三結(jié)構(gòu)域蛋白29（TRIM29）與HBV復(fù)制及聚乙二醇干擾素α-2b抗病毒作用的關(guān)聯(lián)性分析

摘要：目的三結(jié)構(gòu)域蛋白29（TRIM29）參與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展，與部分DNA和RNA病毒復(fù)制密切相關(guān)，本研究對(duì)TRIM29與HBV復(fù)制及聚乙二醇干擾素（PEG-IFN）α-2b抗病毒作用之間的關(guān)系展開初步討論。方法選取2021年10月—2022年6月在貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院感染內(nèi)科門診就診的CHB患者64例，其中未治療患者34例（CHB組），經(jīng)PEG-IFN-α-2b治療患者30例，體檢中心30例健康志愿者作為對(duì)照（健康對(duì)照組）。收集志愿者年齡、性別、ALT、AST、TBil、DBil、HBV DNA和外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）。采用HepG2和HepG2.2.15細(xì)胞作為細(xì)胞模型，將TRIM29特異性過表達(dá)質(zhì)粒或siRNA和對(duì)照轉(zhuǎn)染至細(xì)胞；PEG-IFN-α-2b（0、10、100、1 000和10 000 U/mL）處理HepG2細(xì)胞和Huh7細(xì)胞；TRIM29特異性si-RNA或陰性對(duì)照聯(lián)合PEG-IFN-α-2b處理HepG2.2.15細(xì)胞。ELISA檢測(cè)HBsAg和HBeAg的濃度，qRT-PCR檢測(cè)TRIM29和HBV RNA相對(duì)表達(dá)水平，Western Blot檢測(cè)STING、p-TBK1、TBK1、pIRF3、IRF3、MX1和IFIT1蛋白表達(dá)情況，免疫共沉淀檢測(cè)TRIM29與STING蛋白相互作用關(guān)系。正態(tài)分布的計(jì)量資料兩組間比較采用成組t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher檢驗(yàn)。結(jié)果CHB組患者外周血TRIM29表達(dá)明顯高于健康對(duì)照組（Plt;0.001）。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，HBsAg、HBeAg和HBV RNA的表達(dá)均隨TRIM29表達(dá)上調(diào)而升高，隨TRIM29表達(dá)下調(diào)而降低（P值均lt;0.05）。TRIM29與STING互相結(jié)合，并通過蛋白酶降解STING，與對(duì)照組相比，過表達(dá)TRIM29對(duì)TBK1和IRF3總蛋白無明顯變化，STING、p-TBK1和p-IRF3蛋白表達(dá)水平均降低（P值均lt;0.05）。處理HepG2細(xì)胞和Huh7細(xì)胞的PEG-IFN-α-2b濃度越高，TRIM29蛋白和mRNA的表達(dá)水平越低（P值均lt;0.01）。CHB患者在PEG-IFN-α-2b治療期間，TRIM29 mRNA表達(dá)水平逐漸降低，且早期應(yīng)答組和無應(yīng)答組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均lt;0.05）。在等量PEG-IFN-α-2b處理下，與對(duì)照相比，敲低TRIM29后HepG2.2.15細(xì)胞的MX1和IFIT1蛋白表達(dá)水平明顯增高（P值均lt;0.05）。在PEG-IFN-α-2b治療早期，CHB患者PBMC中TRIM29表達(dá)逐漸降低。結(jié)論TRIM29靶向并降解STING，通過抑制STING-TBK1-IRF3信號(hào)通路促進(jìn)HBV復(fù)制。TRIM29干擾PEG-IFN-α-2b的抗病毒作用，CHB患者PBMC中TRIM29的表達(dá)水平可能作為預(yù)測(cè)患者對(duì)PEG-IFN-α-2b治療應(yīng)答的指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：乙型肝炎病毒；三結(jié)構(gòu)域蛋白29；聚乙二醇干擾素α;信號(hào)通路

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金地區(qū)基金（82060114）；貴州省衛(wèi)健委2023年度科技基金項(xiàng)目（gzwkj2023-042）；貴州省衛(wèi)生健康委員會(huì)2024年科技基金項(xiàng)目（gzwkj2024-010）

Association of TRIM29 with HBV replication and the antiviral effect of pegylated interferonα-2b

LIAO Xin1，ZHANG Baofang2.（1.School of Clinical Medicine，Guizhou Medical University，Guiyang 550000，China；2.Department of Infectious Diseases，The Affiliated Hospital of Guizhou Medical University，Guiyang 550000，China）

Corresponding author：ZHANG Baofang，312368145@qq.com（ORCID：0000-0002-5396-540X）

Abstract：Objective To preliminarily investigate the association of TRIM29 with HBV replication and the antiviral effect of pegylated interferonα-2b（PEG-IFN-α-2b），since TRIM29 protein is involved in the development and progression of a variety of diseases and is closely associated with the replication of some DNA and RNA viruses.Methods A total of 64 chronic hepatitis B（CHB）patients who attended the outpatient service of Department of Infectious Diseases，The Affiliated Hospital of Guizhou Medical University，from October 2021 to June 2022 were enrolled，among whom there were 34 treatment-na?ve patients and 30 patients treated with PEG-IFN-α-2b，and 30 healthy volunteers in Physical Examination Center were enrolled as controls.Related data were collected，including age，sex，alanine aminotransferase，aspartate aminotransferase，total bilirubin，direct bilirubin，HBV DNA，and peripheral blood mononuclear cells（PBMCs）.HepG2 and HepG2.2.15 cells were used as cell models and were transfected with TRIM29-specific overexpressed plasmid or siRNA and control plasmid.HepG2 cells and Huh7 cells were treated with PEG-IFN-α-2b（0，10，100，1 000，and 10 000 U/mL），and HepG2.2.15 cells were treated with TRIM29-specific siRNA or negative control combined with PEG-IFN-α-2b.ELISA was used to measure the concentrations of HBsAg and HBeAg；qRT-PCR was used to measure the relative expression levels of TRIM29 and HBV RNA；Western blot was used to measure the protein expression levels of STING，p-TBK1，TBK1，pIRF3，IRF3，MX1，and IFIT1；co-immunoprecipitation assay was used to observe the interaction between TRIM29 and STING protein.The independent-samples t test was used for comparison of normally distributed continuous data between two groups，and a one-way analysis of variance was used for comparison between multiple groups，with the least significant difference t-test for further comparison between two groups；the chi-square test or the Fisher’s exact test was used for comparison of categorical data between two groups.Results The CHB patients had a significantly higher expression level of TRIM29 in peripheral blood than the healthy controls（Plt;0.001）.In cell experiments，the expression levels of HBsAg，HBeAg，and HBV RNA increased with the upregulation of TRIM29 expression and decreased with downregulation of TRIM29 expression（Plt;0.05）.TRIM29 bound to STING and degraded STING via protease，and compared with the control group，there were no significant changes in the total protein levels of TBK1 and IRF3 after overexpression of TRIM29，while there were significant reductions in the expression levels of STING，p-TBK1，and p-IRF3（Plt;0.05）.The protein and mRNA expression levels of TRIM29 decreased with the increase in the concentration of PEG-IFN-α-2b for the treatment of HepG2 and Huh7 cells（Plt;0.01）.During the treatment with PEG-IFN-α-2b，the CHB patients had a gradual reduction in the mRNA expression level of TRIM29，and there was a significant difference between the early response group and the non-response group（Plt;0.05）.In the context of treatment with an equal volume of PEG-IFN-α-2b，compared with the control group，there were significant increases in the protein expression levels of Mx1 and IFIT1 in HepG2.2.15 cells after TRIM29 knockdown（Plt;0.05）.There was a gradual reduction in the expression of TRIM29 in CHB patients during the early stage of PEG-IFN-α-2b treatment.Conclusion TRIM29 targets and degrades STING and promotes HBV replication by inhibiting the STING-TBK1-IRF3 signaling pathway.TRIM29 interferes with the antiviral effect of PEG-IFN-α-2b，and the expression level of TRIM29 in PBMCs of CHB patients may be used as an indicator for predicting the response of patients to PEG-IFN-α-2b therapy.

Key words：Hepatitis B Virus；Tripartite Motif-Containing Protein 29；PEG-IFNα;Signaling Pathway

Research funding：National Natural Science Foundation of China（82060114）；Scienceamp;Technology Fund Project of Guizhou Health Commission in 2023（gzwkj2023-042）；The Science and Technology Fund Project of Guizhou Health Commission in 2024（gzwkj2024-010）

HBV感染是重大的全球公共衛(wèi)生問題，全球約有2.96億人感染HBV［1］。慢性乙型肝炎（CHB）可發(fā)展為肝纖維化、肝硬化和肝細(xì)胞癌?，F(xiàn)有的CHB治療藥物包括核苷（酸）類似物和聚乙二醇干擾素（PEG-IFN）等，目前的治療手段對(duì)消除HBV感染仍有很大不足，需要研究新的藥物和治療手段來克服這一問題［2］。

三結(jié)構(gòu)域蛋白（tripartite motif-containing protein，TRIM）家族成員參與多種生物過程，包括信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖、凋亡、分化和免疫應(yīng)答等［3-5］。TRIM29是其中一員，位于染色體11q23上，編碼588個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)［6-7］，在乳腺癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌和肝癌等腫瘤疾病中均有報(bào)道［8-11］。近來研究［3，12］發(fā)現(xiàn)，TRIM29在病毒感染的免疫反應(yīng)可以抑制免疫激活，發(fā)揮負(fù)向調(diào)控的作用。在部分RNA和DNA病毒感染過程中，TRIM29負(fù)向調(diào)控IFN的產(chǎn)生，幫助病毒實(shí)現(xiàn)免疫逃逸。目前，關(guān)于TRIM29與HBV的研究尚不多見，本研究初步探討TRIM29對(duì)HBV的潛在作用。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1外周血采集2021年10月—2022年6月在貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院感染內(nèi)科門診就診的64例CHB患者的血液樣本，其中未治療患者（CHB組）34例，經(jīng)PEG-IFN-α-2b治療24周患者30例，體檢中心30例健康志愿者作為對(duì)照（健康對(duì)照組）。30例經(jīng)治患者治療24周后，將HBsAglt;200 IU/mL、HBV DNA下降gt;1 log10 IU/mL的CHB患者分為早期應(yīng)答組（n=11），反之則是無應(yīng)答組（n=19）。CHB診斷參考《慢性乙型肝炎防治指南（2019年版）》［13］。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）HIV和HCV感染者；（2）酒精性脂肪性肝炎、自身免疫性肝炎和肝硬化等肝膽系統(tǒng)疾病患者；（3）惡性腫瘤及血液系統(tǒng)疾病患者。

1.1.2質(zhì)粒本實(shí)驗(yàn)中所用HBV 1.3-mer WT replico質(zhì)粒購于淼靈生物公司，pCMV-TRIM29-Flag、pCMV-STING-Myc購于上海吉?jiǎng)P基因公司，si-TRIM29購于上海漢恒生物科技公司。

1.1.3細(xì)胞本實(shí)驗(yàn)所用的HepG2和Huh7細(xì)胞購于武漢普諾賽生命科技有限公司，HepG2.2.15細(xì)胞購于上海富衡生物科技有限公司，HEK293T細(xì)胞株為本實(shí)驗(yàn)室留存。Huh7、HepG2、HEK293T細(xì)胞在10%胎牛血清和1%雙抗的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，HepG2.2.15細(xì)胞在10%胎牛血清、1%雙抗和480μg/mL G418的MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)環(huán)境：37℃;空氣，95%；二氧化碳，5%，培養(yǎng)箱濕度為70%～80%。

1.1.4藥物PEG-IFN-α-2b購于中國廈門特寶生物工程股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字S20160001，貨號(hào)：202208JS15。MG132購于美國ApexBio生物公司。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本采集獲得研究者同意后，采集新鮮抗凝全血5 mL，分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），保存于?80℃冰箱。

1.2.2細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染將細(xì)胞接種于6孔板中，細(xì)胞濃度培養(yǎng)至70%時(shí)準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染。使用lipofectamine（Invitrogen）按照制造商的說明進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。

1.2.3實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）使用RNA提取試劑（Omega）提取細(xì)胞總RNA。根據(jù)制造商的說明使用PrimeScript?RT Master Mix（Takara）將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀器（Bio-Rad）中按TB Green Premix Ex TaqⅡRR820A（Takara）說明書進(jìn)行qRT-PCR。引物序列見表1。

1.2.4 ELISA實(shí)驗(yàn)收集細(xì)胞上清液，根據(jù)制造商的說明用人HBsAg和HBeAg ELISA試劑盒（晶美生物）進(jìn)行檢測(cè)，并通過多功能酶標(biāo)儀（Thermo Fisher Scientific）檢測(cè)吸光度并分析結(jié)果。

1.2.5蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）實(shí)驗(yàn)收集細(xì)胞，加入RIPA裂解液（Solarbio）提取蛋白質(zhì)，BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度，3μL蛋白marker（Thermo、雅酶、塞維爾、聚合美），10%凝膠電泳，5%BSA混合溶液封閉2 h，一抗4℃孵育過夜，TBST緩沖液洗PVDF膜3次，加二抗孵育2 h。一抗：TRIM29（1∶2 000）、STING（1∶2 000）、TBK1（1∶1 000）、p-TBK1（1∶1 000）、IRF3（1∶1 000）、p-IRF3（1∶1 000）、DYKDDDDK tag Recombinant antibody（1∶1 200）、MYC tag Polyclonal antibody（1∶1 200）、GAPDH（1∶10 000）、Mx1（1∶1 000）、IFIT1（1∶2 500）；二抗（1∶1 000）室溫下孵育1 h。ECL法顯影，使用Image J分析計(jì)算灰度值積分。1.2.6免疫共沉淀取1 mg蛋白加入5μg抗體，4℃摩天輪旋轉(zhuǎn)過夜。取RIPA裂解液混懸磁珠，磁性分離。向4℃孵育過夜后的抗原-抗體混合物中加入預(yù)洗好的磁珠，4℃摩天輪旋轉(zhuǎn)孵育4 h。清洗磁珠，向磁珠中加入蛋白上樣緩沖液，100℃煮樣使蛋白變性。分離磁珠，收集上清，進(jìn)行SDS-PAGE。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均通過SPSS 27.0軟件進(jìn)行分析，正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，兩組間比較采用成組t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher檢驗(yàn)。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 TRIM29表達(dá)水平與HBV感染的關(guān)系與健康對(duì)照組相比，CHB組患者外周血TRIM29表達(dá)水平明顯更高（Plt;0.001）（圖1a），CHB患者一般臨床資料如表2。此外，與普通HepG2細(xì)胞相比，能夠穩(wěn)定表達(dá)HBV基因組的HepG2.2.15細(xì)胞中TRIM29表達(dá)也明顯較高（圖1b）。

2.2過表達(dá)TRIM29對(duì)HBV復(fù)制的影響在HepG2.2.15細(xì)胞中轉(zhuǎn)染TRIM29質(zhì)粒，在HepG2細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染TRIM29質(zhì)粒與pHBV1.3質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染48 h后，收集培養(yǎng)基和細(xì)胞，Western Blot和qRT-PCR檢測(cè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果顯示TRIM29過表達(dá)成功（P值均lt;0.01）（圖2a、c）。利用ELISA和qRT-PCR檢測(cè)HBV復(fù)制變化情況，與對(duì)照相比，過表達(dá)組HBsAg、HBeAg和HBV RNA的表達(dá)水平均顯著升高（P值均lt;0.01）（圖2b、d）。

2.3沉默TRIM29對(duì)HBV復(fù)制的影響將TRIM29特異性si-RNA轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中，Western Blot和qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示siRNA-3敲低成功（P值均lt;0.05）（圖3a、c）。在HepG2.2.15細(xì)胞中轉(zhuǎn)染TRIM29特異性siRNA-3，在HepG2細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染TRIM29特異性siRNA-3與pHBV1.3質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染48 h后，收集培養(yǎng)基和細(xì)胞，利用ELISA和qRT-PCR檢測(cè)HBV復(fù)制變化情況。與siNC組相比，敲低組HBsAg、HBeAg和HBV RNA的表達(dá)水平均明顯降低（P值均lt;0.05）（圖3b、d）。

2.4 TRIM29對(duì)STING-TBK1-IRF3信號(hào)通路的調(diào)控作用MG132是一種強(qiáng)效的蛋白酶體抑制劑，通過抑制蛋白酶體依賴的降解途徑來抑制蛋白質(zhì)的降解。免疫共沉淀顯示，在MG132的作用下，STING蛋白降解受到抑制，與TRIM29蛋白互相結(jié)合（圖4a）。qRT-PCR檢測(cè)顯示，與對(duì)照組相比，在HepG2細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞中過表達(dá)TRIM29能夠顯著降低IFN-αmRNA的水平（P值均lt;0.01）（圖4b、c）。Western Blot檢測(cè)STING-TBK1-IRF3信號(hào)通路蛋白結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，HepG2細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞中TBK1、IRF3總蛋白水平無明顯變化，STING、TBK1磷酸化蛋白和IRF3磷酸化蛋白表達(dá)水平均降低（P值均lt;0.05）（圖4d、e）。這些結(jié)果顯示TRIM29負(fù)向調(diào)控STING-TBK1-IRF3信號(hào)通路。

2.5 PEG-IFN-α-2b對(duì)TRIM29表達(dá)的影響分別用不同劑量的PEG-IFN-α-2b（0、10、100、1 000和10 000 U/mL）刺激HepG2細(xì)胞和Huh7細(xì)胞，24 h后收集細(xì)胞，Western Blot和qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，處理的PEG-IFN-α-2b濃度越高，TRIM29蛋白和mRNA的表達(dá)水平越低（P值均lt;0.01）（圖5）。

2.6 CHB患者PEG-IFN-α-2b治療早期HBV DNA、ALT和TRIM29 mRNA表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化治療期間，兩組HBV DNA和TRIM29 mRNA相對(duì)表達(dá)水平逐漸下降，且0、12和24周時(shí)兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均lt;0.05）。兩組ALT水平均先升后降，治療12周和24周時(shí)兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均lt;0.001）（表3）。

2.7 TRIM29對(duì)PEG-IFN-α-2b抗病毒作用的影響Western Blot檢測(cè)TRIM29對(duì)PEG-IFN-α-2b抗病毒作用的影響。與siNC組相比，PEG-IFN-α-2b處理組、PEG-IFN-α-2b與si-TRIM29共處理組細(xì)胞中的MX1（Plt;0.05，Plt;0.001）和IFIT1（Plt;0.01，Plt;0.0001）蛋白表達(dá)明顯增加。相較于PEG-IFN-α-2b處理組，PEG-IFN-α-2b與si-TRIM29共處理組中細(xì)胞的MX1（Plt;0.05）和IFIT1（Plt;0.05）蛋白增加更多（圖6）。

3討論

HBV感染可引起急性和慢性肝臟感染，該病毒是一種包膜雙鏈DNA病毒，其包膜蛋白與肝細(xì)胞表面的Na+-?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)多肽特異性結(jié)合［14］。長(zhǎng)度約為3.2 kb的松弛環(huán)狀DNA進(jìn)入宿主肝細(xì)胞的細(xì)胞核中，經(jīng)細(xì)胞修復(fù)系統(tǒng)將其轉(zhuǎn)化為共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）［15］。HBV cccDNA作為所有病毒蛋白基因組前RNA和亞基因組RNA轉(zhuǎn)錄物的模板，在病毒持續(xù)感染和復(fù)發(fā)中起著至關(guān)重要的作用。IFN參與先天免疫應(yīng)答反應(yīng)，是具有抗病毒作用的細(xì)胞因子，低病毒載量可誘導(dǎo)IFN-Ⅰ應(yīng)答并刺激HBV基因表達(dá)和復(fù)制，然而，當(dāng)病毒載量高時(shí)，IFN-Ⅰ可抑制HBV復(fù)制［16］。有研究［17-19］發(fā)現(xiàn)，IFN可清除HBV cccDNA，發(fā)揮抗病毒作用。

TRIM蛋白在多種疾病中發(fā)揮作用，包括神經(jīng)精神疾病、發(fā)育性疾病、心血管疾病、染色體異常、傳染病、癌癥等［20-23］。多種TRIM家族蛋白已被證實(shí)參與HBV復(fù)制，例如，TRIM21與HBx蛋白相互作用，靶向HBx泛素化和蛋白酶體降解，導(dǎo)致染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白6降解受損，抑制HBV復(fù)制［24］；TRIM5γ通過促進(jìn)K48相關(guān)的泛素化和K95泛素位點(diǎn)HBx蛋白的降解來抑制HBV復(fù)制［25］；TRIM25可以增強(qiáng)HBx的K90位點(diǎn)泛素化，并通過蛋白酶體途徑促進(jìn)HBx降解，TRIM25還可能作為適配器，增強(qiáng)RIG-I對(duì)pgRNA的識(shí)別，從而進(jìn)一步促進(jìn)IFN的產(chǎn)生，抑制HBV復(fù)制［26］。

人類疾病與蛋白質(zhì)變化有關(guān)，本研究發(fā)現(xiàn)TRIM29在CHB患者外周血中的表達(dá)水平明顯高于健康對(duì)照組。與普通肝癌細(xì)胞HepG2相比，TRIM29在穩(wěn)定表達(dá)HBV基因的HepG2.2.15中表達(dá)也更高。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HBV質(zhì)粒的HepG2細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞中，TRIM29過表達(dá)后可促進(jìn)HBV復(fù)制，而敲低TRIM29則抑制HBV復(fù)制。這些結(jié)果顯示，HBV感染后，TRIM29促進(jìn)HBV復(fù)制和基因表達(dá)。

STING是一種位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的小蛋白，在病毒感染觸發(fā)的免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用［27-28］。STING可通過招募TBK1促進(jìn)TBK1二聚化，從而介導(dǎo)相鄰的TBK1互相磷酸化［29］。激活的TBK1促使STING-TBK1復(fù)合物招募IRF3并磷酸化IRF3。TBK1對(duì)IRF3的磷酸化又使IRF3發(fā)生二聚化并易位到細(xì)胞核，誘導(dǎo)IFN-Ⅰ、干擾素刺激基因（ISG）和其他幾種炎癥介質(zhì)的基因表達(dá)［30-31］。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，TRIM29可與STING結(jié)合并降解STING，負(fù)向調(diào)控STING-TBK1-IRF3信號(hào)通路。STING-TBK1-IRF3信號(hào)通路參與到免疫反應(yīng)促進(jìn)IFN的產(chǎn)生，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過表達(dá)TRIM29后，IFN-α的表達(dá)降低。先前研究［32］發(fā)現(xiàn)，在EBV、HSV-60和cGAMP等dsDNA刺激下，TRIM29抑制先天免疫激活。因此，TRIM29可能是一個(gè)廣泛的免疫治療靶點(diǎn)，篩選能夠下調(diào)TRIM29表達(dá)的潛在藥物可能有助于開發(fā)新的治療HBV等病毒感染的方法，為靶向TRIM29抑制病毒復(fù)制提供一種新的策略。

有趣的是，不僅TRIM29會(huì)抑制IFN-α表達(dá)，TRIM29表達(dá)也會(huì)受到IFN-α的抑制。用不同濃度的PEG-IFN-α-2b處理HepG2和Huh7，PEG-IFN-α-2b以劑量依賴的方式抑制TRIM29的表達(dá)，使用的PEG-IFN-α-2b濃度越高，TRIM29的表達(dá)越低。

IFN是臨床最常用的抗病毒藥物之一。盡管給藥方式復(fù)雜，副作用大，僅有約1/3的患者反應(yīng)良好，但PEG-IFN-α仍是最有希望的藥物［33-35］。因此，制定準(zhǔn)確的治療方案，提高臨床藥物的治療效果是一個(gè)重要的研究方向。一些關(guān)于IFN-α耐藥機(jī)制的研究［36］發(fā)現(xiàn)，HBV通過抑制STAT1核易位，影響肝細(xì)胞中ISG的轉(zhuǎn)錄，破壞IFN-α的療效，從而阻止IFN-α信號(hào)的誘導(dǎo)。Rehermann等［37］研究認(rèn)為，宿主的免疫狀態(tài)可能與抗病毒治療的效果有關(guān)，并可通過抗病毒治療進(jìn)行調(diào)節(jié)。Luo等［38］研究發(fā)現(xiàn)IFN-α可誘導(dǎo)TRIM26表達(dá)，并通過降解HBx發(fā)揮抗病毒作用，而TRIM26 rs116806878與PEG-IFN-α的治療反應(yīng)相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，PEG-IFN-α-2b治療后，CHB患者PBMC中TRIM29的表達(dá)下降。在體外試驗(yàn)中，用等量的PEG-IFN-α-2b處理HepG2.2.15細(xì)胞，TRIM29低表達(dá)組中抗病毒蛋白MX1和IFIT1表達(dá)更多，這可能提示PEG-IFN-α-2b在TRIM29低表達(dá)的CHB患者中發(fā)揮更好的抗病毒效應(yīng)，不過發(fā)揮作用的具體途徑，尚待進(jìn)一步探究。總的來說，早期治療期間外周血中較低的TRIM29水平可能成為預(yù)測(cè)PEG-IFN-α-2b治療反應(yīng)的有效生物標(biāo)志物。

綜上所述，研究證實(shí)TRIM29對(duì)HBV基因表達(dá)有促進(jìn)作用，TRIM29表達(dá)水平還可能與PEG-IFN-α-2b治療預(yù)后有關(guān)，這些發(fā)現(xiàn)可能為未來抗病毒藥物開發(fā)和治療策略制訂提供新的參考。

倫理學(xué)聲明：本研究方案于2020年4月9日通過貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，批號(hào)為2020208。所有研究對(duì)象入組前均簽署了書面知情同意書。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：廖心負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)實(shí)施，收據(jù)收集和撰寫論文；張寶芳負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì)，指導(dǎo)撰寫文章并最后定稿。

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收稿日期：2024-02-19；錄用日期：2024-04-26

本文編輯：王瑩

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