亓茉言 郭振紅 （海軍軍醫(yī)大學(xué)免疫學(xué)教研室暨免疫與炎癥全國重點實驗室，上海 200433）

在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中，存在由腫瘤細(xì)胞基因表達(dá)的或者是機(jī)體對腫瘤反應(yīng)而異常產(chǎn)生或升高的蛋白質(zhì)、糖類等物質(zhì)，這些物質(zhì)反映了腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后等情況，被稱為腫瘤標(biāo)志物。血清腫瘤標(biāo)志物對惡性腫瘤的診斷和治療效果、預(yù)后、復(fù)發(fā)的判斷等具有重要的作用，是監(jiān)測腫瘤發(fā)生發(fā)展的一個標(biāo)志性的存在。隨著腫瘤免疫學(xué)的發(fā)展，關(guān)于腫瘤和免疫系統(tǒng)之間的相互作用引起越來越多的研究者關(guān)注。2002年，DUNN等［1］提出了“3E免疫編輯”學(xué)說，即：免疫系統(tǒng)清除腫瘤、免疫系統(tǒng)與腫瘤之間實現(xiàn)力量平衡和腫瘤逃逸免疫系統(tǒng)的清除作用，提示在腫瘤的發(fā)生過程中，免疫系統(tǒng)發(fā)揮重要作用，而且腫瘤與免疫系統(tǒng)之間的相互作用決定了腫瘤的發(fā)展走向。目前，腫瘤標(biāo)志物作為腫瘤發(fā)生的重要指標(biāo)，對于其研究也由原來的主要集中于監(jiān)測腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，逐步轉(zhuǎn)向?qū)γ庖呦到y(tǒng)的影響。臨床上常用的腫瘤標(biāo)志物主要有CEA、AFP、CA125、CA15-3、CA19-9等，當(dāng)下，針對腫瘤標(biāo)志物AFP、CEA和CA125的免疫效應(yīng)已有初步的研究成果，本文主要對其免疫學(xué)效應(yīng)進(jìn)行綜述。

1 甲胎蛋白

甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）是一種糖蛋白，屬于白蛋白家族，最初是由胎兒的肝臟和卵黃囊產(chǎn)生。胎兒血清中AFP含量高，出生約2周后逐漸下降到成人水平，因此正常成年人血清中AFP含量不到20 μg/L。成人血清中AFP含量低的原因主要是肝細(xì)胞成熟后合成AFP的能力喪失，當(dāng)肝細(xì)胞突變成肝癌細(xì)胞后可以重新獲得合成AFP的能力。目前臨床上AFP可以作為多種腫瘤的陽性篩查指標(biāo)并且主要用于原發(fā)性肝癌的診斷和療效檢測。AFP不僅可以作為腫瘤標(biāo)志物，還具有許多生物學(xué)功能，例如白蛋白家族的轉(zhuǎn)運功能、生長調(diào)控因子的作用、作為信號分子的作用以及免疫抑制功能，AFP的免疫抑制功能最初是在研究妊娠期免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的過程中發(fā)現(xiàn)的，當(dāng)向受孕妊娠期兔動物模型中注射抗AFP抗體后，引起了兔子胎兒的排斥反應(yīng)［2-7］。進(jìn)一步研究表明AFP是胚胎正常生長發(fā)育所必需的因素，AFP能夠限制母體免疫系統(tǒng)以抑制抗胎兒的免疫排斥反應(yīng)以及促進(jìn)胎兒紅細(xì)胞的生成［8-9］。目前對免疫系統(tǒng)的研究主要集中在樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DCs）、自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞和T細(xì)胞方面。

1.1 AFP抑制DC的成熟、分化并誘導(dǎo)其免疫代謝失調(diào) DC作為專職抗原提呈細(xì)胞，在免疫應(yīng)答包括抗腫瘤免疫的啟動過程中發(fā)揮重要作用。腫瘤產(chǎn)生的AFP會從多方面影響DC的功能，首先，AFP能夠有效地抑制DC的成熟。在臍帶血來源AFP（nAFP）和腫瘤來源AFP（tumor source AFP，tAFP）處理后的DC中單核細(xì)胞和未成熟DC的標(biāo)志物CD14表達(dá)水平更高，人組織相容性Ⅰ類抗原（human histocompatibility classⅠantigen，HLA-ABC）、甘露糖受體（CD206）、共刺激分子CD80和DC成熟標(biāo)志物CD83在nAFP和tAFP處理后的DC中表達(dá)均下調(diào)。LPS和IFN-γ誘導(dǎo)后也未能改變AFP的影響［6］。研究表明， tAFP比nAFP能夠更有效抑制CD14+的單核細(xì)胞分化成為DC，這可能取決于與tAFP協(xié)同作用的低分子量分子的存在，例如脂肪酸、膽紅素等［6，10］。分泌蛋白AFP可以結(jié)合多種代謝物并進(jìn)入活化的淋巴細(xì)胞、肝細(xì)胞、NK細(xì)胞和單核細(xì)胞。結(jié)合脂肪酸的tAFP被DC攝取后會增強(qiáng)DC的糖酵解過程從而分泌更多的乳酸，形成一種免疫抑制的腫瘤微環(huán)境，DC的表型隨之向免疫抑制的表型轉(zhuǎn)變［11］。此外，有研究者發(fā)現(xiàn)AFP能夠誘導(dǎo)DC功能障礙和凋亡。AFP處理的單核細(xì)胞來源的DC產(chǎn)生IL-12和TNF-α的能力顯著降低，并且AFP的處理明顯誘導(dǎo)了DC凋亡，從而為肝細(xì)胞癌的免疫逃逸提供了條件［12］。而且，AFP處理后的人外周血來源的DC表達(dá)caspase-3和p38-MARK的水平升高，這些分子表達(dá)的升高會誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并抑制DC的成熟，并且AFP能夠與肝細(xì)胞癌細(xì)胞中的caspase-3形成復(fù)合體從而影響細(xì)胞凋亡信號的傳導(dǎo)［10，13-14］。綜上所述，AFP能夠抑制體內(nèi)的先天性反應(yīng)以限制抗腫瘤免疫反應(yīng)。AFP會通過與代謝物結(jié)合進(jìn)入免疫細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用，但AFP是否還存在其他的配體還未可知，另外攝入胞內(nèi)的AFP如何影響胞內(nèi)信號通路還需繼續(xù)研究。

1.2 腫瘤來源的AFP抑制NK細(xì)胞的抗腫瘤免疫反應(yīng) NK細(xì)胞是先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分，是抵御感染和腫瘤的第一道防線。NK細(xì)胞可以表達(dá)多種表面受體，包括激活受體（NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46）和抑制性受體（KIR2DL3/CD158b）。AFP對NK細(xì)胞的影響最初認(rèn)為AFP可以通過阻止DC產(chǎn)生IL-12（IL-12能夠刺激NK細(xì)胞表面NKG-2D激活受體的表達(dá)）以及增加骨髓來源的天然抑制細(xì)胞間接影響全身NK細(xì)胞的活化［15］，后來，研究者深入研究了tAFP和nAFP對NK細(xì)胞的直接作用，但結(jié)果顯示tAFP和nAFP均能顯著增強(qiáng)由IL-2介導(dǎo)的NK細(xì)胞活化，并以AFP劑量依賴的方式促進(jìn)NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，并且nAFP的效果更好，同時表明tAFP和nAFP在短期內(nèi)沒有免疫抑制作用，在小鼠體內(nèi)實驗和人體外實驗驗證了IL-2療法與nAFP聯(lián)用能夠發(fā)揮更好的療效，但臨床上的數(shù)據(jù)并非如此，還有其他因素限制了腫瘤內(nèi)NK細(xì)胞的活性［16-17］。靜息的NK細(xì)胞能夠內(nèi)吞AFP，這一結(jié)果提示細(xì)胞內(nèi)的AFP受體可能在惡性腫瘤內(nèi)發(fā)揮作用，長期來看腫瘤來源的tAFP會明顯損害NK細(xì)胞的活性，并且直接誘導(dǎo)了NK細(xì)胞凋亡，而nAFP誘導(dǎo)NK細(xì)胞轉(zhuǎn)向促炎表型，通過上調(diào)CD69的表達(dá)，提高IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌增強(qiáng)對腫瘤細(xì)胞的殺傷［16］。所以需要進(jìn)一步研究tAFP與nAFP在糖基化修飾、結(jié)合的分子伴侶、等電點等方面的差異，并且確定tAFP損害免疫功能的關(guān)鍵性因素，這對改善肝細(xì)胞癌患者免疫抑制的腫瘤微環(huán)境具有重要意義。

1.3 AFP改變腫瘤微環(huán)境中CD4+T/CD8+T細(xì)胞的比例 早期研究發(fā)現(xiàn)，AFP能夠在體外抑制T細(xì)胞免疫應(yīng)答，這一發(fā)現(xiàn)認(rèn)為AFP可能會促CD4+T細(xì)胞分化為抑制性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞［18］。最新單細(xì)胞測序結(jié)果聯(lián)合體內(nèi)外實驗已證明，AFP陽性的肝細(xì)胞癌中抑制性T細(xì)胞更多，而細(xì)胞毒性T細(xì)胞數(shù)量減少。腫瘤浸潤巨噬細(xì)胞上的SPP1與其T細(xì)胞上的CD44配體結(jié)合促使T細(xì)胞轉(zhuǎn)向耗竭的狀態(tài)，提示在AFP陽性的肝細(xì)胞癌患者中，可以通過抑制T細(xì)胞上游信號傳導(dǎo)從而改變免疫抑制的狀態(tài)以到達(dá)控制腫瘤的目的［19］。此外，有研究者用表達(dá)AFP的DC與人外周血T細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)AFP-DC誘導(dǎo)了AFP特異性T細(xì)胞反應(yīng)，AFP特異性T細(xì)胞可以顯著抑制荷瘤裸鼠的肝細(xì)胞癌的形成，并且AFP特異性T細(xì)胞的IL-2、IFN-γ、TNF-α、穿孔素和顆粒酶B表達(dá)上調(diào)，AFP-DC激活的特異性CD8+T細(xì)胞IL-10的產(chǎn)生顯著減少，該研究者在這一共培養(yǎng)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)AFP特異性的CD4+T、CD8+T細(xì)胞主要是通過顆粒酶和穿孔素來殺死癌細(xì)胞，但是不依賴Fas/FasL途徑，并且AFP特異性的CD8+T比起未經(jīng)AFP-DC刺激的CD8+T顯示出更強(qiáng)的殺傷活性，AFP特異性CD4+T細(xì)胞IL-2的產(chǎn)生增加，在抗腫瘤過程中起輔助作用［20-21］。因此AFP-DC可能是一種較好的誘導(dǎo)針對AFP免疫應(yīng)答的疫苗［20］。

1.4 AFP在臨床免疫治療中的應(yīng)用 以上研究提示，AFP在肝細(xì)胞癌對抗免疫系統(tǒng)的效應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用，可以通過抑制DC和NK的效應(yīng)以及T細(xì)胞免疫應(yīng)答實現(xiàn)免疫逃逸。由于AFP的免疫原性較弱，改善免疫系統(tǒng)對AFP的低反應(yīng)性，是建立有效抗腫瘤免疫反應(yīng)的關(guān)鍵［22］。因此，熱休克蛋白（heat shock protein，HSP）常被作為AFP的“免疫佐劑”被應(yīng)用。大多數(shù)肝癌細(xì)胞同時高表達(dá)AFP和HSP，HSP可以將細(xì)胞質(zhì)AFP轉(zhuǎn)運到細(xì)胞膜并將AFP釋放到血清中，所以目前，新型治療性疫苗HSP70-P/AFP-P就是通過肽合成將AFP表位肽與HSP70功能肽偶聯(lián)，以增強(qiáng)AFP的免疫原性［23］。另外，2017年啟動的一項1期臨床試驗結(jié)果顯示，為15例肝癌患者皮下注射AFP衍生肽，沒有觀察到任何嚴(yán)重不良反應(yīng)，并且15例患者中有1例完全緩解，8例患者病情穩(wěn)定。而且在4例患者中檢測到AFP特異性的CD8+T細(xì)胞，在達(dá)到完全緩解兩年的患者中觀察到親和力最強(qiáng)的T細(xì)胞受體（T cell receptor，TCR）。結(jié)果表明AFP衍生肽可以誘導(dǎo)強(qiáng)大的特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)，為肝細(xì)胞癌患者提供了新的治療策略［24］。在肝細(xì)胞癌的免疫治療中，DC疫苗因可以誘導(dǎo)體內(nèi)特異性免疫應(yīng)答而具有潛在的應(yīng)用前景，近期的研究主要集中在如何增強(qiáng)DC疫苗的抗原提呈能力從而誘導(dǎo)T細(xì)胞活化發(fā)揮強(qiáng)大的腫瘤殺傷力［25-26］。隨著對AFP免疫學(xué)效應(yīng)的進(jìn)一步研究，有望以AFP為切入點，規(guī)避AFP對免疫細(xì)胞的負(fù)向調(diào)控效應(yīng)，激發(fā)針對AFP的免疫應(yīng)答，為肝細(xì)胞癌的免疫治療帶來希望。

2 癌胚抗原

癌胚抗原（carcino-embryonic antigen，CEA）屬于細(xì)胞糖蛋白家族，最初發(fā)現(xiàn)于結(jié)腸癌和胚胎組織中。在人體中，CEA家族可被細(xì)分為癌胚抗原相關(guān)的黏附分子（carcinoembryonic antigen associated adhesion molecules，CEACAMs）和妊娠特異性糖蛋白（pregnancy specific glycoprotein，PSG）。CEACAMs是免疫球蛋白超家族（immunogiobulin superfamily，IgSF）的成員，一般表現(xiàn)出1個或2個與免疫球蛋白類似的胞外可變結(jié)構(gòu)域，被稱為N結(jié)構(gòu)域，CEACAMs在許多類型的細(xì)胞表面表達(dá)，例如上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等均有表達(dá)，在不同細(xì)胞表面表達(dá)會表現(xiàn)出不同的效應(yīng)，通常與各種細(xì)胞間黏附和細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)的作用有關(guān)［27-28］。CEACAM家族的各成員在血管形成、細(xì)胞凋亡、胰島素代謝、腫瘤抑制和對免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)等多個方面發(fā)揮作用［29-31］。在CEACAM家族成員中主要是CEACAM5、CEACAM6和CEACAM1與免疫相關(guān)疾病以及腫瘤的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移有關(guān)。

2.1 CEACAM5介導(dǎo)腫瘤免疫抑制微環(huán)境的機(jī)制CEACAM5（通常稱為CEA）在臨床上常作為腫瘤標(biāo)志物檢測。CEACAM5通過糖基磷脂酰肌醇（glycosyl phosphatidyl inositol，GPI）分子的共價鍵與細(xì)胞膜相連，磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C（phosphatidylinositol specific phospholipase C，PI-PLC）能夠使CEACAM5從腫瘤細(xì)胞表面脫落釋放到外周循環(huán)中［32］。分泌型的CEACAM5常在潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、胰腺癌和結(jié)腸癌等疾病患者的血清中被檢測到。研究表明，表達(dá)在腸上皮細(xì)胞上的CEACAM5通過其B3結(jié)構(gòu)域與同樣表達(dá)在腸上皮細(xì)胞上的非經(jīng)典的MHCⅠ類分子CD1d相互作用，促進(jìn)CD1d向T細(xì)胞的抗原呈遞，同時CEACAM5還能通過其N結(jié)構(gòu)域與CD8+T細(xì)胞上的CD8α結(jié)合，從而使下游Lck分子磷酸化增加，進(jìn)而驅(qū)動CD8+T細(xì)胞分化成CD8+Treg細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制功能［33-34］。通常在正常生理條件下，腸上皮細(xì)胞可以通過向T細(xì)胞呈遞可溶性抗原來促進(jìn)CD8+T細(xì)胞分化成CD8+Treg細(xì)胞，從而抑制炎癥反應(yīng)。而在炎癥性腸病中，腸上皮細(xì)胞則無法有效的呈遞抗原，從而導(dǎo)致CD4+Th細(xì)胞分泌細(xì)胞因子失調(diào)形成促炎的狀態(tài)［35］。另外，CEACAM5不僅能單獨發(fā)揮作用，還能與CEACAM1的免疫抑制功能協(xié)同發(fā)揮作用，腫瘤細(xì)胞上表達(dá)的CEACAM5的N結(jié)構(gòu)域可以與NK細(xì)胞上表達(dá)的CEACAM1的N結(jié)構(gòu)域結(jié)合，導(dǎo)致CEACAM1向NK細(xì)胞內(nèi)傳遞抑制性信號，從而保護(hù)腫瘤細(xì)胞免受NK細(xì)胞的殺傷，進(jìn)而允許腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸［36］。還有研究表明，與正常結(jié)腸上皮細(xì)胞表達(dá)的CEACAM5相比，轉(zhuǎn)移到肝臟的結(jié)腸癌細(xì)胞上表達(dá)的CEACAM5有更多的Lewis X、Lewis Y糖蛋白修飾，即有更高的巖藻糖基化。眾所周知，C型凝集素受體中的樹突狀細(xì)胞特異性ICAM3抓取非整合素1（dendritic cell-specific ICAM3-grabbing non-integrin 1，DC-SIGN）能夠特異性地識別N連接的甘露糖以及支鏈巖藻糖基化結(jié)構(gòu)［37］。因此，表達(dá)在未成熟的樹突狀細(xì)胞上的DC-SIGN可以通過Lewis X、Lewis Y部分來識別表達(dá)在結(jié)腸癌細(xì)胞表達(dá)的CEACAM5，但是不與正常細(xì)胞上的CEACAM5結(jié)合，并且當(dāng)DC成熟后這種結(jié)合顯著降低。所以普遍存在于腫瘤內(nèi)部未成熟的DC通過其DC-SIGN受體來識別腫瘤細(xì)胞釋放的CEACAM5，并且呈遞給T細(xì)胞，這一研究很好地說明了CEACAM5介導(dǎo)的腫瘤免疫耐受微環(huán)境的形成機(jī)制［37］。

2.2 CEACAM6抑制T細(xì)胞受體信號傳導(dǎo) 與CEACAM5類似，惡性腫瘤中CEACAM6的表達(dá)也顯著增加，CEACAM6作為預(yù)后標(biāo)志物和治療靶點已有許多研究［38-39］。多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞上表達(dá)的CEACAM6能夠顯著抑制T細(xì)胞的反應(yīng)性，并且抑制TCR信號通路中重要分子的磷酸化，由于CEACAM6無法向胞內(nèi)傳遞信號，所以CEACAM6的免疫抑制功能可能是與T細(xì)胞上的配體結(jié)合所介導(dǎo)的［40］。腫瘤細(xì)胞上表達(dá)的CEACAM6可與活化的腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞上表達(dá)的CEACAM1相互作用來抑制T細(xì)胞抗腫瘤反應(yīng)，這一相互作用獨立于PD-1/PD-L1軸抑制T細(xì)胞的抗腫瘤功能，并且PD-1和CEACAM1都是將非受體蛋白酪氨酸磷酸酶募集到T細(xì)胞受體復(fù)合物上，導(dǎo)致下游激酶去磷酸化，因此它們兩者任意一個被招募到免疫突觸上就會充分抑制T細(xì)胞受體信號傳導(dǎo)。因此，可以使用CEACAM1/CEACAM6軸的阻斷抗體來改善腫瘤對其他免疫檢查點抑制劑的反應(yīng)［41］。

2.3 活化的T細(xì)胞表面表達(dá)CEACAM1 對免疫系統(tǒng)的影響這一方面CEACAM1的研究和報道最多。CEACAM1又稱分化簇66a（CD66a）和膽汁糖蛋白（biliary glycoprotein，BGP）。其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的尾部包含兩個免疫受體酪氨酸抑制基序（immune receptor tyrosine-based inhibitory motif，ITIM）。幼稚T細(xì)胞表面不表達(dá)CEACAM1分子，但在TCR、IL-2或有絲分裂原刺激后CEACAM1的表達(dá)顯著上調(diào)。CEACAM1是唯一在活化的T細(xì)胞上表達(dá)的CEACAM家族的分子［42］。CEACAM1的不同亞型可以發(fā)揮相反的作用，含有免疫受體酪氨酸基序的長胞質(zhì)段尾部的CEACAM1-L亞型主要對TCR介導(dǎo)的信號傳遞發(fā)揮負(fù)調(diào)控的作用，而具有短胞質(zhì)尾部的CEACAM1-S亞型主要在此過程中抵消CEACAM1-L的功能［43］。CEACAM1-L和CEACAM1-S在不同細(xì)胞類型中以不同的比例表達(dá)，有研究表明在外周血中大多數(shù)活化的T細(xì)胞上，抑制性CEACAM1-L的表達(dá)水平相較于CEACAM1-S更高，這有助于機(jī)體維持免疫穩(wěn)態(tài)，而在腸道和腸道相關(guān)淋巴組織中駐留的T細(xì)胞中，CEACAM1-S這一亞型表達(dá)水平更高，體現(xiàn)了T細(xì)胞上CEACAM1的不同剪切類型在不同組織和細(xì)胞中的特異性免疫調(diào)節(jié)［44］。

CEACAM1-L亞型已被證實在許多類型的細(xì)胞中發(fā)揮抑制性的作用，包括腸上皮細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、T細(xì)胞［36，45-47］。原癌基因Src酪氨酸激酶家族的蛋白酪氨酸激酶LCK誘導(dǎo)T細(xì)胞中的CEACAM1-L的ITIM基序磷酸化，同時CEACAM1-L與Src同源區(qū) 2（src-homology domain 2，SH2）蛋白酪氨酸磷酸酶 1（SH2-containing protein tyrosine phos-phatase-1，SHP-1）結(jié)合，導(dǎo)致CD3-ζ和ZAP-70的磷酸化減少，從而抑制TCR的信號傳導(dǎo)途徑［43］。研究表明，CEACAM1-S能夠誘導(dǎo)IgA的分泌以及促進(jìn)T細(xì)胞活化，特別是與共生微生物群的控制和對腸道病原的抵抗有關(guān)的T細(xì)胞亞群，表明CEACAM1-S在腸道免疫中起著重要作用［44］。CEACAM1也在固有免疫中發(fā)揮作用，CEACAM1能夠抑制NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。在MHCⅠ類分子缺陷的黑色素瘤中NK細(xì)胞被抑制的強(qiáng)度與CEACAM1的表達(dá)量呈正相關(guān)，所以，CEACAM1可能是一種新的MHCⅠ類分子非依賴性的NK細(xì)胞抑制性受體［48］。除了直接抑制NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，CEACAM1還通過下調(diào)腫瘤細(xì)胞上NKG2D的配體（NKG2DL）的表達(dá)進(jìn)一步抑制NK介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用［49］。此外，早期的研究已經(jīng)認(rèn)為CEACAM1是中性粒細(xì)胞活化的標(biāo)志物，并且參與中性粒細(xì)胞的凋亡過程［50-51］。CEACAM1可以通過ITIMs磷酸化來招募SHP-1，SHP-1的募集使粒細(xì)胞集落刺激因子受體（granulocyte colony stimulating factor receptor, G-CSFR）磷酸化被抑制，減弱了下游STAT3的活化以及促有絲分裂蛋白Cyclin D1和C-Myc的表達(dá)，從而抑制了中性粒細(xì)胞祖細(xì)胞的增殖。而當(dāng)小鼠CEACAM1缺失后感染革蘭氏陽性菌，小鼠出現(xiàn)明顯的組織損傷和肝臟壞死，血清中產(chǎn)生IL-1β顯著增高，CEACAM1缺失后導(dǎo)致中性粒細(xì)胞前體異常產(chǎn)生大量的中性粒細(xì)胞，從而引起過度的免疫反應(yīng)［52］。而當(dāng)中性粒細(xì)胞經(jīng)革蘭氏陰性菌表達(dá)的脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激后，誘導(dǎo)Syk磷酸化形成TLR-4、p-Syk和p-CEACAM1的復(fù)合物，進(jìn)而招募SHP-1，SHP-1又反過來使p-Syk去磷酸化，減少了中性粒細(xì)胞產(chǎn)生ROS和溶酶體酶，從而抑制炎癥小體的活性降低IL-1β的產(chǎn)生。這項研究進(jìn)一步證實了CEACAM1在先天性免疫應(yīng)答中的負(fù)調(diào)節(jié)作用［53］。

2.4 CEACAM1、CEACAM5和CEACAM6在腫瘤免疫治療中的應(yīng)用 CEACAM1、CEACAM5和CEACAM6在腫瘤免疫治療中前景廣闊，有研究表明在黑色素瘤和結(jié)腸癌的小鼠模型中誘導(dǎo)CEACAM1高表達(dá)能很好地抑制腫瘤生長［54］。而CEACAM5和CEACAM6常被用于黑色素瘤、結(jié)直腸癌和非小細(xì)胞肺癌等相關(guān)癌腫的治療干預(yù)措施中［55-57］。CEACAM5和CEACAM6的單克隆抗體NEO-201在臨床前模型中顯示出比較好的療效。NEO-201是一種IgG1人源化的單克隆抗體，可以與CEACAM5和CEACAM6的腫瘤相關(guān)變構(gòu)體相結(jié)合，NEO-201對結(jié)腸癌、卵巢癌、胰腺癌等惡性腫瘤有反應(yīng)，但對大多數(shù)正常組織沒有反應(yīng)，NEO-201不僅可以通過誘導(dǎo)NK細(xì)胞介導(dǎo)的抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity， ADCC）和補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性作用（complement dependent cytotoxicity,CDC）來發(fā)揮抗腫瘤活性，還可以阻斷腫瘤細(xì)胞上的CEACAM-5和NK細(xì)胞上的CEACAM-1之間的結(jié)合，以逆轉(zhuǎn)CEACAM-1對NK細(xì)胞毒性的抑制作用［58-60］。此外，靶向CEA的CAR-T細(xì)胞療法治療實體瘤已經(jīng)成為腫瘤免疫治療領(lǐng)域一個備受矚目的研究方向，2022年國內(nèi)首個在實體瘤中靶向CEA的CAR-T細(xì)胞療法臨床試驗獲批（受理號：CXSL2200478），臨床前小鼠體內(nèi)研究結(jié)果顯示出明顯的療效，早期也有研究者針對CEA轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的CAR-T細(xì)胞療法開展1期臨床試驗，在10例CEA陽性的結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移患者中，有7例患者在CAR-T治療后病情穩(wěn)定，有2例患者病情穩(wěn)定超過30周，并且觀察到腫瘤明顯縮小，大多數(shù)患者在CAR-T治療后血清CEA水平明顯下降［61］。近期臨床研究使用壓力給藥技術(shù)通過肝動脈輸注將抗CEA的CAR-T直接注入肝臟的區(qū)域給藥，在1例低分化胰腺癌合并肝臟轉(zhuǎn)移的患者中顯示出明顯的療效［62］。綜上所述，CEA被認(rèn)為是在實體瘤中極具治療潛力的靶點。因此，CEACAM家族成員作為腫瘤免疫治療的靶點有著廣闊的前景，希望更多研究發(fā)現(xiàn)它們更多的功能和機(jī)制，使之成為更好的治療工具。

3 糖類抗原125

黏蛋白16（mucin 16，MUC16）又稱糖類抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125），是1981年美國科學(xué)家BAST等［63］從卵巢上皮癌抗原中檢測出且能被單克隆抗體OC125識別的一種糖蛋白抗原。CA125是常用于檢測卵巢癌進(jìn)展的常規(guī)臨床生物標(biāo)志物，CA125是MUC16上的重復(fù)肽表位。全長的MUC16蛋白核心是由短胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和長的糖基化細(xì)胞外結(jié)構(gòu)組成。該糖基化細(xì)胞外結(jié)構(gòu)是由含156個氨基酸的重復(fù)結(jié)構(gòu)域所構(gòu)成的，這些重復(fù)單元包含許多表位結(jié)合位點，該分子還包括富含絲氨酸/蘇氨酸的氨基末端結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域容易發(fā)生MUC16的O-糖基化。MUC16在其跨膜片段上游大約50個氨基酸的位點上可以被蛋白酶水解切割，使MUC16的胞外段從細(xì)胞表面釋放形成分泌型的CA125［64-65］。MUC16的糖基化位點在促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的方面發(fā)揮了重要作用，但這些糖基化位點是否還影響著抗腫瘤免疫反應(yīng)還需要繼續(xù)深入地研究［66］。

3.1 MUC16抑制先天性免疫反應(yīng) 許多研究表明NK細(xì)胞、單核細(xì)胞等天然免疫細(xì)胞無法攻擊表達(dá)高水平MUC16的腫瘤細(xì)胞。異常糖基化的MUC16會與NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面的抑制性受體結(jié)合，發(fā)揮抑制腫瘤免疫的作用。例如，PATANKAR等［67］的研究小組首次證明MUC16敲除的卵巢癌細(xì)胞更容易被NK細(xì)胞裂解，這表明MUC16對NK細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用，腫瘤來源的MUC16能夠下調(diào)NK細(xì)胞上的CD16和VD92/NKG2A表達(dá)，使NK細(xì)胞無法通過這些受體發(fā)揮作用來殺死腫瘤細(xì)胞。此外，該小組繼續(xù)研究發(fā)現(xiàn)與上皮性卵巢癌患者外周血中的NK細(xì)胞相比，在同一患者的腹腔積液中的NK細(xì)胞的表型會發(fā)生改變，最明顯的差異在于CD16-CD56brNK細(xì)胞，MUC16能夠選擇性地結(jié)合30%～40%的具有細(xì)胞毒效應(yīng)的CD16+CD56dimNK細(xì)胞，同時誘導(dǎo)NK細(xì)胞上CD16的表達(dá)下調(diào)，進(jìn)而選擇性地增殖CD16-CD56brNK細(xì)胞這一亞群，CD16-CD56brNK細(xì)胞毒性明顯降低從而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸［68］。抑制NK細(xì)胞和癌細(xì)胞之間的免疫突觸形成則是另一種MUC16介導(dǎo)的免疫抑制機(jī)制，同樣研究小組研究發(fā)現(xiàn)在NK細(xì)胞白血病細(xì)胞系（NK cell leukemia cell line，NKL）的刺激下，能夠存活下來的腫瘤細(xì)胞表達(dá)更高水平的MUC16，小鼠的MUC16敲低后在NK細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞間更容易形成免疫突觸，從而增強(qiáng)NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞溶解反應(yīng)，這表明NKL細(xì)胞可能選擇性裂解低表達(dá)MUC16的腫瘤細(xì)胞［69］。后來，該作者又發(fā)表研究表明，MUC16不僅能與NK細(xì)胞結(jié)合，還可以與從外周血和腹腔液中分離出來的B細(xì)胞和單核細(xì)胞結(jié)合，MUC16可以通過結(jié)合表達(dá)在B細(xì)胞、單核細(xì)胞及NK細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞表面的抑制性受體Siglec-9，促進(jìn)腫瘤免疫逃逸［70］。而當(dāng)干擾角膜上皮細(xì)胞表面MUC1和MUC16的表達(dá)后，加以Toll樣受體（TLR2、TLR5）激動劑刺激后促炎細(xì)胞因子IL-6，IL-8和TNF-α表達(dá)和分泌水平增加，并且在MUC1-/-和MUC16-/-的小鼠模型中得到了相似的結(jié)論。淚膜黏膜層的電鏡結(jié)果進(jìn)一步證實，MUC1或MUC16能夠在角膜上皮細(xì)胞膜表面形成致密的糖保護(hù)屏障，阻止病原體與抗原提呈細(xì)胞上的Toll樣受體結(jié)合，從而抑制先天性免疫反應(yīng)維持眼表的免疫穩(wěn)態(tài)［71-72］。綜上所述，腫瘤細(xì)胞上高表達(dá)MUC16后，能夠顯著抑制免疫反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤逃逸，而正常組織中的MUC16的表達(dá)能夠防止不必要的TLR激活維持正常組織的免疫穩(wěn)態(tài)。以上研究已經(jīng)明確MUC16免疫抑制的作用，具體的作用機(jī)制還有待繼續(xù)研究。

3.2 MUC16突變產(chǎn)生新腫瘤抗原 MUC16突變產(chǎn)生的新生抗原在腫瘤免疫中也有著重要作用，這代表MUC16可以作為基于腫瘤新抗原的個體化疫苗的潛在靶點。MUC16在大多數(shù)惡性腫瘤中頻繁突變，是突變頻率位居前三的基因之一［73］。2017年在Nature上報道的一項針對少數(shù)胰腺導(dǎo)管癌的長期存活者的研究中，分析這一隊列中的T細(xì)胞抗原發(fā)現(xiàn)MUC16突變產(chǎn)生的新抗原是這些胰腺導(dǎo)管癌患者長期存活的原因，同時還與腫瘤CD8+T細(xì)胞高度浸潤有關(guān)，他們發(fā)現(xiàn)這些突變而來的新抗原具有富集并且激活CD8+T細(xì)胞的能力［74］。在此之后，MUC16的高突變與腫瘤免疫的相關(guān)性在黑色素瘤、胃癌、肝癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤的研究中均有報道［75-78］。在一項包含30個實體腫瘤、9 850個樣本的mRNA序列的泛癌分析中發(fā)現(xiàn)，MUC16突變的腫瘤微環(huán)境中有更多的免疫細(xì)胞浸潤，GSEA富集分析也證明了MUC16突變主要富集在免疫相關(guān)信號通路上，因此MUC16有望成為一種預(yù)測免疫治療療效的生物標(biāo)志物［79］。

3.3 MUC16在腫瘤免疫治療中的應(yīng)用 MUC16在多種腫瘤中高表達(dá)，是一個極具治療潛力的腫瘤相關(guān)抗原。在一項針對卵巢癌的研究中表明，在人類卵巢癌細(xì)胞系和卵巢癌組織中觀察到MUC16顯著的高表達(dá)，MUC16的過度表達(dá)通過PI3K/AKT通路促進(jìn)細(xì)胞的增殖、遷移和入侵，將MUC16過表達(dá)到DC上時能有效地激活CD8+T細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞，為卵巢癌的免疫治療提供了一種新的策略［80］。此外，MUC16應(yīng)用于CAR-T療法也有許多研究。2010年，研究者設(shè)計了靶向MUC16抗原的嵌合抗原受體，表達(dá)在腫瘤細(xì)胞表面的MUC16大部分胞外段被蛋白酶水解釋放到細(xì)胞外，可以在血清中作為腫瘤標(biāo)志物CA125檢測到，然而MUC16分泌出去后在腫瘤細(xì)胞表面仍存在一小段殘留的細(xì)胞外部分，稱為MUC16-CD，MUC16-CD可以作為腫瘤免疫治療中有力的靶標(biāo)，因此研究者設(shè)計了針對MIC16-CD抗原的CAR-T，在體外能夠特異性地裂解卵巢癌細(xì)胞，在小鼠原位異種移植的腫瘤模型中也顯示出有效的抗腫瘤的功效，但仍存在CAR-T細(xì)胞被腫瘤微環(huán)境抑制的問題，僅卵巢特異性的CAR不足以消除腫瘤［81］。之后，研究者繼續(xù)開發(fā)了一種能共同表達(dá)IL-12受體激動劑和靶向MUC16表位的CAR-T細(xì)胞療法，IL-12和MUC16雙靶點的聯(lián)用能夠很好地改善CAR-T細(xì)胞被腫瘤微環(huán)境抑制的問題［82-84］。此外，MUC16是癌癥中最常見的突變基因之一，許多研究證實MUC16高突變率與實體瘤中免疫檢查點抑制劑治療反應(yīng)性相關(guān)［79，85］，MUC16突變的患者顯著上調(diào)PD-L1、PD-1和CTLA-4等免疫檢查點的表達(dá)，對非小細(xì)胞肺癌隊列和黑色素瘤隊列的分析表明，MUC16的突變與免疫檢查點治療反應(yīng)性高度正相關(guān)［79］，這一結(jié)果提示MUC16有望成為指導(dǎo)免疫治療的標(biāo)志物。

4 結(jié)語

盡管目前對于腫瘤標(biāo)志物的效用存在許多爭議，許多科學(xué)家也在尋找新的特異性更高的腫瘤生物標(biāo)志，但無可爭議的是AFP、CEA、CA125等分子仍是臨床上最普遍使用的生物標(biāo)志。許多腫瘤標(biāo)志物不僅僅在腫瘤的診斷、發(fā)展及預(yù)后等方面提供指示作用，更在腫瘤的免疫調(diào)節(jié)以及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，這些研究有助于初步了解腫瘤標(biāo)志物是如何影響免疫細(xì)胞從而形成腫瘤免疫抑制微環(huán)境。對于腫瘤抗原的研究仍存在許多難點，例如：尋找腫瘤組織特有的并且可以被適應(yīng)性免疫系統(tǒng)特異性識別的新抗原；探究腫瘤新抗原介導(dǎo)的腫瘤免疫抑制微環(huán)境的機(jī)制；開發(fā)針對腫瘤新抗原的免疫療法。隨著技術(shù)方法的進(jìn)步和研究模式的創(chuàng)新，結(jié)合多學(xué)科交叉，從更宏觀或深入的角度探究更多腫瘤標(biāo)志物對免疫系統(tǒng)的影響，并對其機(jī)制進(jìn)行深入研究，有望為腫瘤的免疫治療提供新的靶點和思路。腫瘤的免疫治療為腫瘤患者帶來治愈的希望，對腫瘤標(biāo)志物的深入研究將為腫瘤的免疫治療提供新的策略。