葛菲 朱慧 程凱 陸宇 徐建

異煙肼通過抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成,能有效地阻止結(jié)核分枝桿菌的生長(zhǎng)和繁殖,作為一線抗結(jié)核藥品被廣泛應(yīng)用于結(jié)核病的治療。異煙肼的代謝被認(rèn)為與異煙肼介導(dǎo)的肝損傷相關(guān)。異煙肼通過氧化代謝途徑產(chǎn)生的乙酰肼和肼為其主要的毒性代謝物,它們較母藥更易造成肝損傷,其體內(nèi)暴露量與肝損傷明顯相關(guān)[1]。因此,對(duì)異煙肼及其代謝物乙酰肼和肼進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測(cè),有助于實(shí)施臨床個(gè)體化給藥,減少藥物不良反應(yīng)的發(fā)生。

目前,檢測(cè)肼類化合物的方法主要有氣相色譜法[2]、高效液相色譜法(HPLC)[3]、氣相色譜-質(zhì)譜法[4]和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS/MS)[5-8]。臨床應(yīng)用中,常用于檢測(cè)異煙肼血藥濃度的方法主要是HPLC[9-10]。相較于其他方法,HPLC-MS/MS在靶向定量分析領(lǐng)域具有高敏感度、高選擇性、寬線性范圍、高準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性等顯著優(yōu)勢(shì)。依托質(zhì)譜技術(shù),HPLC-MS/MS能夠準(zhǔn)確識(shí)別目標(biāo)化合物并進(jìn)行定量分析,適用于復(fù)雜樣品的分析,并拓寬了儀器分析范圍,為臨床治療藥物監(jiān)測(cè)提供了可靠的數(shù)據(jù)支持,被廣泛應(yīng)用于藥物代謝動(dòng)力學(xué)、生物樣品分析等領(lǐng)域[11-14]。但已報(bào)道的方法存在前處理流程復(fù)雜、不能實(shí)現(xiàn)異煙肼及其代謝物同時(shí)檢測(cè)等問題。因此,仍需要探索更簡(jiǎn)單靈敏的方法,可以同時(shí)測(cè)定人體血漿中的異煙肼及其代謝物乙酰肼和肼。本研究基于HPLC-MS/MS技術(shù),以異煙肼-D4作為同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo),建立了快速、靈敏,可同時(shí)檢測(cè)血漿中異煙肼及其代謝物乙酰肼、肼濃度的分析方法,并對(duì)校準(zhǔn)曲線、線性范圍、準(zhǔn)確度、精密度、回收率、基質(zhì)效應(yīng)、穩(wěn)定性進(jìn)行了方法驗(yàn)證;同時(shí),應(yīng)用該方法對(duì)臨床104例肺結(jié)核患者進(jìn)行了異煙肼及其代謝物的治療藥物監(jiān)測(cè),以期為臨床用藥提供指導(dǎo)。

材料和方法

一、材料

1.儀器:UltraLC 110 液相串聯(lián)API 4000 Q-trap 型液-質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)(美國AB Sciex公司);電子分析天平(德國賽多利斯公司,BS110S);漩渦混合器(上海清甫儀器有限公司,SHA-C型);高速冷凍離心機(jī)(美國賽默飛世爾科技公司FRESCO21型離心機(jī));超聲波水浴清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。

2.試劑:異煙肼(美國Sigma公司,批號(hào):MKBW9046V);乙酰肼[梯希愛(上海)化成工業(yè)發(fā)展有限公司,批號(hào):P8GWL-NT];肼(美國Sigma公司,批號(hào):MKBV0553V);異煙肼-D4(南京昊綠生物科技有限公司,批號(hào):YYJ0434314TR-HLM);色譜純甲醇(美國賽默飛世爾科技公司,批號(hào):204132);色譜純乙腈(美國賽默飛世爾科技公司,批號(hào):F21LA7202);對(duì)甲基苯甲醛(上海麥克林生化科技有限公司,批號(hào):C10298201);甲酸(北京迪科馬科技有限公司,批號(hào):2142969);甲酸銨(美國Honeywell公司,批號(hào):I2740);乙酸(上海吉至生化科技有限公司,批號(hào):A331384C9)。

3.樣品來源:患者來源于首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院,年齡范圍18～60歲,確診肺結(jié)核,并接受規(guī)范抗結(jié)核治療。服用異煙肼的劑量為1次/d,每次300～500 mg,于服藥后2 h采集靜脈血4 ml,4 ℃ 條件下,3000×g離心10 min,取上層血漿放入-80 ℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。共收?04例肺結(jié)核患者的血漿樣本。本研究得到了首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號(hào):YJS-2022-16號(hào)),所有受試者在試驗(yàn)前均簽署了知情同意書。

二、方法

1.色譜條件:采用InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z色譜柱(100 mm×2.1 mm,2.7 μm);柱溫

為30 ℃;自動(dòng)進(jìn)樣器溫度為4 ℃;流動(dòng)相A為含0.1%甲酸和5 mmol甲酸銨的水溶液,流動(dòng)相B為乙腈;梯度洗脫:0～2 min,95% A;2～3 min,95% A～5% A;3～5.5 min,5% A;5.5～6.5 min,5% A～95% A;6.5～8 min,95% A;運(yùn)行時(shí)間8 min;進(jìn)樣量5 μl;流速0.4 ml/min。

2.質(zhì)譜條件:質(zhì)譜采用電噴霧離子源(ESI),以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(multiple reaction monitoring,MRM)模式掃描,正離子模式檢測(cè)。電噴霧電壓:5500 V;離子源溫度:500 ℃;入口電壓、出口電壓分別設(shè)置為10 V、10 V;氣簾氣(CUR):30 psi;霧化氣(GS1):50 psi;加熱氣(GS2):50 psi。待測(cè)物及內(nèi)標(biāo)異煙肼-D4衍生物的MRM參數(shù)見表1。

表1 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)參數(shù)設(shè)置

3.溶液配制:(1)精密稱取異煙肼、乙酰肼、肼的對(duì)照品適量,用甲醇分別配制成濃度均為1 mg/ml的單一成分標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液,-80 ℃避光保存。(2)精密量取異煙肼-D4溶液100 μl于25 ml量瓶中,用甲醇定容,即得質(zhì)量濃度為100 ng/ml的內(nèi)標(biāo)工作溶液。(3)精密量取對(duì)甲基苯甲醛2 ml于100 ml量瓶中,加入9.8 ml乙酸,用甲醇定容,即得質(zhì)量濃度為20 μg/ml的對(duì)甲基苯甲醛溶液。

4.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:以甲醇稀釋待測(cè)物儲(chǔ)備液,配制系列濃度的線性混標(biāo)工作溶液,混標(biāo)工作溶液Line 1～Line 8中各待測(cè)物濃度分別為:(1)異煙肼:1、2、5、10、20、60、100、120 μg/ml;(2)乙酰肼:0.5、1、2.5、5、10、30、50、60 μg/ml;(3)肼:20、40、100、200、400、1200、2000、2400 ng/ml。

取空白血漿95 μl,加入5 μl混標(biāo)工作液Line 1～Line 8,各待測(cè)物在血漿中分別為:(1)異煙肼:50、100、250、500、1000、3000、5000、6000 ng/ml;(2)乙酰肼:25、50、125、250、500、1500、2500、3000 ng/ml;(3)肼:1、2、5、10、20、60、100、120 ng/ml。

5.質(zhì)控樣本工作液配制:各待測(cè)物濃度分別為:(1)異煙肼:1、3、50、90 μg/ml;(2)乙酰肼:0.5、1.5、25、45 μg/ml;(3)肼:20、60、1000、1800 ng/ml。

取空白血漿95 μl,加入5 μl混標(biāo)工作液,各待測(cè)物在血漿中濃度分別為:(1)異煙肼:50、150、2500、4500 ng/ml;(2)乙酰肼:25、75、1250、2250 ng/ml;(3)肼:1、3、50、90 ng/ml。

6.血漿樣品處理:將待分析的血漿樣品在室溫下解凍,解凍完全后使用渦旋混合器將樣品充分混勻。取100 μl血漿加入350 μl甲醇,50 μl內(nèi)標(biāo)異煙肼-D4儲(chǔ)備液(100 ng/ml),渦旋混勻后,12 000×g離心10 min,取上清100 μl加入300 μl衍生化試劑對(duì)甲基苯甲醛溶液,充分混勻后室溫超聲反應(yīng)40 min,取200 μl置于進(jìn)樣瓶中,上機(jī)進(jìn)樣分析。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、方法建立及驗(yàn)證

1.專屬性考察:通過對(duì)比空白血漿基質(zhì)、空白血漿基質(zhì)+待測(cè)物混合對(duì)照品工作溶液(定量限濃度)+內(nèi)標(biāo)和臨床患者血漿+內(nèi)標(biāo)的MRM色譜圖,判斷體內(nèi)存在的其他內(nèi)源性物質(zhì)是否影響待測(cè)物的濃度測(cè)定,考察HPLC-MS/MS分析方法的專屬性。結(jié)果顯示,在本實(shí)驗(yàn)確定的檢測(cè)條件下,樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)不影響待測(cè)物及內(nèi)標(biāo)的分離測(cè)定,且待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)峰形良好。待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)的MRM色譜圖見圖1。

注 圖A:空白血漿;圖B:空白血漿+待測(cè)物混合對(duì)照品工作溶液(定量限濃度)+內(nèi)標(biāo);圖C:臨床患者血漿+內(nèi)標(biāo);MRM:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)

2.線性范圍考察:配制每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,進(jìn)行處理后,進(jìn)樣分析,記錄色譜圖、待測(cè)物的峰面積(As)及內(nèi)標(biāo)的峰面積(Ai)。以濃度(C)為橫坐標(biāo),待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值(As/Ai)為縱坐標(biāo)作回歸方程,權(quán)重系數(shù)為1/X2,結(jié)果如表2所示。異煙肼在線性范圍50～6000 ng/ml內(nèi)線性良好,乙酰肼在線性范圍25～3000 ng/ml內(nèi)線性良好,肼在線性范圍1～120 ng/ml內(nèi)線性良好,決定系數(shù)(R2)均>0.99。

表2 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定異煙肼、乙酰肼和肼的線性范圍、決定系數(shù)和定量限

3.殘留:制備異煙肼、乙酰肼、肼定量上限(ULOQ)樣品,質(zhì)量濃度分別為4500、2250、90 ng/ml。在每條標(biāo)準(zhǔn)曲線ULOQ樣品后立即進(jìn)行空白樣品分析,考察高濃度樣品殘留對(duì)測(cè)定的影響從而計(jì)算殘留效應(yīng)。結(jié)果表明,空白樣品中異煙肼、乙酰肼、肼的信號(hào)響應(yīng)強(qiáng)度分別不超過定量下限(LLOQ)的0.12%、1.33%和2.06%,異煙肼-D4的信號(hào)響應(yīng)強(qiáng)度不超過LLOQ的0.06%。

4.準(zhǔn)確度與精密度:制備4個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品溶液各6份,進(jìn)行HPLC-MS/MS分析,考察分析方法的批內(nèi)精密度和準(zhǔn)確度。在不同時(shí)間連續(xù)制備并測(cè)定3個(gè)分析批次,考察方法的批間精密度和準(zhǔn)確度。精密度用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(relative standard deviation,RSD)表示,準(zhǔn)確度用相對(duì)誤差(relative error,RE)表示。結(jié)果顯示,異煙肼、乙酰肼、肼的批內(nèi)和批間精密度RSD均≤11.76%,準(zhǔn)確度RE絕對(duì)值均≤6.43%,符合生物樣品檢測(cè)的限度要求(精密度RSD<15%,準(zhǔn)確度RE絕對(duì)值<15%)。具體見表3。

表3 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定化合物的準(zhǔn)確度和精密度結(jié)果

5.回收率和基質(zhì)效應(yīng):取空白血漿100 μl,處理操作后得到空白基質(zhì),加入混合對(duì)照品工作溶液5 μl,制備未經(jīng)提取的低、中、高3個(gè)濃度的對(duì)照樣品各6份,制備供試溶液,記錄各待測(cè)物峰面積(At);取空白血漿95 μl,加入混合對(duì)照品工作溶液5 μl,配制成低、中、高濃度的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品各6份,進(jìn)行前處理,記錄各待測(cè)物峰面積(AS);用起始比例流動(dòng)相代替空白血漿,同上述方法制備相應(yīng)濃度的溶液各6份,記錄各待測(cè)物峰面積(AB)。

按As/At×100%計(jì)算提取回收率。結(jié)果顯示,異煙肼、乙酰肼、肼的提取回收率均≥85.72%,RSD均≤6.02%(表4),符合生物樣本測(cè)定要求。按At/AB×100%分別計(jì)算待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)的基質(zhì)效應(yīng)。內(nèi)標(biāo)歸一化基質(zhì)效應(yīng)=待測(cè)物基質(zhì)效應(yīng)/內(nèi)標(biāo)基質(zhì)效應(yīng)×100%。結(jié)果顯示,異煙肼、乙酰肼、肼的內(nèi)標(biāo)歸一化基質(zhì)效應(yīng)為86.05%～111.96%,RSD均≤9.18%(表5),符合生物樣本測(cè)定要求(基質(zhì)效應(yīng)在85%～115%,RSD<15%)。

表4 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定化合物的提取回收率

表5 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定化合物的基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果

6.穩(wěn)定性:取空白血漿配制低、中、高質(zhì)控樣品各3份,分別考察含藥血漿樣品室溫放置24 h、4 ℃冷藏24 h、-80 ℃凍存7 d、-80 ℃凍存14 d、反復(fù)凍融3次的穩(wěn)定性及血漿樣品處理后在進(jìn)樣倉放置24 h的穩(wěn)定性。結(jié)果表明,待測(cè)物在各種條件下放置后,濃度無明顯變化,說明在上述條件下穩(wěn)定性良好(表6)。

表6 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定化合物濃度的穩(wěn)定性

二、臨床應(yīng)用

用上述方法檢測(cè)104例肺結(jié)核患者血漿中異煙肼及其代謝物。根據(jù)隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中待測(cè)物的濃度。異煙肼的濃度范圍為359.41～5866.71 ng/ml,乙酰肼的濃度范圍為667.11～2997.79 ng/ml,肼的濃度范圍為4.38～112.66 ng/ml(表7)。

表7 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)臨床血漿樣本中異煙肼、乙酰肼、肼的濃度

討 論

最近,一項(xiàng)病例對(duì)照研究顯示,異煙肼與藥物性肝損傷之間存在明確關(guān)聯(lián),這再次強(qiáng)調(diào)了在異煙肼治療期間進(jìn)行治療藥物監(jiān)測(cè)的必要性[15]。事實(shí)上,近年來異煙肼誘導(dǎo)肝毒性的潛在機(jī)制受到廣泛關(guān)注。越來越多的證據(jù)表明,其毒性代謝物的形成觸發(fā)肝毒性和肝細(xì)胞凋亡[16-17]。本研究開發(fā)并驗(yàn)證了一種新的HPLC-MS/MS方法,用于同時(shí)定量人血漿中的異煙肼及其毒性代謝物乙酰肼和肼,并成功應(yīng)用于臨床,這將為異煙肼的藥物警戒提供支持。

目前已有關(guān)于采用HPLC-MS/MS檢測(cè)異煙肼的研究報(bào)道,這進(jìn)一步證實(shí)了該方法在臨床應(yīng)用中分析異煙肼的有效性和可行性[18-20]。文獻(xiàn)中對(duì)異煙肼的檢測(cè)往往與其他抗結(jié)核藥物同時(shí)進(jìn)行,而同時(shí)檢測(cè)異煙肼的代謝物并未受到足夠關(guān)注。既往研究中在檢測(cè)異煙肼血藥濃度的同時(shí)也同時(shí)檢測(cè)了代謝物乙酰異煙肼,但未檢測(cè)其毒性代謝物乙酰肼和肼的血藥濃度[18-19]。Gao等[20]研究中,建立了4種一線抗結(jié)核藥物同時(shí)檢測(cè)的方法,但異煙肼的定量范圍較窄,而臨床中所用劑量不同和個(gè)體差異會(huì)導(dǎo)致藥物濃度范圍更寬。

本研究建立的HPLC-MS/MS法具有以下優(yōu)勢(shì):(1)本方法不僅可以檢測(cè)異煙肼,還能同時(shí)分析與藥物性肝損傷有關(guān)的代謝物乙酰肼和肼,為異煙肼的治療藥物監(jiān)測(cè)提供了更全面的支持。(2)本方法采用同位素內(nèi)標(biāo)具有出色的分辨率和高度準(zhǔn)確的檢測(cè)能力,能夠有效地分離和鑒定異煙肼及其代謝物,從而確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。(3)本方法能夠在更寬的濃度范圍內(nèi)檢測(cè)異煙肼及其代謝物,提高了方法的適用性和可靠性。

由于乙酰肼和肼的弱保留性,通常很難通過HPLC-MS/MS直接檢測(cè),故采用衍生化法對(duì)乙酰肼和肼進(jìn)行前處理后進(jìn)行分析,以提高檢測(cè)性能。文獻(xiàn)中報(bào)道的異煙肼及其代謝物的血藥濃度測(cè)定方法將異煙肼與乙酰肼和肼分開檢測(cè),采用不同的前處理方法和分析方法,這大大增加了前處理及分析的流程和時(shí)間[8]。本研究將異煙肼、乙酰肼和肼同時(shí)進(jìn)行衍生化,成功實(shí)現(xiàn)了異煙肼及其代謝物乙酰肼和肼在同一前處理?xiàng)l件下的同時(shí)測(cè)定。

本研究選擇對(duì)甲基苯甲醛為衍生化試劑,對(duì)待測(cè)物進(jìn)行衍生化,并對(duì)衍生化條件進(jìn)行了摸索和優(yōu)化;選擇室溫超聲作為反應(yīng)條件,考察了不同反應(yīng)時(shí)間(10、20、30、40、50 min)對(duì)信號(hào)響應(yīng)的影響,選擇最佳反應(yīng)時(shí)間為40 min。針對(duì)待測(cè)物經(jīng)對(duì)甲基苯甲醛衍生化后,在HPLC-MS/MS分析時(shí)存在衍生反應(yīng)還未到反應(yīng)終點(diǎn)問題,影響了定量結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性的問題,本研究采取加大衍生化試劑對(duì)甲基苯甲醛的用量,并于衍生化反應(yīng)體系中加入適量乙酸,使反應(yīng)進(jìn)行完全。在反應(yīng)過程中引入超聲波以提高分子碰撞的概率,從而提高反應(yīng)產(chǎn)率。與加熱衍生化方法相比,超聲水浴可以獲得微米和納米級(jí)的聚集體,縮短反應(yīng)時(shí)間,提高反應(yīng)效率[21]。通過使用超聲波,本研究的樣品預(yù)處理流程簡(jiǎn)單,無需額外的加熱和純化程序。

此外,同位素內(nèi)標(biāo)與目標(biāo)分析物具有相似的理化性質(zhì),能夠顯著減少待測(cè)樣品的基質(zhì)效應(yīng)等因素對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響,從而提高回收率和方法的穩(wěn)定性,還可以校正預(yù)處理引入的偏差和進(jìn)樣系統(tǒng)中的誤差導(dǎo)致的數(shù)據(jù)偏離[22]。文獻(xiàn)中異煙肼代謝物的血藥濃度測(cè)定普遍采用外標(biāo)法[7]及惰性內(nèi)標(biāo)法[8]進(jìn)行定量,這些方法均有一定的局限性。本研究選用異煙肼同位素標(biāo)記物異煙肼-D4對(duì)異煙肼、乙酰肼、肼進(jìn)行內(nèi)標(biāo)法定量,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,以異煙肼-D4作為內(nèi)標(biāo),基質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響較小,提取回收率均>85%,且具有較高的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性。

異煙肼是目前廣泛應(yīng)用于結(jié)核病治療的抗結(jié)核藥物之一。然而,其代謝物存在潛在的肝毒性,這一點(diǎn)在臨床應(yīng)用中需要引起高度重視。本研究檢測(cè)了異煙肼給藥后2 h臨床血漿樣本中異煙肼及其代謝物乙酰肼和肼的濃度水平,結(jié)果顯示,患者體內(nèi)的異煙肼和代謝物乙酰肼和肼的濃度存在較大的個(gè)體間差異。Song等[7]檢測(cè)了異煙肼末次給藥24 h后患者體內(nèi)異煙肼及肼的濃度,結(jié)果表明,長(zhǎng)期服用異煙肼后,患者體內(nèi)殘留有乙酰肼和肼。而乙酰肼和肼的殘留量在不同患者中差異較大。因此,需要對(duì)臨床服用異煙肼的患者進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測(cè),對(duì)于血藥濃度明顯增高的患者,需要密切關(guān)注其藥物不良反應(yīng)情況;而對(duì)于血藥濃度偏低的患者,建議醫(yī)生調(diào)整給藥劑量。臨床應(yīng)結(jié)合患者的個(gè)體特征和治療目標(biāo),從療效和肝毒性兩方面考慮,制訂最佳的個(gè)體化給藥方案,適當(dāng)調(diào)整異煙肼劑量,以達(dá)到最佳的治療效果。

對(duì)于服用標(biāo)準(zhǔn)劑量異煙肼的患者,異煙肼的推薦峰值濃度(Cmax)為3～6 mg/L[23-24],若Cmax<2 mg/L,可增加異煙肼劑量,若Cmax>6 mg/L,則提示可能會(huì)有肝損傷風(fēng)險(xiǎn),應(yīng)密切關(guān)注肝功能情況。在本研究中,組內(nèi)各檢測(cè)指標(biāo)數(shù)值差異較大,目前尚無確定的代謝物正常值參考范圍。同時(shí),關(guān)于什么濃度可以提示對(duì)肝臟有損傷及是否停藥的指導(dǎo)作用的問題,需要更多的臨床數(shù)據(jù)和病例支持才能做出準(zhǔn)確的結(jié)論。由于筆者目前缺乏肝損傷患者的病例數(shù)據(jù),尚無法得出明確的結(jié)論,因此,會(huì)在接下來的研究中收集相關(guān)數(shù)據(jù),以便更全面地分析和探討這些問題。

綜上所述,本研究建立了一種快速靈敏的HPLC-MS/MS方法,可用于測(cè)定人體內(nèi)異煙肼及其代謝物乙酰肼、肼的血藥濃度,通過對(duì)方法專屬性、標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度、準(zhǔn)確度、基質(zhì)效應(yīng)、回收率和穩(wěn)定性等的驗(yàn)證,本研究建立的方法準(zhǔn)確度高、專屬性強(qiáng),已應(yīng)用于異煙肼及其代謝產(chǎn)物的臨床監(jiān)測(cè)。該方法有助于臨床優(yōu)化異煙肼的個(gè)體化給藥,從而減少異煙肼引起的肝損傷的發(fā)生。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻(xiàn)葛菲:醞釀和設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、實(shí)施研究、起草文章、統(tǒng)計(jì)分析;朱慧:采集數(shù)據(jù)、分析/解釋數(shù)據(jù)、對(duì)文章的知識(shí)性內(nèi)容作批評(píng)性審閱、指導(dǎo);程凱:分析/解釋數(shù)據(jù)、對(duì)文章的知識(shí)性內(nèi)容作批評(píng)性審閱、支持性貢獻(xiàn);陸宇:分析/解釋數(shù)據(jù)、對(duì)文章的知識(shí)性內(nèi)容作批評(píng)性審閱、行政/技術(shù)/材料支持、指導(dǎo);徐建:醞釀和設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、分析/解釋數(shù)據(jù)、對(duì)文章的知識(shí)性內(nèi)容作批評(píng)性審閱、獲取研究經(jīng)費(fèi)、行政/技術(shù)/材料支持、指導(dǎo)