費椿堯
(甘肅省定西市安定區(qū)畜牧技術推廣站,甘肅 定西 743000)
1.1 供體母羊與受體母羊 選擇供體母羊應考慮其健康狀況、妊娠史、遺傳性狀等,要求母羊在2~4 周歲內(nèi),具有較大的群體基數(shù),以提升觀察發(fā)情期的準確性。供體母羊膘情在70%左右,不宜過瘦,也不宜過肥。如果供體母羊處于哺乳期,必須提前斷奶30 d,期間加強飼養(yǎng)管理,促進身體恢復。
受體母羊不需考慮遺傳性狀因素,只需要保證健康,繁殖性能良好即可。
1.2 胚胎移植季節(jié) 羊的發(fā)情周期會受外界環(huán)境的影響,尤其是氣候條件的影響,氣溫、光照等條件的變化都會擾亂羊的發(fā)情周期。綿羊的發(fā)情周期具有明顯的季節(jié)性,秋季是綿羊的發(fā)情季節(jié),此時綿羊卵巢機能活躍度不斷上升,卵泡發(fā)育成熟,會表現(xiàn)出發(fā)情的特征。其他季節(jié)綿羊卵巢機能下降,卵泡不發(fā)育,不會表現(xiàn)出發(fā)情狀態(tài)。胚胎移植選擇在綿羊發(fā)情季節(jié)進行效率更高。
1.3 供體羊授精 種公羊撤拴后隔離12 h再放入母羊群。此時處于發(fā)情期的母羊會與其進行交配,記錄人員只需要記錄交配羊的信息即可。完成一次交配后8 h 左右,再放入種公羊進行一次交配,直到母羊不再接受爬跨,以提升母羊受孕率。除采用自然交配方法,還可采用人工授精方法,如應用腹腔鏡授精,直接將種公羊的精液輸入母羊子宮角內(nèi),使母羊受孕率更高。保險起見,間隔12 h后可重新進行一次人工授精。
1.4 藥品與手術工具 進行綿羊胚胎移植前準備好各種藥品以及手術工具。藥物的生產(chǎn)廠家應可靠,有效成分、含量準確合理。經(jīng)過了實驗驗證的藥品,整體性能更加穩(wěn)定。相關藥品包括腎上腺素、普魯卡因、FSH(垂體促卵泡素)、PMSG(孕馬血清促性腺激素)及常規(guī)的消毒液、止血藥等。手術工具用前進行消毒,相關的手術工具包括外科手術剪、止血鉗、鑷子、縫合針及保定架等。
1.5 超數(shù)排卵 綿羊發(fā)情期內(nèi),通過注射一些激素藥物,如上述FSH、PMSG,搭配陰道孕酮栓,降低羊發(fā)育卵泡的閉鎖率,增加發(fā)育成熟卵泡的數(shù)量,讓羊在發(fā)情周期內(nèi)排出更多的成熟卵子。
1.6 同期發(fā)情 綿羊胚胎移植需要供體羊與受體羊身體情況保持一致,二者能夠同期發(fā)情。一般情況下,二者發(fā)情時間越接近,胚胎移植成功率越高。胚胎移植后,所處的子宮環(huán)境與原子宮環(huán)境盡可能一致,胚胎才能更好地適應新的子宮環(huán)境,并繼續(xù)生長發(fā)育,最終順利產(chǎn)出。應用同期發(fā)情方法目前有兩種形式,一種是延長黃體期,常用的方法包括孕酮直接注射法、小管埋植法等,二是縮短黃體期,可以采用氯前列烯醇等藥物。
2.1 準備工作 術前供體母羊、受體母羊禁食24 h,術前2 h禁止飲水。采用保定手術架對羊進行保定,羊處于仰臥體位,頭傾斜向下45°~60°,將四肢捆綁牢固,避免手術時劇烈晃動。完成保定后備皮,備皮位置在羊乳房周圍的腹部區(qū)域,先用肥皂水清洗,再將羊毛刮凈,最后噴灑酒精進行消毒。備皮位置覆蓋手術創(chuàng)巾,創(chuàng)巾用專用創(chuàng)巾鉗固定。
在羊的乳靜脈與腹中線區(qū)域切開皮膚以及連帶的筋膜,然后用手術刀鈍頭一端將羊的腹直肌分離,露出腹股溝管位置。從該位置剖開羊的腹腔,注意切口不宜過大,否則不僅影響后續(xù)的傷口縫合,還會延長傷口愈合時間,增加術后感染風險。打開腹腔后,用食指與中指在羊的骨盆腔、膀胱周圍進行摸索,找出子宮的位置,然后輕輕勾住子宮體,將子宮連帶卵巢拉出,檢查黃體的位置以及卵泡的大小,并做好信息記錄。
2.2 沖胚 沖胚常用輸卵管法和子宮角沖胚法。采用輸卵管法時,從輸卵管傘部喇叭口入手,插入頭皮針,插入深度為2~3 cm,然后用鈍圓夾子進行固定。沖卵管的一端連接頭皮針,另一端與集卵器連接,然后用消毒注射器吸取5~10 mL左右的沖卵液,一只手捏緊羊的子宮角,另一只手推動注射器,將沖卵液注入集卵器。這種沖胚方法的優(yōu)點是可提升卵的回收率,需要的沖卵液也較少,缺點是易出現(xiàn)輸卵管傘部粘連問題。
應用第二種方法時,需用腸鉗將羊的子宮角分叉位置夾住,然后用注射器吸入15~30 mL 沖卵液,再將沖卵針頭插入子宮角尖端,并將針頭與注射器進行連接,最后完成沖卵液的注入。隨著沖卵液注入量增加,子宮角逐步撐大、膨脹,然后用沖卵針頭插入腸鉗上方,將沖卵液輸入集卵杯內(nèi)。采用同法對另一側子宮進行沖卵。這種沖胚方法的優(yōu)點是可減少對輸卵管的損傷,缺點是胚胎回收率較低。
2.3 胚胎鑒別 完成沖胚后需要鑒別胚胎是否可以正常發(fā)育。如果發(fā)現(xiàn)胚卵裂球輪廓清晰,球體飽滿、自然,表面光滑,表明是優(yōu)質可用胚胎。如果胚卵裂球輪廓模糊,球體干癟,表面有毛邊,表明是劣質胚胎,不適合進行胚胎移植。
2.4 胚胎移植 綿羊胚胎移植有兩種方法可供選擇。
2.4.1 常規(guī)手術法 打開綿羊腹腔,掏出子宮與卵巢后,檢查黃體發(fā)育狀況,采用鈍形針頭對受體綿羊子宮角進行穿孔處理,然后將移植管通過子宮角的孔洞插入宮腔,通過移植管向受體羊子宮內(nèi)注射胚胎,最后將子宮復位,并進行縫合。
2.4.2 腹腔鏡法 即在腹腔鏡的幫助下找到子宮后,從另一側入手,將移植針插入腹腔直達子宮,完成胚胎注射。與第一種方法相比,其操作更簡單,但要求操作人員具備豐富的經(jīng)驗,可以準確找出子宮的位置,并選擇恰當?shù)奈恢貌迦胍浦册槨?/p>
完成胚胎移植后進行縫合,縫合要仔細,加強對子宮的保護??p合前做好檢查工作,然后采用2 層縫合法進行縫合,即縫合肌肉層后在縫合創(chuàng)口處撒一些青霉素、鏈霉素粉預防感染,再縫合皮膚層,最后用碘酒對縫合處進行消毒。如發(fā)生術后感染,需要重新縫合。重新縫合時,先用消毒紗布擦掉感染后產(chǎn)生的膿液,再用生理鹽水對感染部位進行沖洗,最后進行全層間斷縫合。完成縫合后,在感染處注入用蒸餾水稀釋的青霉素、鏈霉素防重復感染,后續(xù)加強觀察,做好抗感染工作,直到傷口愈合。
3.1 術后飼養(yǎng)管理 供體羊與受體羊術后加強飼養(yǎng)管理,初期給予溫飲水,并提供易消化的飼料,隨著羊體逐漸恢復,可逐步補充一些全價飼料。飼料循序漸進添加,避免造成過食現(xiàn)象。術后可驅趕羊只適當運動,并加強觀察,以及時發(fā)現(xiàn)異常情況。術后羊飼料中加入維生素,提升免疫能力,促進傷口愈合。只有保障羊只體況良好,移植的胚胎才能繼續(xù)發(fā)育成活。
此外,還應加強返情觀察。返情羊需重新進行移植,防止空懷。如果羊沒有返情,需加強補飼,除飼喂全價優(yōu)質飼料外,可在飼料中加入蛋白質、礦物質等,滿足胚胎成長發(fā)育需求。羊妊娠前期防發(fā)生應激,應營造安靜、舒適的環(huán)境,避免母羊發(fā)生流產(chǎn),羊舍應寬敞,避免擁擠。
3.2 術后護理 供體羊排卵后,進行消除黃體處理,如進行手術縫合時,可注射前列腺素,預防供體羊卵巢上黃體過多,下一輪發(fā)情受到影響。此外,應等待供體羊自然發(fā)情后再進行下一次配種,如此更有利于供體羊身體恢復。
受體羊手術后,可以注射黃體酮,加強飼喂,以利胚胎著床發(fā)育。
防術后感染必須加強飼養(yǎng)環(huán)境的清理、消毒,可每天給羊注射抗生素,降低術后感染概率。如發(fā)現(xiàn)感染病例,可以延長用藥期,加大用藥量。