥活動(dòng)度：G0～G1 10 例，G2 30 例，G3 45 例，G4 15 例；肝纖維化病理分期：SO 10 例，S1 20 例，S2 25 例，S3 30 例，S4 15 例。

1.2 方法

1.2.1 血清25（OH）D3 表達(dá)測(cè)定 采集患者清晨空腹靜脈血6 mL，離心將上層血清分離出來(lái)，在-70℃冰箱中保存樣本，采用全自動(dòng)生化分析儀（AU680，貝克曼）測(cè)定血清25（OH）D3 水平。

1.2.2 血清miR-25-3p 表達(dá)測(cè)定 依據(jù)RNA 提取試劑盒說(shuō)明書(shū)將患者血清總RNA 提取出來(lái)，對(duì)RNA 濃度與純度進(jìn)行檢測(cè)，合格后逆轉(zhuǎn)錄500 μg 總RNA，將cDNA 合成。熒光定量PCR 反應(yīng)，miR-25-3p 與U6引物序列：正向分別為5’-CGTGCATAGACACAGGGAGTT-3’、5’-CTGGCATCCGCTGGAGA-3’，反向分別為5’-GGAGGTTACATTCAGCGAT-3’、5’-TTCGGTTGTCGATATTCGGT-3’。反應(yīng)總體系10 μl，cDNA 模板、正向引物、反向引物、Master Mix、雙蒸水分別1 μl、1 μl、1 μl、5 μl、2 μl。反應(yīng)程度：在95℃、95℃、60℃、70℃溫度下分別與預(yù)變性、變性、退火、延伸各2 min、20 s、30 s、30 s，共40 個(gè)循環(huán)。用2-△△Ct 值表示miR-25-3p 表達(dá)[3]。

1.2.3 血清CHI3L1 表達(dá)測(cè)定 采用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清CHI3L1 表達(dá)。

1.2.4 肝纖維化指標(biāo)測(cè)定 采集患者清晨空腹血6 mL，離心將上層血清分離出來(lái)，在-70℃冰箱中保存樣本，采用化學(xué)發(fā)光儀（Mindray CL-6000i）測(cè)定Ⅲ型前膠原（PCⅢ）、Ⅳ型膠原（CIV）、層黏連蛋白（LN）、透明質(zhì)酸（HA）等肝纖維化指標(biāo)水平

1.3 觀察指標(biāo)（1）不同炎癥活動(dòng)度患者的血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)；（2）不同肝纖維化分期患者的血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)；（3）不同肝纖維化分期患者的肝纖維化指標(biāo)；（4）血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)與肝纖維化及病理變化程度的關(guān)系。

1.4 肝纖維化病理分期評(píng)定 依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)與傳染病和寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)及肝臟穿刺病理活檢結(jié)果，無(wú)纖維化評(píng)定為S0，纖維增生伴匯管區(qū)擴(kuò)大評(píng)定為S1，小葉結(jié)構(gòu)保留且匯管區(qū)周圍纖維化評(píng)定為S2，小葉結(jié)構(gòu)紊亂且纖維間隔但無(wú)肝硬化評(píng)定為S3，確定肝硬化或重度纖維化評(píng)定為S4[4]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS28.0 軟件分析，計(jì)數(shù)資料用（%）表示，用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用（）表示，用t檢驗(yàn)，P＜0.05 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同炎癥活動(dòng)度、肝纖維化分期患者的血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)比較 炎癥活動(dòng)度G0～G1、G2、G3、G4 患者血清25（OH）D3 表達(dá)逐漸降低（P＜0.05），血清miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)均逐漸升高（P＜0.05）；肝纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者血清25（OH）D3 表達(dá)逐漸降低（P＜0.05），血清miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)逐漸升高（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同炎癥活動(dòng)度、肝纖維化分期患者血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)比較 （）

表1 不同炎癥活動(dòng)度、肝纖維化分期患者血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)比較 （）

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2.2 不同肝纖維化分期患者的肝纖維化指標(biāo)比較 肝纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者血清PCⅢ表達(dá)分別為（96.55±13.31）μg/L、（130.58±22.21）μg/L、（187.88±26.97）μg/L、（216.73±33.68）μg/L、（315.56±54.88）μg/L，血清CIV 表達(dá)分別為（103.78±18.55）μg/L、（139.67±5.53）μg/L、（220.22±34.76）μg/L、（331.28±41.41）μg/L、（417.30±59.30）μg/L，血清LN 表達(dá)分別為（93.11±11.50）μg/L、（121.52±19.55）μg/L、（139.68±30.70）μg/L、（232.22±40.31）μg/L、（300.28±50.38）μg/L，血清HA 表達(dá)分別為（83.55±17.58）μg/L、（120.88±20.55）μg/L、（251.36±40.08）μg/L、（342.75±51.75μg/L、（533.56±63.88）μg/L。肝纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者的血清PCⅢ、CIV、LN、HA 表達(dá)均逐漸升高（P＜0.05）。

2.3 血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)與肝纖維化及病理變化程度的關(guān)系分析 血清25（OH）D3表達(dá)與炎癥活動(dòng)度、肝纖維化分期均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），血清miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)與炎癥活動(dòng)度、肝纖維化分期均呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)與肝纖維化及病理變化程度的關(guān)系分析

3 討論

有研究表明[5-6]，乙肝患者炎癥活動(dòng)度、肝纖維化程度與血清25（OH）D3 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，血清25（OH）D3 表達(dá)降低說(shuō)明患者體內(nèi)具有劇烈的炎癥活動(dòng)、嚴(yán)重的肝纖維化程度。研究結(jié)果表明，炎癥活動(dòng)度G0～G1、G2、G3、G4 患者的血清25（OH）D3 表達(dá)逐漸降低，血清miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)均逐漸升高；肝纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者血清25（OH）D3 表達(dá)逐漸降低，血清miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)逐漸升高。肝纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者血清PCⅢ、CIV、LN、HA 表達(dá)均逐漸升高。血清25（OH）D3 表達(dá)與炎癥活動(dòng)度、肝纖維化分期均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，血清miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)與炎癥活動(dòng)度、肝纖維化分期均呈正相關(guān)關(guān)系，和上述研究結(jié)果一致。

綜上，血清25（OH）D3 與乙肝炎癥活動(dòng)度、肝纖維化分期均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，血清miR-25-3p、CHI3L1 表達(dá)與乙肝炎癥活動(dòng)度、肝纖維化分期均呈正相關(guān)關(guān)系。