范祺，張博華，王麗，王崇隊(duì)，張明，馬超

（中華全國(guó)供銷(xiāo)合作總社 濟(jì)南果品研究所，山東 濟(jì)南 250220）

桑黃（Sanghuangporussanghuang）又名桑耳，是一種珍貴的多年生大型藥用真菌[1]。桑黃始載于《藥性論》，具有活血、止血、化飲、止瀉的功效[2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，桑黃在國(guó)外主要分布于東亞、東南亞、澳洲、美洲等地，國(guó)內(nèi)分布于東北、西北、西南等地[3-4]。桑黃含有多糖類(lèi)、黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)、多酚類(lèi)、甾類(lèi)、吡喃酮類(lèi)及生物堿等活性成分，其中多糖、黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)為桑黃的主要功能活性成分[5]。桑黃因具有顯著的抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗炎及降血糖等功能而引起了廣泛關(guān)注。

蒸汽爆破技術(shù)是一種能在毫秒級(jí)實(shí)現(xiàn)蒸汽爆破的彈射式技術(shù)，其原理是原料在高溫、高壓的密閉環(huán)境下，物料被通入的水蒸氣濕潤(rùn)后膨脹，當(dāng)瞬間釋放壓力時(shí)，原料體積迅速膨脹，細(xì)胞“爆破”，瞬間打破原料微觀結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞變成多孔結(jié)構(gòu)，從而促進(jìn)天然活性成分的溶出[6-7]。蒸汽爆破可以使多糖內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，促進(jìn)分子間的相互交聯(lián)、解聚和新官能團(tuán)的形成，從而達(dá)到改變食品組分加工特性和功能特性的目的[8-9]。有關(guān)蒸汽爆破對(duì)多糖活性成分的研究已有很多，徐一凡等[10]利用蒸汽爆破處理桑黃子實(shí)體多糖，多糖溶出率提高了2 倍以上。張博華等[11]利用蒸汽爆破提取靈芝子實(shí)體多糖，經(jīng)過(guò)蒸汽爆破處理后的樣品多糖溶出率是未處理樣品的1.86 倍，表明蒸汽爆破在促進(jìn)多糖溶出方面具有較強(qiáng)優(yōu)勢(shì)。

瓦尼桑黃（Sanghuangporusvaninii）是一種廣泛栽培的桑黃品種，也是中藥飲片炮制常用的原料[12]。目前，對(duì)桑黃子實(shí)體的功效研究主要集中在抗腫瘤、抗炎、抗氧化、抗菌和保肝作用方面的研究，而對(duì)于降血糖的研究相對(duì)較少[13-15]。本研究以瓦尼桑黃子實(shí)體為研究對(duì)象，通過(guò)改變蒸汽爆破參數(shù)，提高瓦尼桑黃多糖溶出率，并比較蒸汽爆破處理前后桑黃單糖組成差異，通過(guò)α-葡萄糖苷酶體外降血糖試驗(yàn)和斑馬魚(yú)體內(nèi)降血糖試驗(yàn)，來(lái)驗(yàn)證蒸汽爆破處理對(duì)瓦尼桑黃多糖降血糖功效的提升作用，以期為將來(lái)以桑黃多糖為原料開(kāi)發(fā)相關(guān)降血糖藥品提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

三年生瓦尼桑黃子實(shí)體：臨清市黃河故道古桑黃研發(fā)中心；16 種單糖標(biāo)準(zhǔn)品（巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、果糖、核糖、半乳糖醛酸、葡糖醛酸、氨基半乳糖鹽酸鹽、鹽酸氨基葡萄糖、N-乙酰-D 氨基葡萄糖、古洛糖醛酸、甘露糖醛酸）（均為分析純）：江蘇博睿糖生物有限公司；苯酚、濃硫酸、過(guò)氧乙酸鈉、碳酸鈉、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、乙醇、磷酸鹽、水楊酸、溴化鉀（均為分析級(jí)）：上海源葉生物科技有限公司；4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（4-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside，pNPG）、大黃素、α-葡萄糖苷酶（20 U/mg）、三卡因：美國(guó)Sigma 公司；野生型斑馬魚(yú)AB 品系：山東省科學(xué)院生物研究所；2-NBDG：美國(guó)賽默飛世爾科技公司。

1.2 儀器與設(shè)備

ME-104 電子天平：梅特勒-托利多儀器有限公司；SHA-B 雙功能水浴恒溫振蕩器：江蘇杰瑞爾電器有限公司；UV1000 紫外分光光度計(jì)：上海天美科學(xué)儀器有限公司；RE-501 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海越眾儀器設(shè)備有限公司；TGL-10B 高速臺(tái)式離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器有限公司；QBS-80 型蒸汽爆破設(shè)備：鶴壁政道啟寶實(shí)業(yè)有限公司；RH-600A 高速粉碎機(jī)：浙江榮浩工貿(mào)有限公司；ICS5000 離子色譜儀：美國(guó)賽默飛世爾科技公司；FT-IR650 傅里葉變換紅外光譜儀：天津港東科技發(fā)展股份有限公司；Phenom Pro 型掃描電子顯微鏡：荷蘭復(fù)納科學(xué)儀器有限公司；SZX16 型熒光顯微鏡及DP2-BSW 圖像采集系統(tǒng)：日本Olympus 公司；Forma 3111型水套式CO2培養(yǎng)箱：美國(guó)Forma 公司；斑馬魚(yú)養(yǎng)殖飼養(yǎng)設(shè)備、恒溫培養(yǎng)箱：北京愛(ài)生科技發(fā)展有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理

瓦尼桑黃子實(shí)體在80 ℃條件下烘干至恒重，用高速粉碎機(jī)粉碎后過(guò)80 目篩，即得瓦尼桑黃子實(shí)體粉末。

1.3.2 瓦尼桑黃多糖提取及含量測(cè)定

參照史玉寶等[16]的方法并稍作修改，精密稱(chēng)取樣品粉末1.0 g，加50 mL 蒸餾水回流提取2 h，趁熱抽濾，蒸餾水洗滌濾器和濾渣，將提取液水浴濃縮至20 mL，加乙醇100 mL，搖勻。在4 ℃條件下靜置6 h 后，常溫下3 000 r/min 離心30 min，用蒸餾水溶解沉淀并定容至50 mL，采用苯酚濃硫酸法在490 nm 處測(cè)定吸光度，并計(jì)算多糖含量。

1.3.3 單因素試驗(yàn)

取瓦尼桑黃子實(shí)體粉末100 g，隔夜復(fù)水調(diào)整含水率至30%，分別研究蒸汽爆破壓力（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 MPa）和蒸汽爆破維壓時(shí)間（60、120、180、240、300、360 s）對(duì)物料瓦尼桑黃多糖溶出率的影響，將蒸汽爆破后的樣品收集，80 ℃烘干打粉，多糖提取及含量測(cè)定參照1.3.2。

1.3.4 單糖組成測(cè)定

1.3.4.1 色譜方法

色譜柱為Dionex CarbopacTMPA20（3 mm×150 mm）；流動(dòng)相A：H2O；流動(dòng)相B：250 mmol/L NaOH；流動(dòng)相C：50 mmol/L NaOH 和500 mmol/L NaOAc；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：30 ℃；檢測(cè)器：電化學(xué)檢測(cè)器。

1.3.4.2 單糖標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

取16 種單糖標(biāo)準(zhǔn)品（巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、果糖、核糖、半乳糖醛酸、葡糖醛酸、氨基半乳糖鹽酸鹽、鹽酸氨基葡萄糖、N-乙酰-D 氨基葡萄糖、古洛糖醛酸、甘露糖醛酸）配制成10 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液。取各單糖標(biāo)準(zhǔn)溶液精密配制0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0 mg/L 梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)絕對(duì)定量方法，測(cè)定不同單糖質(zhì)量，根據(jù)單糖摩爾質(zhì)量計(jì)算出摩爾比。

1.3.5 掃描電鏡分析

將處理后的瓦尼桑黃子實(shí)體粉末樣品于80 ℃烘箱中干燥至恒重，采用濺射鍍膜法進(jìn)行表面鍍金，在10 kV 加速電壓下掃描，觀察樣品的微觀結(jié)構(gòu)，放大倍數(shù)為1 000 倍和5 000 倍。

1.3.6 傅里葉變換紅外光譜儀分析

稱(chēng)取2 mg 凍干后的瓦尼桑黃多糖和100 mg 干燥KBr 粉末于研缽中研磨均勻，放入壓模器制成透明片后進(jìn)行掃描，掃描波數(shù)4 000～500 cm-1、掃描32 次、分辨率4 cm-1，重復(fù)測(cè)定3 次。

1.3.7 瓦尼桑黃多糖體外降血糖試驗(yàn)

瓦尼桑黃多糖抑制α-葡萄糖苷酶的測(cè)定參照胡瑩瑩等[17]的方法并稍作修改，于試管中依次加入0.5 mL濃度為0.1 mmol/L 磷酸鹽緩沖溶液、0.5 mL 樣品溶液和0.1 mL α-葡萄糖苷酶酶液，37 ℃水浴15 min，加入0.5 mL 濃度為2.5 mmol/L pNPG 溶液，37 ℃水浴15 min，最后加入1 mL 0.2 mol/L Na2CO3終止反應(yīng)，于405 nm 處測(cè)定吸光度，并以阿卡波糖作為陽(yáng)性參照。α-葡萄糖苷酶活性抑制率（Y，%）的計(jì)算公式如下。

式中：A1為不加待測(cè)樣品反應(yīng)后的吸光度；A2為加入待測(cè)樣品反應(yīng)后的吸光度；A3為只加待測(cè)樣品反應(yīng)后的吸光度。

1.3.8 斑馬魚(yú)試驗(yàn)

1.3.8.1 安全劑量試驗(yàn)

選用受精后3 d（3 days post fertilization，3 dpf）的健康野生斑馬魚(yú)AB 品系，加入到24 孔板中培養(yǎng)，每孔10 條魚(yú)、2 mL 培養(yǎng)液。設(shè)置空白組和樣品組，空白組為正常魚(yú)水飼養(yǎng)，樣品組為含有不同濃度的瓦尼桑黃多糖?？装逯糜?8.5 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天光照和黑暗時(shí)間分別為14 h 和10 h，每天更換新鮮魚(yú)水。在顯微鏡下觀察，并對(duì)其死亡數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.3.8.2 促葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)功能測(cè)定

選用3 dpf 的AB 品系斑馬魚(yú)，加入到24 孔板中培養(yǎng)，每孔10 條魚(yú)、2 mL 培養(yǎng)液。隨機(jī)分配為空白組（Ctl）、2-NBDG 組、樣品組、陽(yáng)性藥組（大黃素）。空白組和2-NBDG 組斑馬魚(yú)給予正常養(yǎng)魚(yú)水飼養(yǎng)。樣品組加入不同濃度多糖樣品，處理1 h，更換新鮮魚(yú)水。陽(yáng)性藥組加入濃度為10 μmol/L 大黃素，處理1 h，更換新鮮魚(yú)水?？瞻捉M繼續(xù)在新鮮魚(yú)水中正常飼養(yǎng)，2-NBDG、樣品組和陽(yáng)性藥組加入濃度為0.6 mmol/L 的2-NBDG，處理3 h，吸出原來(lái)的魚(yú)水，用新鮮魚(yú)水洗滌3 次，用三卡因麻醉，將含有甲基纖維素的載玻片固定斑馬魚(yú)拍照，用Image-J 軟件計(jì)算斑馬魚(yú)體內(nèi)和眼部的平均熒光強(qiáng)度。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用Origin 9.0 作圖，并用SPSS 20.0 進(jìn)行顯著性分析。光譜數(shù)據(jù)使用OMNIC 8.2 軟件進(jìn)行處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 蒸汽爆破壓力對(duì)瓦尼桑黃多糖溶出率的影響

蒸汽爆破壓力對(duì)多糖溶出率的影響見(jiàn)圖1。

由圖1 可知，當(dāng)蒸汽爆破壓力為0.2～1.2 MPa 時(shí)，隨著汽爆壓力的增加，瓦尼桑黃多糖溶出率呈先升高后降低的趨勢(shì)。當(dāng)蒸汽爆破壓力為0.8 MPa 時(shí)，瓦尼桑黃多糖溶出率最高，為1.45%。因此，選擇0.8 MPa為最適蒸汽爆破壓力。蒸汽爆破的主要作用機(jī)理分為兩方面，一方面是高溫高壓水蒸氣滲入到植物組織內(nèi)部，在瞬時(shí)降壓時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞壁表面產(chǎn)生裂縫和微孔，在提取時(shí)，提取溶劑更容易滲入，促進(jìn)可溶性多糖溶出；另一方面是由于蒸汽爆破過(guò)程的高溫高壓條件會(huì)引發(fā)纖維素和木質(zhì)素等大分子物質(zhì)部分降解成糖類(lèi)，一定程度提高了可溶性多糖含量[6]。

2.2 蒸汽爆破維壓時(shí)間對(duì)瓦尼桑黃多糖溶出率的影響

蒸汽爆破維壓時(shí)間對(duì)瓦尼桑黃多糖溶出率的影響見(jiàn)圖2。

由圖2 可知，當(dāng)蒸汽爆破壓力為0.8 MPa、蒸汽爆破維壓時(shí)間為60～360 s 時(shí)，隨著蒸汽爆破維壓時(shí)間的延長(zhǎng)，瓦尼桑黃多糖溶出率呈先升高后降低的趨勢(shì)。蒸汽爆破維壓時(shí)間為240 s 時(shí)，多糖溶出率最高，為1.68%，繼續(xù)延長(zhǎng)維壓時(shí)間，多糖溶出率下降，因此選擇240 s 為最適維壓時(shí)間。

2.3 蒸汽爆破對(duì)子實(shí)體單糖組成的影響

表1 為瓦尼桑黃多糖中單糖種類(lèi)及相對(duì)含量的差異。

表1 不同蒸汽爆破壓力條件下瓦尼桑黃單糖組成差異Table 1 The difference of monosaccharide composition of Sanghuangporus vaninii under different steam explosion pressures

由表1 可知，瓦尼桑黃中含量相對(duì)較高的單糖分別為巖藻糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和葡糖醛酸，且葡萄糖占比最高。瓦尼桑黃中均未檢測(cè)出氨基半乳糖鹽酸鹽、鼠李糖、N-乙酰-D 氨基葡萄糖、果糖、核糖和甘露糖醛酸。隨著蒸汽爆破壓力的增大，單糖的組成比例也在不斷變化，葡萄糖占比逐漸上升，當(dāng)蒸汽爆破壓力為0.8 MPa 時(shí)，葡萄糖占比達(dá)到0.620，而其他單糖（木糖和半乳糖）占比下降，這可能是因?yàn)槠l(fā)一部分纖維素和半纖維素水解，導(dǎo)致單糖比例產(chǎn)生差異，也可能是高溫高壓環(huán)境影響了單糖結(jié)構(gòu)。葛青等[18]發(fā)現(xiàn)桑黃子實(shí)體中主要的單糖為巖藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和甘露糖。陳體強(qiáng)等[19]研究發(fā)現(xiàn)桑黃子實(shí)體多糖主要由甘露糖、半乳糖、葡萄糖組成，摩爾比為0.260∶0.112∶1.000。Kim 等[20]測(cè)定的桑黃子實(shí)體多糖部分由甘露糖、半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖和木糖組成，與本研究結(jié)果相似，同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)蒸汽爆破后的子實(shí)體單糖的組成組分中，葡萄糖的占比提高，而木糖和半乳糖占比下降。蒸汽爆破可以促進(jìn)水溶性多糖和小分子多糖的溶出，改變功能性多糖的結(jié)構(gòu)。蒸汽爆破通過(guò)破壞功能性多糖的結(jié)構(gòu)和氫鍵，改變了多糖中葡萄糖、木糖與半乳糖的相對(duì)含量[21]。

2.4 瓦尼桑黃多糖傅里葉變換紅外試驗(yàn)

瓦尼桑黃多糖組分的紅外光譜結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 瓦尼桑黃多糖傅里葉變換紅外光譜圖Fig.3 Fourier transform infrared spectrum of polysaccharide from Sanghuangporus vaninii

由圖3 可知，吸收帶在3 600～3 200 cm-1是—OH的伸縮振動(dòng)吸收峰，這個(gè)區(qū)域的吸收峰是糖類(lèi)的特征峰。蒸汽爆破處理后瓦尼桑黃多糖吸收峰峰形變窄，吸收強(qiáng)度提高，說(shuō)明蒸汽爆破處理可能破壞了纖維素之間的氫鍵，使更多的羥基基團(tuán)暴露。3 399 cm-1處是O—H 的伸縮振動(dòng)吸收峰，是糖類(lèi)的特征峰。在2 962、2 927 cm-1處有吸收峰，可能歸屬于C—H 伸縮振動(dòng)。在1 635 cm-1處有一個(gè)吸收峰，可能歸屬于結(jié)晶水。在1 558 cm-1處有吸收峰，可能歸屬于C O 非對(duì)稱(chēng)伸縮振動(dòng)。在1 417、1 139、1 072 cm-1處有吸收峰，可能歸屬于C—O 伸縮振動(dòng)。在1 016 cm-1處有吸收峰，可能歸屬于O—H 變角振動(dòng)。在875 cm-1處有吸收峰，可能歸屬于吡喃環(huán)的端基差向異構(gòu)C—H 以外的赤道鍵的C—H 變角振動(dòng)。蒸汽爆破處理后的樣品，吸收峰發(fā)生一定程度的紅移，說(shuō)明蒸汽爆破處理對(duì)瓦尼桑黃多糖的微觀結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了影響。

2.5 蒸汽爆破對(duì)瓦尼桑黃微觀結(jié)構(gòu)的影響

蒸汽爆破處理前后的瓦尼桑黃原料電子掃描顯微鏡結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 瓦尼桑黃子實(shí)體電鏡圖Fig.4 Electron microscopic images of Sanghuangporus vaninii

由圖4 可知，未蒸汽爆破時(shí)瓦尼桑黃微觀結(jié)構(gòu)完整，呈現(xiàn)樹(shù)枝狀，連接緊密。當(dāng)蒸汽爆破壓力為0.4 MPa時(shí)，子實(shí)體斷裂，成為片狀；當(dāng)壓力增加到0.8 MPa，組織結(jié)構(gòu)從內(nèi)部開(kāi)始破裂，進(jìn)一步碎片化；當(dāng)蒸汽爆破壓力為1.2 MPa 時(shí)，瓦尼桑黃呈現(xiàn)疏松的粉末狀。表明蒸汽爆破改變了瓦尼桑黃的微觀結(jié)構(gòu)，蒸汽爆破后瓦尼桑黃內(nèi)部比表面積和空隙率明顯增大，因此能大大增加與提取試劑的接觸體積，提高多糖的溶出率。

2.6 瓦尼桑黃多糖體外降血糖試驗(yàn)

以阿卡波糖為陽(yáng)性對(duì)照，測(cè)定不同質(zhì)量濃度瓦尼桑黃多糖及阿卡波糖對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制作用，結(jié)果見(jiàn)圖5。

由圖5 可知，瓦尼桑黃多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶活性產(chǎn)生了明顯的抑制作用。樣品質(zhì)量濃度在0.1～0.3 mg/mL時(shí)，瓦尼桑黃多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用具有劑量濃度依賴(lài)性，經(jīng)過(guò)蒸汽爆破處理的瓦尼桑黃多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制作用更強(qiáng)，多糖濃度為0.3 mg/mL，抑制率達(dá)到65%，兩者的抑制作用均低于阿卡波糖的抑制作用。

2.7 斑馬魚(yú)試驗(yàn)

2.7.1 安全劑量

以不同劑量的多糖處理不同時(shí)期的斑馬魚(yú)幼魚(yú)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 瓦尼桑黃多糖對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)安全劑量測(cè)試Table 2 Safe dose test of Sanghuangporus vaninii polysaccharide to zebrafish

由表2 可知，在4 dpf 時(shí)，經(jīng)過(guò)蒸汽爆破處理的多糖不會(huì)引起斑馬魚(yú)的死亡，在6 dpf 時(shí)，在400 μg/mL的濃度下引起斑馬魚(yú)死亡，當(dāng)多糖濃度為1 600 μg/mL時(shí)，死亡率升高明顯。未經(jīng)過(guò)蒸汽爆破處理提取的多糖表現(xiàn)出較強(qiáng)的急性毒性，在400 μg/mL 的濃度下即可引起較高的死亡率。蒸汽爆破影響多糖的組成比例及活性強(qiáng)弱，導(dǎo)致斑馬魚(yú)對(duì)其耐受度不同。根據(jù)以上結(jié)果，確定蒸汽爆破處理的多糖的安全劑量為≤800 μg/mL，未蒸汽爆破處理的多糖安全劑量為≤400 μg/mL。

2.7.2 降血糖功效評(píng)價(jià)

斑馬魚(yú)體內(nèi)熒光效果圖見(jiàn)圖6。

圖6 斑馬魚(yú)體內(nèi)熒光效果圖Fig.6 Fluorescence images of zebrafish

如圖6 所示，空白組斑馬魚(yú)體內(nèi)可以觀察到微弱的綠色熒光，腹腔內(nèi)熒光強(qiáng)度相對(duì)較強(qiáng)，這是由斑馬魚(yú)組織內(nèi)的維生素C、去氫抗壞血酸等小分子化合物產(chǎn)生的熒光。以0.6 mmol/L 2-NBDG 處理3 h 后，斑馬魚(yú)體內(nèi)和眼部的熒光強(qiáng)度均增強(qiáng)，這說(shuō)明斑馬魚(yú)體內(nèi)能夠攝入一定量的2-NBDG。以蒸汽爆破后的多糖樣品處理斑馬魚(yú)1 h，然后用2-NBDG 處理3 h 后，斑馬魚(yú)體內(nèi)和眼部的綠色熒光明顯增強(qiáng)，且熒光強(qiáng)度隨著樣品濃度的增加呈遞增趨勢(shì)，表明蒸汽爆破后的樣品可明顯促進(jìn)2-NBDG 在斑馬魚(yú)體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)效率。

瓦尼桑黃多糖、大黃素和2-NBDG 作用下斑馬魚(yú)體內(nèi)和斑馬魚(yú)眼部平均熒光強(qiáng)度見(jiàn)圖7 和圖8。

圖7 瓦尼桑黃多糖、大黃素和2-NBDG 作用下斑馬魚(yú)體內(nèi)平均熒光強(qiáng)度Fig.7 Mean fluorescence intensity in zebrafish under the effects of Sanghuangporus vaninii polysaccharide，emodin and 2-NBDG

圖8 瓦尼桑黃多糖、大黃素和2-NBDG 作用下斑馬魚(yú)眼部平均熒光強(qiáng)度Fig.8 Mean fluorescence intensity in zebrafish eye under the effects of Sanghuangporus vaninii polysaccharide，emodin and 2-NBDG

由圖7 和圖8 可知，經(jīng)過(guò)蒸汽爆破處理的多糖濃度為32 μg/mL 時(shí)，斑馬魚(yú)體內(nèi)和斑馬魚(yú)眼部的熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，當(dāng)多糖濃度達(dá)到128 μg/mL 時(shí)，熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，與大黃素的促2-NBDG 轉(zhuǎn)運(yùn)能力接近。未蒸汽爆破處理的樣品也可以引起斑馬魚(yú)體內(nèi)和眼部的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，但是與蒸汽爆破處理的樣品相比，其強(qiáng)度相對(duì)較弱，表明蒸汽爆破后的樣品具有良好的降血糖功效。有關(guān)蒸汽爆破促進(jìn)多糖功能活性的研究已有很多，蒸汽爆破處理后的牛膝多糖抗氧化性顯著增加，清除DPPH 自由基能力由77.9%增至90.1%[22]。Liu 等[23]利用蒸汽爆破提取葡萄中的多糖，發(fā)現(xiàn)蒸汽爆破處理后的多糖能明顯提高α-葡萄糖苷酶抑制率。Liang 等[24]研究了蒸汽爆破預(yù)處理對(duì)茯苓多糖免疫刺激活性的影響，蒸汽爆破處理過(guò)的多糖對(duì)細(xì)胞的吞噬能力、腫瘤壞死因子-α 和白細(xì)胞介素-6 的分泌均有促進(jìn)作用，功能活性增強(qiáng)的原因可能歸結(jié)于內(nèi)部官能團(tuán)的改變、生物利用度的提高等因素。

3 討論與結(jié)論

本研究通過(guò)蒸汽爆破預(yù)處理瓦尼桑黃，驗(yàn)證了蒸汽爆破壓力和維壓時(shí)間對(duì)瓦尼桑黃多糖溶出率的影響。經(jīng)過(guò)蒸汽爆破處理的瓦尼桑黃多糖溶出率明顯提升，最高達(dá)到1.68%。但當(dāng)蒸汽爆破壓力和維壓時(shí)間超過(guò)一定限度后，多糖溶出率反而下降。過(guò)高的蒸汽爆破壓力和過(guò)長(zhǎng)的維壓時(shí)間，容易引起樣品焦化，多糖組織結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，導(dǎo)致溶出率降低。未蒸汽爆破時(shí)瓦尼桑黃微觀結(jié)構(gòu)完整，呈現(xiàn)樹(shù)枝狀，連接緊密。經(jīng)過(guò)蒸汽爆破處理后，從內(nèi)部開(kāi)始破裂，進(jìn)一步碎片化，并最終呈現(xiàn)疏松的粉末狀。蒸汽爆破處理后的多糖，吸收峰發(fā)生一定程度的紅移，表明蒸汽爆破處理對(duì)瓦尼桑黃多糖的微觀結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了影響，并且單糖組成比例也發(fā)生了變化。

本文探究瓦尼桑黃多糖的降血糖功效，經(jīng)過(guò)蒸汽爆破處理的瓦尼桑黃多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制作用更強(qiáng)，抑制率最高可達(dá)65%。在斑馬魚(yú)試驗(yàn)中，蒸汽爆破處理的樣品有更高的安全劑量，可明顯促進(jìn)2-NBDG 在斑馬魚(yú)體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)效率，表明經(jīng)過(guò)蒸汽爆破處理后，樣品的降血糖功效增強(qiáng)。

綜上所述，蒸汽爆破作為一種新穎的預(yù)處理方式，不僅可以提高瓦尼桑黃多糖的溶出率，還能顯著提升其降血糖功效。將相關(guān)的瓦尼桑黃子實(shí)體蒸汽爆破處理，開(kāi)發(fā)降血糖飲片茶，具有重要意義。