潰結(jié)核心方對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠NF-κB/HIF-1α通路的影響*

黃 李 彭云花 陳 天 陸 宏 楊 巍

（上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院，上海 201203）

潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是炎癥性腸?。↖BD）的一個(gè)亞型［1］，臨床表現(xiàn)以消化系統(tǒng)表現(xiàn)為主，包括腹瀉、黏液膿血便、腹痛腹脹等。近年來的研究發(fā)現(xiàn)新興工業(yè)國家中UC發(fā)病率迅速增加，其年百分比變化增長約14.9%［2-4］。STAUFFER JK 等［5］研究表明，內(nèi)源性信號(hào)產(chǎn)物可誘導(dǎo)大量炎癥介質(zhì)產(chǎn)生，進(jìn)而引發(fā)腸道免疫炎癥反應(yīng)，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）和白細(xì)胞介素-6（IL-6）等促炎細(xì)胞因子的大量激活，不僅阻礙腸道上皮屏障功能的修復(fù)，還會(huì)影響腸道菌群的平衡和代謝，加重UC。NF-κB/HIF-1α 信號(hào)通路是指在缺氧條件下，缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）和核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）相互作用，調(diào)節(jié)相關(guān)聯(lián)的基因表達(dá)，并參與細(xì)胞的增殖、遷移、血管生成和炎癥反應(yīng)等。NF-κB 和HIF-1α 分別是炎癥和缺氧疾病的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，炎癥主要激活NF-κB，而缺氧則與HIF-1α 信號(hào)通路密切相關(guān)［6］。當(dāng)機(jī)體缺氧后，HIF-1α 活化，并刺激NF-κB P65 磷酸化上調(diào)，級(jí)聯(lián)反應(yīng)下促使了炎癥因子的表達(dá)［7］。同條件下HIF-1α還被發(fā)現(xiàn)可介導(dǎo)NF-κB的活化，并通過TLR4依賴的方式促進(jìn)LPS刺激巨噬細(xì)胞中NF-κB 調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的表達(dá)，包含TNF-α、IL-1β等。潰結(jié)核心方（UCCF）是上海市名中醫(yī)楊巍教授治療UC 的核心基礎(chǔ)方，主要由2 個(gè)藥組組成：清熱燥濕之黃芩、黃連、木香；健脾益氣之黃芪、白術(shù)、茯苓。前期網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究已推測UCCF可能通過NF-κB/HIF-1α 信號(hào)通路對(duì)UC 發(fā)揮抗炎作用，為進(jìn)一步驗(yàn)證這一理論，本實(shí)驗(yàn)采用小鼠進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

48 只SPF 級(jí)C57BL/6J 雄性小鼠，周齡9～12 周，體質(zhì)量（21±1）g，生產(chǎn)許可證編號(hào)：Q2714。環(huán)境恒溫恒濕，光照符合規(guī)定，予普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水。所有動(dòng)物的喂養(yǎng)、操作、處死取材等均嚴(yán)格遵循上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物研究委員會(huì)倫理相關(guān)規(guī)定，實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)由上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（倫理編號(hào)：PZSHUTCM220124014）。

1.2 試劑與儀器

UCCF 顆粒劑組成：黃芩15 g，黃連6 g，黃芪10 g，白術(shù)10 g，茯苓10 g，木香10 g。均購于上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院中藥房。美沙拉嗪腸溶片（葵花藥業(yè)集團(tuán)，國藥準(zhǔn)字H19980148），規(guī)格：0.25 g/片。葡聚糖硫酸鈉（DSS）購于美國MP Biomedicals 公司。便隱血（FOB）檢測試劑購于艾博生物醫(yī)藥有限公司，批號(hào)為2022110119；TNF-α 試劑盒購于Origene 公司，批號(hào)為20100929080；IL-1β 試劑盒購于武漢賽維爾公司，批號(hào)為GB11113；NF-κB 兔多克隆抗體、HIF-1α 兔多克隆抗體均購于Origene 公司，批號(hào)分別為W001、W112。UC7 超薄石蠟切片機(jī)（蘇州賽恩斯儀器有限公司）；MS-PB 磁力攪拌器、KZ-Ⅱ高速組織研磨儀、BV-2 垂直電泳儀（武漢賽維爾生物科技有限公司）；D3024R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器公司）；Alpha-EaseFC灰度分析軟件（Alpha Innotech公司）；7300實(shí)時(shí)熒光定量PCR 系統(tǒng)（美國ABI 公司）；Adobe PhotoShop圖像分析軟件（美國Adobe 公司）；ME203E/02 電子天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］。

1.3 分組與造模

48 只小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周之后隨機(jī)分為正常組、模型組、美沙拉嗪組及UCCF 低、中、高劑量組，每組8只。正常組小鼠每天飲用蒸餾水，其余各組均喂養(yǎng)4%DSS，自由飲水。通過DSS干預(yù)4 d，小鼠腸道炎癥始現(xiàn)（大便不成形、隱血陽性、肛門糊狀等），連續(xù)干預(yù)6 d即可構(gòu)建急性UC模型［8］。

1.4 給藥方法

在小鼠的飼養(yǎng)期間，其可以自由飲水，并注意清潔墊料，保持干燥。給藥濃度計(jì)算方法參照《中藥藥理研究方法學(xué)》［10］，按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人體質(zhì)量計(jì)算給藥劑量，將人每天劑量折算成小鼠等效劑量作為中劑量，高劑量即為2 倍，低劑量為1/2 倍，等效劑量為1.40 g/kg，小鼠灌胃量按照0.2 mL/10 g 計(jì)算，UCCF低、中、高劑量分別為0.8、1.6、3.2 g/（kg·d），藥物使用前研磨至粉末狀，加入蒸餾水充分溶解配制混懸液，于4℃冰箱冷藏，使用時(shí)提前水浴鍋復(fù)溫。美沙拉嗪組（陽性對(duì)照藥）：成人UC 急性期美沙拉嗪腸溶片的用藥劑量為4 g/d，換算成小鼠劑量為0.52 g/（kg·d）。從4% DSS 喂養(yǎng)第5 天開始予以藥物干預(yù)，UCCF 低、中、高劑量組灌胃給予相應(yīng)濃度的UCCF（2.5 g/kg），美沙拉嗪組小鼠給予美沙拉嗪腸溶片溶液（0.011 g/kg）灌胃，正常組和模型組予等體積0.9%氯化鈉溶液灌胃，連續(xù)7 d。

1.5 標(biāo)本采集與檢測

1.5.1 一般情況及DAI評(píng)分 實(shí)驗(yàn)期間每日觀察小鼠的一般狀況（體質(zhì)量、糞便黏稠度并進(jìn)行糞便隱血檢測）。各組小鼠DAI 評(píng)分按照表1 的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算公式為DAI 評(píng)分為3 項(xiàng)合計(jì)總分/3。DAI 值達(dá)到0.5 分及以上時(shí)，即可判定小鼠結(jié)腸炎造模成功［11］。

表1 DAI評(píng)分表

1.5.2 結(jié)腸長度及結(jié)腸病理學(xué)評(píng)分 第12 日前禁食12 h，然后稱重、處死。剖取結(jié)腸、清洗后參照結(jié)腸病理學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。0分為正常組織；1分為表面上皮損傷；2 分為局限于黏膜的灶性潰瘍；3 分為灶性透壁性炎癥和潰瘍；4分為廣泛透壁性潰瘍和炎癥，病變之間存在正常黏膜；5分為廣泛的片狀透壁性潰瘍和炎癥。

1.5.3 結(jié)腸組織病理學(xué)檢測 取4%多聚甲醛固定的結(jié)腸組織，采用石蠟包埋、切片及HE 染色，顯微鏡下觀察病理變化。

1.5.4 免疫組織化學(xué)檢測 分別進(jìn)行抗原修復(fù)、內(nèi)源性過氧化酶阻斷和封閉，然后先后進(jìn)行一抗孵育、二抗孵育，放大信號(hào)后進(jìn)行DAB 染色，細(xì)胞核染色，隨后鹽酸分化、返藍(lán)、封片和拍片，采用Image J 圖像分析系統(tǒng)對(duì)棕黃色顆粒（陽性表達(dá)）進(jìn)行半定量分析。

1.5.5 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）檢測結(jié)腸組織TNF-α、IL-1β、NF-κB、HIF-1α mRNA的表達(dá) 稱取20 mg 凍存的結(jié)腸組織經(jīng)液氮研磨，加入RNA裂解液進(jìn)行總RNA提取，然后進(jìn)行變性、冷卻，再加入反轉(zhuǎn)錄液于PCR反應(yīng)儀退火、延伸、失活。PCR擴(kuò)增條件：95 ℃，30 s（循環(huán)1次）預(yù)變性，PCR反應(yīng)條件為95 ℃，5 s，60 ℃，34 min 循環(huán)40 次，溶解曲線反應(yīng)條件：95 ℃，15 s；60 ℃，1 min；95 ℃，15 s，循環(huán)1 次。以β-actin 為內(nèi)參，采用ΔΔCT 值方法，ΔCT=目的基因CT值-β-actin CT 值，ΔΔCT=ΔCT 實(shí)驗(yàn)組-ΔCT 對(duì)照組，目的基因相對(duì)表達(dá)倍數(shù)=2-ΔΔCT。該引物序列由武漢賽維爾生物科技有限公司設(shè)計(jì)，見表2。

表2 引物序列

1.5.6 蛋白免疫印跡（Western blotting）法檢測結(jié)腸組織NF-κB、HIF-1α蛋白表達(dá)情況 稱取各組蛋白組織100 mg，加入裂解液，而后高速低溫研磨，對(duì)其組織上清液進(jìn)行蛋白濃度測量。加熱蛋白使其變性后上機(jī)，先后電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉，TBST 洗膜3 次后加入相應(yīng)1∶3 000 的二抗，室溫孵育50 min 后重復(fù)洗膜3 次，最后發(fā)光顯色。使用灰度分析軟件AlphaEaseFC 和圖片處理軟件Adobe PhotoShop 分別對(duì)條帶灰值進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和圖像整理。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠體質(zhì)量及DAI評(píng)分比較

見表3。正常組小鼠一般狀況良好。模型組小鼠在造模的第4 天起出現(xiàn)腹瀉，便中帶血，部分小鼠肛門呈糊狀，喜臥懶動(dòng)、毛發(fā)雜亂黯淡。各用藥組小鼠腹瀉、血便情況明顯減輕，精神狀態(tài)可，毛發(fā)潤澤度改善。給藥前后，與正常組相比，模型組小鼠體質(zhì)量均明顯降低，DAI 評(píng)分均明顯升高（P＜0.05 或P＜0.01）；與模型組相比，取材前的美沙拉嗪組和UCCF 中、高劑量組小鼠體質(zhì)量都有明顯上升，各用藥組DAI 評(píng)分均明顯降低；取材前末次體質(zhì)量顯示，正常組、美沙拉嗪組和UCCF 高劑量組體質(zhì)量均較給藥前有增高（P＜0.05 或P＜0.01）。

表3 各組小鼠體質(zhì)量及DAI評(píng)分比較（±s）

表3 各組小鼠體質(zhì)量及DAI評(píng)分比較（±s）

注：與正常組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01，***P ＜0.001；與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。下同。

體質(zhì)量（g）組別正常組模型組美沙拉嗪組UCCF低劑量組UCCF中劑量組UCCF高劑量組n8 8 8 8 8 8造模前21.26±0.56 21.15±1.01 21.25±0.67 20.88±0.91 21.10±0.95 20.75±1.15給藥前22.08±1.21 20.23±0.52*20.30±0.56*20.34±0.55*20.21±0.46*20.03±0.54*給藥后22.23±0.43 18.85±0.52**19.63±0.37**19.30±0.68**19.78±1.28**19.89±0.49**末次體質(zhì)量22.95±0.43 18.79±0.45**20.53±0.39*△△19.63±0.33**19.74±0.33**△20.36±0.72*△△末次DAI評(píng)分（分）0.08±0.14 2.42±0.46*0.42±0.36*△1.59±0.36*△1.13±0.41*△△0.29±0.31△△

2.2 各組小鼠結(jié)腸長度及病理組織學(xué)評(píng)分比較

見表4。結(jié)腸長度方差分析結(jié)果顯示，各組結(jié)腸長度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)一步比較，與正常組相比，模型組及UCCF 低、中劑量組的結(jié)腸長度顯著縮短（P＜0.05或P＜0.01）；與模型組相比，UCCF 中、高劑量組和美沙拉嗪組的結(jié)腸長度顯著延長（P＜0.01）；病理組織學(xué)評(píng)分方面，與正常組相比，模型組、美沙拉嗪組和UCCF 低、中、高劑量組小鼠結(jié)腸組織評(píng)分均顯著升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01或P＜0.001）；相比于模型組，UCCF 高劑量組和美沙拉嗪組結(jié)腸組織評(píng)分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表4 各組小鼠結(jié)腸長度及病理組織學(xué)評(píng)分比較（±s）

表4 各組小鼠結(jié)腸長度及病理組織學(xué)評(píng)分比較（±s）

組 別正常組模型組美沙拉嗪組UCCF低劑量組UCCF中劑量組UCCF高劑量組n8 8 8 8 8 8結(jié)腸長度（cm）10.15±1.01 8.45±0.52**9.49±0.62△△8.75±0.41**8.83±1.02**9.69±0.67△△病理組織學(xué)評(píng)分（分）0.13±0.33 3.13±0.93***1.88±0.60**△△2.38±0.99**2.25±1.09**1.88±0.33**△△

2.3 各組小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)變化

見圖1。正常組小鼠的結(jié)腸黏膜未發(fā)現(xiàn)明顯病理變化；模型組小鼠出現(xiàn)了輕中度的結(jié)腸炎癥損傷，炎癥主要集聚于黏膜層和黏膜下層，模型組小鼠結(jié)腸正常隱窩結(jié)構(gòu)被破壞，腺體扭曲，杯狀細(xì)胞減少，排列紊亂；美沙拉嗪干預(yù)后的小鼠結(jié)直腸炎癥損傷程度較模型組明顯減少，大部分炎癥局限于黏膜層，杯狀細(xì)胞排列有序；UCCF 低劑量組、中劑量組結(jié)腸上皮已經(jīng)修復(fù)，但腺體有輕度扭曲，炎癥集中于黏膜；UCCF 高劑量組結(jié)腸上皮部分已經(jīng)修復(fù)，腺體恢復(fù)狀態(tài)良好，隱窩結(jié)構(gòu)排列有序，未發(fā)現(xiàn)有淋巴細(xì)胞浸潤的現(xiàn)象。

圖1 各組小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)變化（HE染色，200倍）

2.4 各組小鼠結(jié)腸組織TNF-α、IL-1β表達(dá)水平比較

見表5、圖2。與正常組相比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中TNF-α、IL-1β 的mRNA 表達(dá)水平有顯著升高（P＜0.05 或P＜0.01），美沙拉嗪組和UCCF 中、高劑量組結(jié)腸組織中TNF-α、IL-1β 的mRNA 表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05 或P＜0.01）。正常組小鼠結(jié)腸組織中的TNF-α、IL-1β 蛋白存在較少的陽性表達(dá)，且主要分布于結(jié)腸黏膜上；與之對(duì)比的模型組小鼠結(jié)腸組織中TNF-α、IL-1β 蛋白的表達(dá)明顯增多（P＜0.05）；與模型組相比，UCCF 高劑量組和美沙拉嗪組小鼠結(jié)腸黏膜中TNF-α、IL-1β蛋白的表達(dá)明顯下降（P＜0.05），這與qRT-PCR結(jié)果一致。

圖2 各組小鼠結(jié)腸組織TNF-α、IL-1β的表達(dá)（DAB染色，400倍）

表5 各組小鼠結(jié)腸組織TNF-α、IL-1β mRNA表達(dá)水平比較（±s）

表5 各組小鼠結(jié)腸組織TNF-α、IL-1β mRNA表達(dá)水平比較（±s）

組 別正常組模型組美沙拉嗪組UCCF低劑量組UCCF中劑量組UCCF高劑量組n8 8 8 8 8 8 TNF-α mRNA 18.42±0.73 30.12±0.82*19.94±0.87△24.23±0.49 23.80±0.77 21.80±0.55△IL-1β mRNA 11.14±0.50 43.55±0.90**24.33±0.95△37.60±1.0 36.30±0.90△21.90±0.90△

2.5 各組小鼠結(jié)腸組織NF-κB、HIF-1αmRNA和蛋白表達(dá)水平比較

見表6、圖3。與正常組比較，模型組小鼠HIF-1α、NF-κB 的mRNA 表達(dá)和蛋白表達(dá)明顯上升，給藥后美沙拉嗪組及UCCF低劑量、中劑量、高劑量組HIF-1α、NF-κB 的mRNA 表達(dá)及蛋白表達(dá)發(fā)生逆轉(zhuǎn)，表達(dá)降低，其中美沙拉嗪組及UCCF 高劑量組中HIF-1α、NF-κB 的mRNA 表達(dá)和蛋白表達(dá)顯著降低，與模型組比較有顯著差異（P＜0.05或P＜0.01）。

圖3 各組小鼠結(jié)腸組織NF-κB、HIF-1α蛋白表達(dá)條帶

表6 各組小鼠結(jié)腸組織NF-κB、HIF-1α表達(dá)水平比較（±s）

表6 各組小鼠結(jié)腸組織NF-κB、HIF-1α表達(dá)水平比較（±s）

組別正常組模型組美沙拉嗪組UCCF低劑量組UCCF中劑量組UCCF高劑量組n8 8 8 8 8 8 NF-κB mRNA 1.18±0.12 3.29±0.38**1.31±0.21△△2.36±0.19*△1.68±0.17△1.22±0.17△△HIF-1α mRNA 0.83±0.16 2.57±0.34**1.21±0.25△△2.02±0.17*△1.42±0.14△1.15±0.19△△NF-κB/βactin 0.28±0.03 1.0±0.02**0.53±0.04△△0.86±0.05**0.82±0.05**0.51±0.04△△HIF-1α/βactin 0.16±0.02 1.12±0.03**0.38±0.02△△1.02±0.05**0.98±0.04**0.31±0.02△△

3 討 論

UC是一種炎癥性腸病，其主要癥狀是結(jié)腸黏膜的潰瘍和出血，較符合中醫(yī)學(xué)“痢疾”“泄瀉”的疾病特點(diǎn)。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，本病發(fā)病的誘因復(fù)雜，病程長，病情易反復(fù)，但總以濕熱蘊(yùn)腸、氣滯血瘀為其基本病機(jī)。UCCF方中，君藥黃芩、黃連苦寒以清熱燥濕。關(guān)于黃芩，《神農(nóng)本草經(jīng)》有云“主諸熱黃疸，腸澼泄痢”。黃連生用苦寒性強(qiáng)，長于清熱瀉火解毒，亦可用于多種濕熱證，其清熱燥濕之功甚于黃芩，尤擅清中焦之濕熱。兩藥相須為用，使邪有出路，邪去則正安。臣藥黃芪、白術(shù)甘溫以健脾益氣，乃補(bǔ)虛之經(jīng)典藥對(duì)。其中黃芪歸脾肺經(jīng)，具有補(bǔ)氣升陽、利水消腫之效，可用于脾胃氣虛證，白術(shù)長于補(bǔ)脾益氣，燥濕利水，可用于脾胃氣虛證及脾虛濕停之水腫、痰飲，是治療痰飲、水腫之良藥。另佐以茯苓利水滲濕，健脾寧心，木香升降諸氣，使邪有出路。全方君臣分明，各有所主，具有清熱燥濕、健脾利水之功。臨證時(shí)常根據(jù)病情緩急、病機(jī)主次、脾虛、濕熱等癥狀調(diào)整君臣劑量以達(dá)其效。

目前UC 的發(fā)病機(jī)制尚未明確，一般認(rèn)為其與遺傳、環(huán)境、患者結(jié)直腸微生物生態(tài)系統(tǒng)及腸道內(nèi)異常的固有免疫、適應(yīng)性免疫相關(guān)。國內(nèi)外多年基礎(chǔ)研究表明，NF-κB 家族在健康組織中起到控制組織穩(wěn)態(tài)、協(xié)調(diào)細(xì)胞生長和分化、應(yīng)對(duì)外部刺激反應(yīng)等作用，ATREYA I 等［12-14］在相關(guān)研究中已證實(shí)了腸上皮細(xì)胞中NF-κB 活性的高度對(duì)調(diào)控正常腸道穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要，其活動(dòng)失調(diào)與許多腸道疾病狀態(tài)有關(guān)，如IBD 等。HIF-1 是一種能夠適應(yīng)缺氧環(huán)境的調(diào)節(jié)因子，它由HIF-1β 亞基和HIF-1α 亞基組成。ALBOGAMI SM等［15］在研究中表明HIF-1α 對(duì)氧敏感，在低氧條件下易活化，調(diào)控下游靶基因的激活和轉(zhuǎn)錄，啟動(dòng)一系列細(xì)胞對(duì)缺氧刺激的應(yīng)激反應(yīng)。炎癥組織的常見特征是血管功能障礙和免疫細(xì)胞浸潤導(dǎo)致的耗氧量增加，因此，腸道炎癥與黏膜缺氧高度有關(guān)。BAILEY CM 等［16］研究表明，在炎癥中，HIF-1α能調(diào)控免疫細(xì)胞存活，調(diào)節(jié)促炎因子TNF-α、IL-1β 等的表達(dá)。此外，TAYLOR M等［17］發(fā)現(xiàn)，NF-κB和HIF-1α是參與黏膜反應(yīng)調(diào)節(jié)的2個(gè)主要核因子，HIF-1α在抑制炎癥發(fā)生和固有宿主防御反應(yīng)中起重要作用。CLAMBEY ET［18］研究表明HIF-1α 依賴的FoxP3 誘導(dǎo)在黏膜炎癥性缺氧期間能夠調(diào)節(jié)Tregs 細(xì)胞豐度和功能，特定條件下HIF-1α 可通過調(diào)節(jié)特定的信號(hào)通路，包括NF-κB、Akt 和mTOR等，促進(jìn)FoxP3 的表達(dá)，有效調(diào)節(jié)T 細(xì)胞功能，對(duì)降低炎癥表達(dá)、恢復(fù)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定有重要作用，并且保持免疫系統(tǒng)中的免疫耐受性，這可能是本次研究中UCCF 調(diào)節(jié)HIF-1α 進(jìn)而參與抑制炎癥反應(yīng)的重要機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組小鼠的DAI評(píng)分、結(jié)腸黏膜組織評(píng)分顯著升高，結(jié)腸組織中促炎細(xì)胞因子TNF-1α、IL-1β 和NF-κB、HIF-1α mRNA 和蛋白表達(dá)水平明顯升高，結(jié)腸長度下降，鏡下可見小鼠黏膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)諸多炎癥細(xì)胞浸潤導(dǎo)致的病理變化，表明NF-κB/HIF-1α 信號(hào)通路調(diào)節(jié)的炎癥反應(yīng)參與了UC 疾病進(jìn)程。采用UCCF 治療后，各劑量組小鼠DAI 評(píng)分、結(jié)腸黏膜組織評(píng)分以及結(jié)腸組織中促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、NF-κB、HIF-1α 的mRNA 和蛋白表達(dá)均明顯降低，這證實(shí)了UCCF 可通過NF-κB/HIF-1α 信號(hào)通路調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。UCCF 方中的黃芪被證實(shí)可抑制炎癥因子表達(dá)，其內(nèi)含的皂苷及類黃酮對(duì)阻斷氧化應(yīng)激反應(yīng)也有重要作用。此外，UCCF 治療后黏膜病理損傷明顯改善，表明UCCF 對(duì)UC 有較好的治療作用，可通過調(diào)節(jié)NF-κB/HIF-1α信號(hào)通路減輕炎癥反應(yīng)。

綜上所述，UCCF 能夠通過調(diào)節(jié)NF-κB/HIF-1α 信號(hào)通路，達(dá)到控制UC的目的。未來的研究可繼續(xù)深入至細(xì)胞層面，對(duì)相關(guān)作用機(jī)制進(jìn)行更加深入的研究。