血清S-CD105、periostin、TK1水平與非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系研究

黃光俊,呂增波,張朝青（.貴州省盤(pán)州市人民醫(yī)院,貴州 盤(pán)州 553000;.云南省曲靖市第一人民醫(yī)院,云南 曲靖 655000）

非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）是肺癌最常見(jiàn)的病理類(lèi)型，早中期NSCLC以手術(shù)治療為首選，但是癌組織極易形成微轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)，且早期不易發(fā)現(xiàn)[1]。NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)可導(dǎo)致全身癌細(xì)胞擴(kuò)散，預(yù)后較差，中位生存期為11.4-17.7個(gè)月[2]。因此探尋預(yù)測(cè)NSCLC根治術(shù)后復(fù)發(fā)的生物學(xué)指標(biāo)十分重要。可溶性CD105（SCD105）是CD105的可溶性形式，CD105在內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)上調(diào)，調(diào)控新生血管形成，是癌癥預(yù)后的潛在生物指標(biāo)[3]。骨膜素（periostin）是一種多功能的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，可通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，與腫瘤發(fā)生進(jìn)展密切相關(guān)[4]。胸苷激酶（TK1）是一種參與嘧啶代謝的胞質(zhì)酶，可催化γ-磷酸基團(tuán)添加到胸苷，TK1在惡性腫瘤中過(guò)表達(dá)，且與預(yù)后不良有關(guān)[5]。本研究旨在探討血清S-CD105、periostin、TK1水平與NSCLC根治術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系，為NSCLC根治術(shù)后復(fù)發(fā)診治提供參考依據(jù)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2019年1月-2021年6月我院收治的127例NSCLC患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均接受肺癌根治手術(shù)和淋巴結(jié)系統(tǒng)清掃，經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為NSCLC，符合《中華醫(yī)學(xué)會(huì)肺癌臨床診療指南（2018版）》[6]中NSCLC診斷標(biāo)準(zhǔn)；②術(shù)后定期接受隨訪，至少6個(gè)月；③患者及家屬對(duì)研究?jī)?nèi)容知情同意并簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②術(shù)前CT、MRI、骨掃描等影像檢查已證實(shí)腫瘤細(xì)胞已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；③隨訪失聯(lián)。本研究已獲得我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)室檢查 所有NSCLC患者術(shù)后48h內(nèi)采集靜脈血，檢測(cè)血清S-CD105、periostin、TK1水平。血標(biāo)本處理：采集外周靜脈血3ml注入干燥試管，待血液凝固后取上層血清離心（2000rpm，半徑15cm，時(shí)間10min），然后取上清液冷凍保存。采用UniCel DxI 800化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司）檢測(cè)血清TK1水平，采用ST-360型96孔板多功能全自動(dòng)酶標(biāo)免疫檢測(cè)儀（濟(jì)南巴艾貝斯生物工程有限公司）運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)S-CD105、periostin水平，試劑盒購(gòu)自美國(guó)賽默飛公司。

1.3 臨床資料收集 收集患者年齡、性別、吸煙史、組織學(xué)分型（鱗癌、腺癌、其他）、分化程度（高分化、中分化、低分化）、腫瘤直徑（≥3cm、＜3cm）、T分期（T1、T2、T3）、縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、手術(shù)方式（全肺切除、肺葉切除、肺葉袖式切除）、腫瘤標(biāo)志物[采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清癌胚抗原（CEA）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）水平]。

1.4 隨訪 從手術(shù)結(jié)束后隨訪至患者復(fù)發(fā)或隨訪期滿，隨訪期為24個(gè)月，每3個(gè)月門(mén)診復(fù)查一次，接受CT、PET-CT、超聲、纖支鏡、MRI、骨掃描、血清腫瘤標(biāo)志物等檢查，確定復(fù)發(fā)情況，根據(jù)術(shù)后是否發(fā)生復(fù)發(fā)將患者分為復(fù)發(fā)組和無(wú)復(fù)發(fā)組。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SPSS25.00進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，經(jīng)Kolmogorov–Smirnov檢驗(yàn)的計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以[例（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)。多因素Logistic回歸分析NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素。受試者工作特征曲線（ROC）分析S-CD105、periostin、TK1以及聯(lián)合預(yù)測(cè)NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的價(jià)值。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床資料以及血清S-CD105、periostin、TK1水平比較隨訪期間53例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率41.73%。復(fù)發(fā)組年齡、中低分化、T3、縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血清S-CD105、periostin、TK1、CEA、NSE水平高于無(wú)復(fù)發(fā)組（P＜0.05），兩組性別、吸煙史、組織學(xué)分型、腫瘤直徑、手術(shù)方式比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 復(fù)發(fā)組和無(wú)復(fù)發(fā)組基線資料、血清S-CD105、periostin、TK1水平差異[,n(%)]

表1 復(fù)發(fā)組和無(wú)復(fù)發(fā)組基線資料、血清S-CD105、periostin、TK1水平差異[,n(%)]

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2.2 影響NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素分析 建立Logistic回歸方程，以年齡、分化程度、T分期、縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、S-CD105、periostin、TK1、CEA、NSE為自變量，NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)為因變量（賦值：0=否，1=是），ENTER法篩選變量（入=0.05，出=0.10）。結(jié)果顯示，縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高水平S-CD105、高水平periostin、高水平TK1是NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 影響NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素分析

2.3 血清S-CD105、periostin、TK1預(yù)測(cè)NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的價(jià)值血清S-CD105、periostin、TK1預(yù)測(cè)NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的曲線下面積分別為0.700、0.717、0.718，其中periostin、TK1曲線下面積高于CEA（Z=2.141、2.086，P= 0.032、0.037），S-CD105與CEA比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Z=1.747，P=0.081），S-CD105、periostin、TK1曲線下面積均高于NSE（Z=2.766、3.139、2.905，P=0.006、0.002、0.004）。聯(lián)合S-CD105、periostin、TK1預(yù)測(cè)NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的曲線下面積為0.892，高于單獨(dú)S-CD105、periostin、TK1（Z=4.358、3.848、3.611，P=0.000、0.000、0.000），見(jiàn)表3和圖1。

表3 S-CD105、periostin、TK1預(yù)測(cè)NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的效能

3 討論

早期預(yù)測(cè)NSCLC根治性手術(shù)后復(fù)發(fā)有助于指導(dǎo)臨床治療，為臨床術(shù)后聯(lián)合放化療提供依據(jù)。常規(guī)血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方便、經(jīng)濟(jì)，但是靈敏度和特異性不理想，在腫瘤復(fù)發(fā)評(píng)估中應(yīng)用較為局限，因此有必要探討更為敏感的生物標(biāo)志物。

CD105又稱內(nèi)皮糖蛋白，是一種I型同源二聚體整合跨膜糖蛋白和輔助轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）受體，主要表達(dá)于血管內(nèi)皮和基質(zhì)細(xì)胞，在增殖的內(nèi)皮細(xì)胞上特異性高度表達(dá)，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞活化和增殖，促使新生血管生成，與惡性腫瘤發(fā)生和進(jìn)展有關(guān)[7]。S-CD105作為S-CD105的可溶性形式，與細(xì)胞中S-CD105表達(dá)有密切相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)S-CD105與NSCLC根治術(shù)后復(fù)發(fā)也存在密切關(guān)系，復(fù)發(fā)組血清S-CD105水平明顯高于無(wú)復(fù)發(fā)組，S-CD105水平增高是NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素，說(shuō)明S-CD105水平增高可能促使NSCLC術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)。分析可能的機(jī)制為：CD105通過(guò)TGF-β1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)促使內(nèi)皮細(xì)胞增殖分化，基質(zhì)內(nèi)內(nèi)源性血管生長(zhǎng)因子（VEGF）的合成，誘導(dǎo)新生血管和血管網(wǎng)絡(luò)形成[7]，導(dǎo)致NSCLC增殖、遷移和復(fù)發(fā)。

periostin是一種由信號(hào)肽組成的多模塊蛋白質(zhì)，在骨膜、成纖維細(xì)胞、富含膠原蛋白的結(jié)締組織中表達(dá)，periostin的FAS1域和N端EMI域與細(xì)胞外基質(zhì)蛋白結(jié)合調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖分化，促進(jìn)骨發(fā)育，參與組織修復(fù)和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換過(guò)程[8]。研究[9]表明，periostin與NSCLC也存在密切關(guān)系，NSCLC癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞的periostin表達(dá)增高，且與NSCLC病理分期、惡性程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)periostin與NSCLC根治術(shù)后復(fù)發(fā)亦有關(guān)，periostin水平增高是NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素，表明periostin可作為NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)指標(biāo)。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化與肺癌術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)，periostin可能通過(guò)p38/細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶信號(hào)通路促使Snail和Twist表達(dá)，促使上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，增加細(xì)胞遷移潛力[10]，導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)。

TK1是一種DNA補(bǔ)救途徑酶，在胞質(zhì)溶膠內(nèi)轉(zhuǎn)化為單磷酸鹽形式（dTMP），dTMP被胞質(zhì)溶膠內(nèi)連續(xù)酶轉(zhuǎn)化為三磷酸形式的脫氧胸苷三磷酸（dTTP），dTTP再通過(guò)核孔復(fù)合物被動(dòng)輸入細(xì)胞核，參與DNA合成和轉(zhuǎn)錄[11]。有研究[12]顯示，TK1水平與乳腺癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移均存在正相關(guān)關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)TK1與NSCLC患者根治術(shù)后復(fù)發(fā)亦存在密切關(guān)系，TK1水平增高是NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素，提示TK1參與NSCLC術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)過(guò)程，推測(cè)可能的機(jī)制為MAP激酶途徑激活上調(diào)TK1表達(dá)，TK1被轉(zhuǎn)錄因子MAZ轉(zhuǎn)錄上調(diào)，TK1通過(guò)誘導(dǎo)生長(zhǎng)和分化因子15表達(dá)促進(jìn)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)，增加癌細(xì)胞侵襲性和轉(zhuǎn)移能力[13]，導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)。

本研究ROC分析結(jié)果顯示S-CD105、periostin、TK1預(yù)測(cè)NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的曲線下面積高于常規(guī)腫瘤標(biāo)志物CEA、NSE，說(shuō)明S-CD105、periostin、TK1在NSCLC預(yù)后預(yù)測(cè)中具有較高的價(jià)值。聯(lián)合S-CD105、periostin、TK1后預(yù)測(cè)效能較單獨(dú)指標(biāo)明顯增高，提示聯(lián)合檢測(cè)可提高預(yù)測(cè)效能，為臨床NSCLC根治術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)判提供更可靠的信息?；貧w分析還顯示縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與NSCLC根治術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)，臨床可結(jié)合高危因素和血清學(xué)標(biāo)志物識(shí)別高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)患者，強(qiáng)化術(shù)后放化療，以控制病情，預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)。

總之，NSCLC根治術(shù)后復(fù)發(fā)患者血清S-CD105、periostin、TK1水平均增高，S-CD105、periostin、TK1水平增高是NSCLC患者術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素，可作為復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)指標(biāo)。