核磁共振波譜技術(shù)用于酸棗仁及其成藥的摻假鑒別

【摘要】采用核磁共振波譜技術(shù)（NMR）對酸棗仁和混偽品理棗仁進(jìn)行鑒別研究，通過一系列的比對試驗，優(yōu)化了提取方式并選擇了適當(dāng)?shù)膹?fù)溶試劑，最終確定了一種快速、可靠、重現(xiàn)性好的鑒別方法。為驗證其可靠性，對河北省特有的酸棗仁及其成藥進(jìn)行了重復(fù)性測試，結(jié)果證明了該方法的一致性和準(zhǔn)確性。該研究不僅為其他中藥材的快速鑒別提供了堅實的技術(shù)支撐，更為藥品質(zhì)量監(jiān)管增添了必要的技術(shù)手段，為保障藥品安全有效奠定了堅實基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】核磁共振波譜技術(shù)；酸棗仁；真?zhèn)舞b別；藥品質(zhì)量監(jiān)管

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.06.013

【基金項目】河北省藥品監(jiān)督管理局科技計劃項目（2022ZC1050）：核磁共振波譜技術(shù)在藥品摻假方面的應(yīng)用研究。

Application of Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy in the Identification of Adulterated Jujube Seed and its Traditional Chinese Medicine

LI Jianwen1， FENG Haobin2*， JIN Ling2， MA Tingting3

（1.Hebei Province Drug Professionalization Inspector General Team〔SouthArea〕， Shijiazhuang 050000， China； 2. Hebei Institute of Drug and Medical Device Inspection and Research， Shijiazhuang 050000， China； 3. Shijiazhuang Food and Drug Inspection Center， Shijiazhuang 050000， China）

Abstract： A study is conducted to identify the authenticity of jujube seeds and their adulterated products using nuclear magnetic resonance （NMR） spectroscopy. Through a series of comparative experiments， the extraction method is optimized， and appropriate redissolving reagents are selected， ultimately establishing a rapid， reliable， and reproducible identification method. To verify its reliability， repetitive tests are conducted on the unique jujube seeds from Hebei Province and their finished medicinal products， and the results confirmed the consistency and accuracy of the method. This research not only provides solid technical support for the rapid identification of other traditional Chinese medicinal materials but also adds necessary technical means for drug quality supervision， laying a solid foundation for ensuring the safety and efficacy of drugs.

Keywords： nuclear magnetic resonance spectroscopy technology； sour jujube kernels； identification of authenticity； drug quality supervision

0引言

酸棗仁為鼠李科植物酸棗的干燥成熟種子，具有養(yǎng)心補(bǔ)肝、寧心安神、斂汗、生津等功效[1]。酸棗仁因具有寧心安神的特性，成為調(diào)理失眠問題的優(yōu)選中藥，因而近年來酸棗仁藥材使用量大大增加，導(dǎo)致其價格節(jié)節(jié)攀升[2]。中藥材中有一種理棗仁，其與酸棗仁的外觀性狀特征相似，肉眼鑒別難度大，故有不法商家使用理棗仁與酸棗仁混雜一起售賣給消費者，致使臨床療效難以達(dá)到預(yù)期。目前，文獻(xiàn)報道中關(guān)于酸棗仁及其成藥的鑒別方法，除性狀鑒定、顯微鑒定和理化鑒定等傳統(tǒng)鑒定方法外[3-5]，還有利用多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)、高分辨率溶解曲線技術(shù)、多重位點特異性PCR法等進(jìn)行鑒別的新方法[6-8]，但利用核磁共振波譜技術(shù)對酸棗仁藥材及其成藥鑒別的報道尚未見到。

核磁共振波譜技術(shù)是一種基于原子核磁性的波譜技術(shù)，是化學(xué)、生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重要分析手段。它不僅可以迅速檢測樣品中的化合物類型和含量，還能準(zhǔn)確識別出其中的雜質(zhì)成分。因此，利用核磁共振波譜技術(shù)對藥品進(jìn)行質(zhì)量控制，能夠提供較高的特異性和靈敏度[9]，確保藥品的安全性和有效性。通過引入核磁共振波譜技術(shù)，可以更加全面、深入地了解中藥材的化學(xué)成分和藥效機(jī)制，為中藥的現(xiàn)代化研究和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)，也為酸棗仁的質(zhì)量控制提供技術(shù)保障，同時，進(jìn)一步展示了核磁共振波譜技術(shù)在中藥材質(zhì)量控制和藥品質(zhì)量監(jiān)管方面廣泛的應(yīng)用前景。

1材料與試劑

1.1儀器

Bruker AvenceⅢ600型核磁共振波譜儀；電子天平（OLYMPUS BX41）；KQ-1000DE數(shù)控超聲清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2藥材和試劑

樣品：酸棗仁對照藥材（中檢院121517-202105）；理棗仁藥材；酸棗仁藥材6批（安國中藥材市場購買）；陰性酸棗仁成藥6批（棗仁安神膠囊3批、棗仁安神顆粒3批）。

溶劑：甲醇；氘代三氯甲烷；氘代二甲亞砜（DSMO）。

2方法

2.1樣品的制備

準(zhǔn)備酸棗仁對照藥材和理棗仁藥材，分別稱取50 g，粉碎，過篩（3號篩、50目），所得樣品用于真?zhèn)舞b別實驗，待處理。

準(zhǔn)備6批酸棗仁藥材，分別稱取50 g，粉碎，過篩（3號篩、50目），共得6批酸棗仁樣品，待處理。

準(zhǔn)備6批含有酸棗仁的成藥，分別稱取50 g，粉碎，過篩（3號篩、50目），共得6批酸棗仁成藥樣品。

2.2樣品提取條件的優(yōu)化

2.2.1提取方式的優(yōu)化

取適量酸棗仁樣品，進(jìn)行粉碎和過篩處理，以確保樣品的均勻性。精密稱取適量的酸棗仁對照藥材和理棗仁藥材各兩份，分別置于250 mL具塞錐形瓶中，依次加入50 mL甲醇溶液，并對其稱重。一份樣品進(jìn)行超聲處理（設(shè)置功率為400 W，頻率為50 kHz）30 min，超聲結(jié)束后補(bǔ)足減失的重量，然后進(jìn)行搖勻和過濾操作，并將濾液蒸干。另一份樣品采用加熱回流方式，其他處理方式與第一份樣品處理方式相同。兩份樣品均使用相同的氘代試劑進(jìn)行復(fù)溶處理。復(fù)溶后，將樣品離心操作10 min（設(shè)置條件為4℃，7000 r/min），取上清液，轉(zhuǎn)移至5 mm的核磁共振管中，上機(jī)測試。

2.2.2復(fù)溶試劑的優(yōu)化

按照“2.2.1”的方法把樣品處理至濾液蒸干。為去除溶劑干擾，并富集酸棗仁中的有效化學(xué)成分，分別使用氘代三氯甲烷、DSMO各1 mL進(jìn)行復(fù)溶處理。這兩種氘代試劑在核磁共振波譜技術(shù)中常作為復(fù)溶溶劑使用，能夠提供清晰的核磁共振圖譜特征。然后對兩份復(fù)溶樣品進(jìn)行離心操作10 min（設(shè)置條件為4℃，7000 r/min），取上清液轉(zhuǎn)移至5 mm的核磁共振管中，分別上機(jī)測試。

2.3核磁共振波譜儀采集條件

采集zg 30脈沖序列測定樣品溶液的1H-NMR，測定溫度為298 K，掃描次數(shù)為16次，觀測頻率為600.20 MHz，采樣點數(shù)為65536，譜線寬度為12019.23 Hz，脈沖寬度為10.00μs，馳像延遲時間為1 s。

3結(jié)果分析

3.1樣品提取方式的確定

為找到最佳提取效果的方式，分別考察了超聲提取和加熱回流兩種常用的提取方法。這兩種方法各有優(yōu)缺點。超聲提取特點是操作簡便、快速，而加熱回流提取的特點是處理更加徹底。通過上機(jī)測試并主要以核磁共振圖譜的特征峰為考察指標(biāo)。特征峰是核磁共振圖譜中的關(guān)鍵信息，其可以反映樣品中的特定化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)信息。通過對比超聲提取和加熱回流提取得到的核磁共振圖譜發(fā)現(xiàn)，在兩種提取方式下，特征峰的強(qiáng)度與峰形都沒有明顯的區(qū)別，對于酸棗仁中的目標(biāo)化學(xué)成分的提取效果是相同的。因此，考慮到操作的簡便性和效率，選擇超聲處理作為最佳的提取方式。

3.2復(fù)溶試劑的選擇

在相同的實驗條件下，我們分別使用了氘代三氯甲烷和DSMO作為復(fù)溶溶劑進(jìn)行了實驗。通過對比分析兩種不同的復(fù)溶試劑得到的核磁共振圖譜（見圖1）發(fā)現(xiàn)，結(jié)果存在明顯的差異。使用氘代三氯甲烷作為復(fù)溶溶劑得到的核磁共振圖譜顯示，酸棗仁和理棗仁之間存在明顯的特征峰區(qū)別。從酸棗仁的核磁共振圖譜中可以看到，在3.5 mm處有一個非常明顯的特征峰，而在理棗仁的核磁共振圖譜中則沒有該特征峰，因而可以通過該特征峰來確定樣品是酸棗仁還是理棗仁。然而，當(dāng)使用DSMO作為復(fù)溶溶劑時，得到的核磁共振圖譜顯示酸棗仁和理棗仁之間沒有明顯的特征峰區(qū)別。這可能是由于DSMO與酸棗仁和理棗仁中的化學(xué)成分相互作用的方式不同，導(dǎo)致特征峰的消失或重疊。由此可知，氘代三氯甲烷作為復(fù)溶溶劑時可以有效地區(qū)分酸棗仁和理棗仁，而使用DSMO作為復(fù)溶溶劑則無法實現(xiàn)這一目的。

3.3優(yōu)化方法確認(rèn)

選取6批次的酸棗仁藥材和6批次不同的酸棗仁成藥作為實驗對象。按照優(yōu)化后的核磁共振波譜法對這些酸棗仁及其成藥進(jìn)行測試，并得到相應(yīng)的核磁共振圖譜，見圖2。對這些核磁共振圖譜進(jìn)行詳細(xì)的分析和對比發(fā)現(xiàn)，沒有出現(xiàn)理棗仁的特征峰，而且所得到的樣品核磁共振圖譜重現(xiàn)性好?；谝陨蠈嶒灲Y(jié)果，我們可以初步確定，該特征峰可以作為酸棗仁及其成藥真?zhèn)舞b定的一個重要特征。

4討論

經(jīng)過一系列的實驗研究，筆者找到了一種運用核磁共振波譜技術(shù)對酸棗仁和理棗仁進(jìn)行鑒別的方法。該方法采用甲醇作為提取試劑，選擇簡便的超聲處理作為提取方式，通過搖勻、過濾、蒸干，用氘代三氯甲烷復(fù)溶，然后離心上機(jī)測試，得到了可用于鑒別TYP45vSTLVuZmDEe3yFvgw==的核磁共振圖譜，發(fā)現(xiàn)酸棗仁和理棗仁的核磁共振圖譜具有明顯差異，可以輕松區(qū)分兩種中藥材。在確定了實驗方法后，對安國中藥材市場銷售的酸棗仁及其成藥進(jìn)行了重復(fù)性實驗。結(jié)果證明，該方法能夠準(zhǔn)確鑒別酸棗仁的真?zhèn)?，且結(jié)果真實可靠。有助于確保當(dāng)?shù)厮幉牡馁|(zhì)量和穩(wěn)定性，還可以保護(hù)當(dāng)?shù)氐乃釛椚十a(chǎn)業(yè)，確保其質(zhì)量和聲譽。此外，該技術(shù)的開發(fā)應(yīng)用還為中藥材的質(zhì)量監(jiān)管提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支持。這將為中藥材市場的健康發(fā)展提供有力保障，并推動相關(guān)產(chǎn)業(yè)的持續(xù)發(fā)展。

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【作者簡介】

李建文，男，1984出生，高級工程師，碩士，研究方向為藥品檢驗與檢查。

通信作者：馮浩彬，男，1988年出生，高級工程師，碩士，研究方向為中藥質(zhì)量檢驗與評價，188228310@qq.com。

（編輯：侯睿琪）