龐沖敏 張宗凱 韋家秀 王燕 劉蘭

【摘要】 目的 研究不同大血小板比率（platelet-larger cell ratio，P-LCR）的血小板（Platelets，PLT）計(jì)數(shù)及血小板形態(tài)。方法隨機(jī)收集2020年10月—2021年3月期間檢測成人血常規(guī)的252份標(biāo)本，根據(jù)血小板相關(guān)參數(shù)結(jié)果分為4組，A組血小板分布寬度（platelet distribution width，PDW）、血小板平均容積（mean platelet volume，MPV）、血小板壓積（platelet hematocrit，PCT）、P-LCR未顯示數(shù)值血標(biāo)本61份，B組PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數(shù)值且P-LCR＜13%血標(biāo)本33份，C組PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數(shù)值且P-LCR在13%～43%血標(biāo)本61份，D組PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數(shù)值且P-LCR＞43%血標(biāo)本97份。采用Sysmex-XN1000五分類血細(xì)胞分析儀進(jìn)行熒光核酸染色法（PLT-F）計(jì)數(shù)血小板，手工推片法評(píng)估血小板數(shù)，并觀察血小板形態(tài)、大小及聚集情況，計(jì)算各組中PLT＜125×109/L、125×109/L～350×109/L、＞350×109/L的百分比。結(jié)果? A組中PLT＜125×109/L的占55.73%，125×109/L～350×109/L的占41.00%，＞350×109/L的占3.27%，血小板大小不均；B組中PLT＜125×109/L的占3.03%，125×109/L～350×109/L的占63.63%，＞350×109/L的占33.34%，小血小板較多；C組中PLT＜125×109/L的占14.75%，125×109/L～350×109/L的占83.63%，＞350×109/L的占1.63%，血小板大小均勻；D組中PLT＜125×109/L的占29.89%，125×109/L～350×109/L的占71.11%，＞350×109/L的占0%，大血小板較多。結(jié)論? 血常規(guī)檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR未顯示數(shù)值時(shí)，無論是否滿足3項(xiàng)中的其中之一（血球儀有異常報(bào)警提示，計(jì)數(shù)值低于實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)的儀器線性范圍，首次計(jì)數(shù)結(jié)果＜100×109/L或＞1 000×109/L），都需檢查標(biāo)本并推片復(fù)檢。血常規(guī)檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數(shù)值時(shí)，如滿足以上3項(xiàng)中的其中之一，需檢查標(biāo)本并推片復(fù)檢，如不滿足，可不推片復(fù)檢。

【關(guān)鍵詞】 人工推片；大血小板比率；血小板計(jì)數(shù)；血小板形態(tài)

文章編號(hào)：1672-1721（2024）10-0130-03? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ?中國圖書分類號(hào)：R512.91

血小板是由骨髓造血組織中的巨核細(xì)胞產(chǎn)生，具有維持血管內(nèi)皮完整性、黏附、聚集、釋放、促凝和血塊收縮等功能。血小板計(jì)數(shù)是指測定單位容積血液中血小板的數(shù)量。血小板計(jì)數(shù)是止血、凝血檢查的常用篩選試驗(yàn)之一，參考區(qū)間為125×109/L～350×109/L[1]。血小板計(jì)數(shù)可用血細(xì)胞分析儀、顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測。目前醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室主要用血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)血小板，該方法具有重復(fù)性好，速度快等優(yōu)點(diǎn)。當(dāng)儀器報(bào)告顯示血小板數(shù)量、圖形異?；驁?bào)警提示時(shí)，應(yīng)使用顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測法對(duì)血小板計(jì)數(shù)結(jié)果復(fù)核。國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)推薦流式細(xì)胞術(shù)檢測為參考方法[2]。大血小板的比率一般與血小板體積的分布寬度和血小板的平均體積同時(shí)檢測，主要用于表達(dá)血小板的形態(tài)，對(duì)判斷骨髓造血功能有一定的臨床意義[3]。正常的血小板呈兩面微凸的圓盤狀，直徑1.5～3.0 μm，大血小板直徑4～7 μm，巨型血小板直徑＞7μm。大血小板比率（P-LCR）是指大血小板與總血小板的比率，參考范圍為13%～43%[4]。使用自動(dòng)血液分析儀檢測血小板時(shí)，血小板相關(guān)參數(shù)檢測（包括P-LCR）未顯示數(shù)值的情況偶爾發(fā)生。為了解不同

P-LCR時(shí)PLT計(jì)數(shù)結(jié)果及血小板形態(tài)，本研究對(duì)不同P-LCR的血標(biāo)本進(jìn)行了人工推片法評(píng)估血小板計(jì)數(shù)及血小板形態(tài)觀察，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2020年10月—2021年3月貴陽市公共衛(wèi)生救治中心門診、住院成人患者及體檢者含有乙二胺四乙酸二鉀的靜脈抗凝全血標(biāo)本，共252份，按照血小板相關(guān)參數(shù)PDW（血小板體積分布寬度）、MPV（血小板平均體積）、PCT（血小板比容）、P-LCR（大血小板比率）結(jié)果分為4組。

A組為血常規(guī)檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR未顯示數(shù)值，B組為血常規(guī)檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數(shù)值且P-LCR＜13%，C組為血常規(guī)檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數(shù)值且P-LCR在13%～43%，D組為血常規(guī)檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數(shù)值且P-LCR＞43%。

1.2 儀器與試劑

Sysmex-XN1000五分類血細(xì)胞分析儀及其配套的溶血?jiǎng)⑾♂屢?、清洗劑均為日本Sysmex公司生產(chǎn)，儀器定期校準(zhǔn)、各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，室內(nèi)質(zhì)控均在控。雙目顯微鏡CX-23（日本OLympus），采血針及EDTA-K2抗凝真空管（紫），瑞氏-吉姆薩染液一、二。

1.3 檢測原理

全自動(dòng)血液分析儀主要用2種通道檢測血小板，分別是電阻抗法和熒光染色法檢測通道。PLT-F通道是作為檢測血小板的專用通道，與以往分析儀（XE系列）的PLT-O檢測用試劑相比，該通道所用的改良試劑可對(duì)血小板特異性染色，從而盡可能更精準(zhǔn)地檢測血小板。PLT-F試劑染色血小板內(nèi)含有大量核酸的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。PLT-F試劑只濃染含有細(xì)胞器的血小板，幾乎不染色細(xì)胞膜。PLT-F試劑的熒光強(qiáng)度可明確區(qū)別血小板和紅細(xì)胞碎片。

1.4 檢測方法

成人在空腹的狀態(tài)下抽取靜脈血2 mL，加入含有EDTA-K2的真空抗凝管中，輕輕顛倒混勻8次，用PLT-F法計(jì)數(shù)PLT，2 h完成檢測。每次檢驗(yàn)標(biāo)本前，做質(zhì)控，保證儀器相關(guān)監(jiān)測指標(biāo)在控前提下檢測標(biāo)本。

人工推片法制作血涂片：用楔形技術(shù)制作血涂片，在玻片一端的1/3處，加1滴（約0.05 mL）充分混勻的血液，握住另一張邊緣光滑的推片。以30°～45°角使血滴沿推片迅速散開，快速、平穩(wěn)推動(dòng)推片至載玻片的另一端，制作頭、體、尾分明的舌狀的血膜，厚薄適宜的血涂片。

瑞氏-吉姆薩染色：待血膜干透后，滴加瑞氏-吉姆薩染色液，讓染液完全遮蓋血膜，再滴加緩沖液，用洗耳球?qū)⑷疽号c緩沖液混勻，靜止染色10 min，然后用中性流動(dòng)水沖去染液。

評(píng)估血小板數(shù)量及形態(tài)：選擇血片中分布均勻，無異常聚集或纖維蛋白絲區(qū)域，通過血涂片估算血小板數(shù)量，血小板數(shù)（109/L）≈每個(gè)油鏡視野中血小板平均個(gè)數(shù)×15（109/L）[5-6]，同時(shí)觀察血小板大小及形態(tài)。

2 結(jié)果

A組61份，其中PLT＜125×109/L的占55.73%，125×109/L～350×109/L的占41.00%，＞350×109/L的占3.27%，血小板大小不均；B組33份，其中PLT＜125×109/L的占3.03%，125×109/L～350×109/L的占63.63%，＞350×109/L的占33.34%，小血小板較多；C組61份，其中PLT＜125×109/L的占14.75%，125×109/L～350×109/L的占83.63%，＞350×109/L的占1.63%，血小板大小均勻；D組97份，其中PLT＜125×109/L的占29.89%，125×109/L～350×109/L的占71.11%，＞350×109/L的占0%，大血小板較多。

3 討論

血小板計(jì)數(shù)是血常規(guī)檢驗(yàn)中一項(xiàng)重要的指標(biāo)。當(dāng)血管受損破裂時(shí)，血小板會(huì)在血管破裂處相互黏附，聚集形成血小板血栓，堵住破損的傷口，并釋放ADP、腎上腺素、花生四烯酸等血管活性物質(zhì)，最終達(dá)到止血的作用。當(dāng)血小板數(shù)量減少到一定程度時(shí)，可引起出血癥狀，出血量達(dá)到一定程度時(shí)是可以致命的。臨床醫(yī)生收到血小板計(jì)數(shù)減少報(bào)告時(shí)，會(huì)積極查找病因治療。當(dāng)血小板計(jì)數(shù)出現(xiàn)異常時(shí)，血小板形態(tài)的異常更具有臨床意義[7]。

在本研究中，當(dāng)血常規(guī)檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR未顯示數(shù)值時(shí)，PLT＜125×109 /L的占55.73%，125×109/L～350×109/L的占41.00%，＞350×109/L的占3.27%，血小板大小不均，說明A組血小板計(jì)數(shù)低于參考區(qū)間的發(fā)生率最大，其次是血小板計(jì)數(shù)在參考區(qū)間范圍內(nèi)，發(fā)生率最小的是血小板計(jì)數(shù)高于參考區(qū)間；當(dāng)血常規(guī)檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數(shù)值且P-LCR＜13%，PLT＜125×109/L的占3.03%，125×109/L～350×109/L的占63.63%，＞350×109/L的占33.34%，小血小板較多，說明B組血小板計(jì)數(shù)低于參考區(qū)間的發(fā)生率最小，血小板計(jì)數(shù)在參考區(qū)間范圍內(nèi)發(fā)生率最大，血小板計(jì)數(shù)高于參考區(qū)間發(fā)生率位于本組第2名；當(dāng)血常規(guī)檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數(shù)值且P-LCR在13%～43%時(shí)PLT＜125×109/L的占14.75%，125×109/L～350×109/L的占83.62%，＞350×109/L的占1.63%，血小板大小較均勻，說明C組血小板計(jì)數(shù)在參考區(qū)間范圍內(nèi)發(fā)生率最大，血小板計(jì)數(shù)低于參考區(qū)間的發(fā)生率位于本組第2名，血小板計(jì)數(shù)高于參考區(qū)間發(fā)生率最小；當(dāng)血常規(guī)檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數(shù)值且P-LCR＞43%時(shí)，PLT＜125×109/L的占29.89%，PLT125×109/L～350×109/L的占70.11%，PLT＞350×109/L的占0%，大血小板較多，說明D組血小板計(jì)數(shù)在參考區(qū)間范圍內(nèi)發(fā)生率最大，血小板計(jì)數(shù)低于參考區(qū)間的發(fā)生率位于本組第2名，血小板計(jì)數(shù)高于參考區(qū)間發(fā)生率最小。

本研究大血小板比率與血小板計(jì)數(shù)及形態(tài)大小之間存在一定的關(guān)系，在無聚集、小紅細(xì)胞或細(xì)胞碎片的影響下，熒光核酸染色法計(jì)數(shù)與人工推片法評(píng)估血小板數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果相近。人工推片法評(píng)估是血小板計(jì)數(shù)估計(jì)和形態(tài)學(xué)觀察重要方法之一。

4 結(jié)語

血常規(guī)檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR未顯示數(shù)值時(shí)，無論是否滿足血球儀有異常報(bào)警提示、計(jì)數(shù)值低于實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)的儀器線性范圍、首次計(jì)數(shù)結(jié)果＜100×109/L或＞1 000×109/L這3項(xiàng)的其中之一，都需檢查標(biāo)本并推片復(fù)檢。血常規(guī)檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數(shù)值時(shí)，如滿足以上3項(xiàng)中的其中之一，需檢查標(biāo)本并推片復(fù)檢；如不滿足，可不推片復(fù)檢。

有文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)血小板形態(tài)異常進(jìn)行描述時(shí)，可對(duì)血小板的大小、形狀、顆粒是否減少或缺乏以及分布情況進(jìn)行描述，對(duì)巨大血小板需采用分級(jí)方式進(jìn)行報(bào)告[8]。檢驗(yàn)技師在用血液分析儀檢測血小板時(shí)，應(yīng)關(guān)注血小板計(jì)數(shù)結(jié)果和異常報(bào)警，需注意標(biāo)本是否受到因素干擾血小板數(shù)值（例如血液凝塊、血小板聚集、血小板衛(wèi)星現(xiàn)象、冷球蛋白、細(xì)胞碎片等），及時(shí)推片復(fù)檢。

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（編輯：張興亞）