吳志華, 馬 麗, 陳 劍, 周佳宇

〔1. 南京中醫(yī)藥大學(xué), 江蘇 南京 210023; 2. 江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所(南京中山植物園)江蘇省植物資源研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 江蘇省抗糖尿病藥物篩選技術(shù)服務(wù)中心, 江蘇 南京 210014〕

黑豆是豆科(Fabaceae)大豆屬(GlycineWilld.)藥食同源植物大豆〔Glycinemax(Linn.) Merr.〕的成熟干燥種子,又稱(chēng)黑大豆、烏豆、枝仔豆和櫓豆等。據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典:2020年版》記載,黑豆有益精明目、養(yǎng)血祛風(fēng)、利水、解毒之功效,主治陰虛煩渴、頭暈?zāi)炕?、體虛多汗、腎虛腰痛、水腫尿少、痹痛拘攣、手足麻木和藥食中毒[1]。黑豆中發(fā)揮作用的化合物多數(shù)為多酚類(lèi),而多酚類(lèi)化合物集中于黑豆種皮。黑豆種皮中的多酚類(lèi)化合物具有廣泛的藥用價(jià)值,在抗氧化、抗炎、抗糖尿病和治療心血管疾病方面有顯著的效果[2-8]。研究黑豆種皮中的化學(xué)成分,對(duì)新藥開(kāi)發(fā)有一定的積極作用。

黑豆種皮又稱(chēng)烏衣和料豆衣,其含有多酚類(lèi)成分可分為黃酮類(lèi)、芪類(lèi)、木脂素類(lèi)和酚酸類(lèi),其中黃酮類(lèi)又可分為黃酮、異黃酮、黃酮醇、黃烷酮、黃烷醇、花青素和查耳酮,已報(bào)道的黃酮類(lèi)化合物主要包括矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷、飛燕草素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚、槲皮素、楊梅素、大豆苷和染料木素等[6]。在黑豆的工業(yè)化生產(chǎn)中,通常對(duì)黑豆進(jìn)行脫皮處理,因此黑豆種皮為黑豆制品工業(yè)的副產(chǎn)品。黑豆種皮中富含花色苷,花色苷易溶于水,味香甜,色澤鮮艷,原料易得,生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單[3-4]。本研究采用超高效液相色譜-電噴霧-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-ESI-MS/MS)技術(shù)分析黑豆種皮中的化學(xué)成分,以期為黑豆種皮的開(kāi)發(fā)利用提供基礎(chǔ)資料。

1 材料和方法

1.1 材料

供試黑豆種皮產(chǎn)自內(nèi)蒙古自治區(qū)通遼市科爾沁區(qū),由江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所馬麗副研究員鑒定。

主要試劑:甲醇(色譜純,美國(guó)TEDIA公司);甲酸(分析純,上海久億化學(xué)試劑有限公司);甲醇和無(wú)水乙醇(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);體積分?jǐn)?shù)95%乙醇(分析純,鎮(zhèn)江久億化學(xué)試劑有限公司)。

1.2 方法

稱(chēng)取9.5 kg黑豆種皮在50 L體積分?jǐn)?shù)70%乙醇(甲酸調(diào)節(jié)酸堿度約為pH 3)中避光浸泡2周,過(guò)濾,取濾液,重復(fù)操作1次。合并2次濾液,于60 ℃減壓濃縮至3 L,即為黑豆種皮總提取物。

色譜條件:色譜柱Phenomenex Hypersil 5 μm ODS (C18) 120 ?(250 mm×4.60 mm)(美國(guó)Phenomenex公司);以甲醇為流動(dòng)相A、體積分?jǐn)?shù)0.5%甲酸-水溶液為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫,洗脫程序如下:0～70 min,體積分?jǐn)?shù)5%～45%A;70～80 min,體積分?jǐn)?shù)100%A。柱溫 25 ℃,流速1 mL·min-1,進(jìn)樣量5 μL,DAD檢測(cè)波長(zhǎng)254和520 nm。

質(zhì)譜條件:質(zhì)譜檢測(cè)器ESI離子源,負(fù)離子模式,質(zhì)量掃描范圍m/z100～1 700;霧化器壓力206.85 kPa;干燥氣流速10 mL·min-1;干燥氣溫度350 ℃;毛細(xì)管電壓4 000 V;Fragmentor電壓130 V;碰撞能量20 V。利用Agilent MassHunter B.05.00工作站處理相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),采用峰面積歸一化法[9]計(jì)算各化合物的相對(duì)含量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

利用EXCEL 2010軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié) 果

黑豆種皮乙醇提取物中的化學(xué)成分見(jiàn)表1。由表1可以看出:黑豆種皮乙醇提取物中32個(gè)化合物主要為多酚類(lèi),其中,酚酸類(lèi)化合物的相對(duì)含量為13.38%,黃酮類(lèi)化合物的相對(duì)含量為39.59%。相對(duì)含量較高(大于1%)的化合物分別為兒茶素(10.15%)、反式阿魏酸(7.86%)、二氫黃豆苷元(5.52%)、原花青素B1(5.36%)、3-O-甲基沒(méi)食子酸(3.20%)、白藜蘆醇(2.35%)、奎寧酸(2.32%)、花旗松素(2.31%)、圣草酚(2.06%)、二氫楊梅素(1.39%)、山柰素(1.37%)和異鼠李素(1.14%)。

表1 黑豆種皮乙醇提取物中的化學(xué)成分

進(jìn)一步的分析結(jié)果顯示:黑豆種皮中,飛燕草素-3-O-葡萄糖苷、矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷、芍藥素-3-O-葡萄糖苷和萬(wàn)壽菊素-3-O-葡萄糖苷4個(gè)呈色花色苷類(lèi)化合物的相對(duì)含量為2.88%;兒茶素及以其為前體形成的6個(gè)原花青素衍生物類(lèi)化合物(包括原花青素B1、原花青素B2、原花青素B3、原花青素C1、原花青素C2和B型原花青素四聚體)的相對(duì)含量為18.83%;奎寧酸、3-O-甲基沒(méi)食子酸和反式阿魏酸3個(gè)酚酸類(lèi)化合物的相對(duì)含量為13.38%;異鼠李素、山柰素、花旗松素、牡荊苷、異槲皮苷、圣草酚、二氫楊梅素、異鼠李素-3-O-葡萄糖苷、紫云英苷、金合歡素和桔皮素11個(gè)黃酮類(lèi)化合物的相對(duì)含量為11.31%;二氫黃豆苷元、黃豆黃苷和染料木素3個(gè)異黃酮類(lèi)化合物的相對(duì)含量為7.13%。

黑豆種皮中的主要成分為多酚類(lèi),多酚類(lèi)化合物具有較好的抗炎[10-11]、抗癌[12-14]及抗氧化[15]作用。本研究結(jié)果有利于黑豆種皮的藥理研究和開(kāi)發(fā)利用。