《生活飲用水標準檢測方法第12部分：微生物指標》新舊標準比對分析

【摘要】本文對比了GB/T 5750.12—2023《生活飲用水標準檢驗方法第12部分：微生物指標》和GB/T 5750.12—2006《生活飲用水標準檢驗方法微生物指標》，分析了兩個版本標準的主要差異，旨在通過詳細的梳理，幫助檢測人員更準確地理解新標準的內容。

【關鍵詞】生活飲用水；微生物指標；比對分析

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.06.023

Comparative Analysis of Microbiological Indicators in the New and Old Versions of Standard examination methods for drinking water—Part 12： Microbiological indices

QIU Yue1， GUO Yucui1， LIU Qiwei2， HAN Juanzhu1， SUN Yuanyuuan1， LYU Xiaohui1

（1.Liaoning Inspection ，Examination & Certification〔Liaoning Institute forAgro-product Veterinary Drugs and Feed Control〕， Liaoning Key Laboratory of Livestock Product Safety， Shenyang 110036， China； 2.Shenyang Pharmaceutical University， Shenyang 110004， China） Abstract： This paper compares GB/T 5750.12—2023 Standard examination methods for drinking water—Part 12： Microbiolog6eRWIAsc2bt3+hjIQEa240foQcUjl4Rk34Vlb4HcW8c=ical indices with GB/T 5750.12—2006 Standard examination methods for drinking water—Microbiological parameters， analyzes the main differences between the two versions of the standards， and aims to help inspectors understand the content of the new standard more accurately through detailed analysis.

Keywords： drinking water； microbiological indicators； comparative analysis

0前言

為保障生活飲用水的質量和衛(wèi)生，我國在1985年首次制定了《生活飲用水標準檢測方法》，對生活用水的各項指標進行監(jiān)測。隨著監(jiān)測指標和檢查方法的不斷增加和完善，相關部門兩次對生活飲用水標準檢驗方法進行修訂。2006年國家市場監(jiān)督管理總局（國家標準化管理委員會）發(fā)布了GB/T 5750.12—2006《生活飲用水標準檢測方法微生物指標》（以下簡稱“舊標準”），檢測指標為菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌、賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲。2022年3月17日，發(fā)布了GB/T 5750.12—2023《生活飲用水標準檢測方法第12部分：微生物指標》（以下簡稱“新標準”），代替GB/T 5750.12—2006。新標準于2023年10月1日開始實施，對水質標準進行全面監(jiān)控。

1調整適用范圍

在舊標準中，每一個檢測指標的檢測方法均列出了檢測適用范圍。新標準把每種檢測方法的適用范圍調整到標準的第1部分，統(tǒng)一為“本文件適用于生活飲用水和水源水中微生物指標的測定”。調整后，使用者更加直觀明了地了解標準的檢測范圍。

2新增規(guī)范性引用文件

舊標準中沒有列出規(guī)范性引用文件。新標準從實驗用水、培養(yǎng)基和生物安全3個方面列出了規(guī)范性引用文件：GB 4789.28—2024《食品安全國家標準食品微生物學檢驗培養(yǎng)基和試劑的質量要求》、GB/T 6682《分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法》、GB 19489《實驗室生物安全通用要求》。

3新增或調整部分術語和定義

新舊標準中，總大腸菌群的定義沒有變化；新標準增加了大腸埃希氏菌、腸球菌、產氣莢膜梭狀芽孢桿菌和最可能數(shù)4項術語并給予定義；新標準對菌落總數(shù)、耐熱大腸菌群、賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲4項重新定義，并對賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲的具體形態(tài)進行了注釋。

4新增或調整微生物檢測指標

舊標準中的檢測指標為生活飲用水中的菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌、賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲6項，新標準在此基礎上增加了2項檢測指標，腸球菌和產氣莢膜梭狀芽孢桿菌。腸球菌能引起食物中毒，該指標能反映水環(huán)境中糞便污染情況；產氣莢膜梭狀芽孢桿菌，廣泛存在于自然環(huán)境、動物和人的糞便中，污染飲用水后可存活較長時間，能產生多種毒素，引起人壞死性腸炎，破壞血管內皮細胞，也是反映糞便污染情況的一項重要指標，GB 5749—2022《生活飲用水衛(wèi)生標準》規(guī)定腸球菌和產氣莢膜梭狀芽孢桿菌在生活飲用水中不應檢出。

5新增檢測方法

新標準中增加了6個檢測方法，分別為菌落總數(shù)酶底物法、賈第鞭毛蟲濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法、隱孢子蟲濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法、腸球菌多管發(fā)酵法、腸球菌濾膜法、產氣莢膜梭狀芽孢桿菌濾膜法。

5.1培養(yǎng)基配制及保存條件對比

舊標準中培養(yǎng)基與試劑部分，各培養(yǎng)基成分中的水為蒸餾水和超純水；新標準中均改為純水。純水比蒸餾水的純化水平高，比超純水的制作工藝簡單，能更好地滿足實驗要求。

舊標準中配制后的培養(yǎng)基要求貯存于冷暗處備用；新標準要求于0～4℃冷藏避光保存。明確保存溫度范圍可避免溫度有較大幅度的變化，避免受熱、吸潮，防止培養(yǎng)基被細菌污染或分解變質，延長培養(yǎng)基保存時間。

新標準對培養(yǎng)基要求增加了質量控制內容，主要包括培養(yǎng)基檢驗及對照試驗要求。

5.2菌落總數(shù)檢測方法的對比

舊標準中菌落總數(shù)采用平皿計數(shù)法檢測，新標準為平皿計數(shù)法和酶底物法2種檢測方法。新舊標準中關于菌落總數(shù)平皿計數(shù)法檢測的差異分析見表1。

新標準增加了細菌酶底物法，是一種常見的微生物檢測方法，具有操作簡單、結果準確、靈敏度高等優(yōu)點，其原理是利用復合酶技術，在培養(yǎng)基中加入多種獨特的酶底物，每一種酶底物都針對不同的細菌酶設計，將酶底物轉化為可檢測的產物。新標準使用基于復合酶底物技術（Multiple Enzyme Technology）的培養(yǎng)基，通過48 h培養(yǎng)，最大限度地釋放4-甲基傘形酮，經(jīng)366 nm紫外燈照射，對呈現(xiàn)藍色熒光的培養(yǎng)盤孔槽計數(shù)并查閱MPN表，可以確定原始水樣中最可能的菌落總數(shù)，結果以MPN/mL表示。

5.3總大腸菌群檢測方法的變化

新舊標準中總大腸菌群的檢測方法均為多管發(fā)酵法、濾膜法和酶底物法3種。

5.3.1多管發(fā)酵法

新標準中增加了多管發(fā)酵法的“原理”：經(jīng)36℃±1℃培養(yǎng)24 h，發(fā)酵乳糖產酸產氣、經(jīng)證實試驗和革蘭氏染色檢測水中總大腸菌群的方法。

舊標準乳糖發(fā)酵試驗的2.1.5.1.2中檢驗污染較嚴重的水源水要求“每個稀釋度接種5管，每個水樣共接種15管”；新標準改為“每個稀釋度接種5管單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，每個水樣共接種15管”。新標準明確指出乳糖蛋白胨培養(yǎng)液為單料，不易與雙料混淆。

舊標準中要求：所有乳糖蛋白胨培養(yǎng)管都不產氣產酸，則報告總大腸菌群陰性；新標準改為：報告總大腸菌群未檢出。陰性說明水樣中沒有大腸菌群，而未檢出表示水樣中沒有發(fā)現(xiàn)大腸菌群，有可能由于一些原因沒有檢測出來，個人認為新標準的說法更科學嚴謹。

5.3.2酶底物法

新舊標準關于總大腸菌群酶底物法檢測的差異分析見表2。

5.4耐熱大腸菌群檢測方法的變化

新舊標準中耐熱大腸菌群均有2種檢測方法：多管發(fā)酵法和濾膜法。

舊標準中培養(yǎng)溫度為44.5℃，新標準中培養(yǎng)溫度為（44.5±0.5）℃，兩者比較新標準中培養(yǎng)溫度范圍更大，降低了環(huán)境溫度和培養(yǎng)箱中溫度起伏變化的影響，存在1℃的溫差對菌體生長沒有影響。

舊標準中濾膜法培養(yǎng)基為固體和液體兩種，新標準中刪除了液體培養(yǎng)基只保留固體培養(yǎng)基，更便于菌體的分離、計數(shù)、鑒定和菌種保存。

5.5賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲檢測方法的變化

舊標準中賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲的檢測方法均為免疫磁分離熒光抗體法，并進行了統(tǒng)一編寫。新標準中則把這兩種檢測指標的檢測方法進行了拆分，但儀器設備、培養(yǎng)基、試驗步驟、實驗數(shù)據(jù)處理和質量控制都相同；同時，這兩種檢測指標均增加了濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法，在保證舊標準方法回收率的基礎上，可降低耗材成本和設備投入，具有成本低廉和性能穩(wěn)定的特點。

5.6腸球菌和產氣莢膜梭狀芽孢桿菌

舊標準中規(guī)定了腸球菌和產氣莢膜梭狀芽孢桿菌在飲用水中的參考限值，但并未規(guī)定檢測方法。新標準增加了這兩類微生物的檢測指標及檢測方法，腸球菌新增了多管發(fā)酵法和濾膜法；產氣莢膜梭狀芽孢桿菌新增了濾膜法。微生物檢測的覆蓋范圍更廣，水質控制要求更高，減少疾病傳播。

6結束語

隨著檢測技術的不斷發(fā)展，相關的檢測標準也隨之更新、日趨完善。此次《生活飲用水標準檢測方法》中微生物指標及相關檢測方法修訂后，適用范圍更加清晰，規(guī)范性引用文件更加明確，術語和定義更加規(guī)范，微生物檢測指標更加完善嚴格，檢測方法更加完備。體現(xiàn)了國家對生活飲用水的更高和更合理的要求，也體現(xiàn)著檢測方法的進步和檢測標準的與時俱進，使得新標準更具科學性、合理性和國際性。

【參考文獻】

[1]伊迪.水在人體中的重要作用[J].福建農業(yè)，2004（9）：37-36.

[2]饒娟，次仁德吉，索朗德吉，等.拉薩市一起水源污染引起的校園細菌性痢疾暴發(fā)調查[J].中國學校衛(wèi)生，2024，45（3）：427-430.

[3]舒麗萍，陳曌君，張文輝.2015—2019年杭州市農村生活飲用水微生物污染與腸道傳染病發(fā)病率關聯(lián)性分析[J].現(xiàn)代預防醫(yī)學，2020，47（22）：4201-4205.

[5]王強，趙月朝，屈衛(wèi)東，等.1996—2006年我國飲用水污染突發(fā)公共衛(wèi)生事件分析[J].環(huán)境與健康雜志，2010，27（4）：328-331.

[6]許景成，徐知明，張玉娟.飲用水的微生物污染研究現(xiàn)狀[J].食品安全導刊，2023（11）：172-174.

[7]季婉菁.飲用水中特殊污染物：腸球菌檢測方法[J].化工設計通訊，2019，45（9）：77，138.

【作者簡介】

邱月，女，1981年出生，高級農藝師，學士，研究方向為微生物飼料添加劑產品質量安全檢測技術。

（編輯：侯睿琪）