CXC型趨化因子配體10與12在膽囊癌組織中的表達(dá)水平及在腫瘤侵襲中的作用機(jī)制

摘要：目的探討CXC型趨化因子配體10（CXCL10）和12在膽囊癌組織中的表達(dá)水平及其參與腫瘤侵襲的機(jī)制。方法選擇2020年4月—2023年4月在中國人民解放軍中部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院手術(shù)切除的56例膽囊癌患者腫瘤組織及癌旁組織標(biāo)本，使用RT-PCR法檢測癌組織及癌旁組織CXCL10 mRNA、CXCL12 mRNA表達(dá)，分析患者癌組織中CXCL10 mRNA、CXCL12 mRNA表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。使用人膽囊癌細(xì)胞株GBC-SD，構(gòu)建CXCL10、CXCL12低表達(dá)膽囊癌細(xì)胞，CCK-8法檢測CXCL10、CXCL12低表達(dá)對膽囊癌細(xì)胞株增殖的影響，Transwell檢測CXCL10、CXCL12低表達(dá)對膽囊癌細(xì)胞株侵襲能力的影響，并采用Western Blot法檢測膽囊癌細(xì)胞PI3K/Akt通路表達(dá)情況。計(jì)量資料兩組間比較采用配對t檢驗(yàn)或成組t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。結(jié)果在膽囊癌患者中，癌組織CXCL10、CXCL12 mRNA相對表達(dá)量均顯著高于癌旁組織（1.857±0.315 vs 1.024±0.203、2.038±0.374 vs 1.064±0.221，t值分別為16.342、16.778，P值均lt;0.05）。不同TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及不同腫瘤直徑患者的CXCL10、CXCL12 mRNA比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均lt;0.05）。CXCL10：si-CXCL10組細(xì)胞CXCL10 mRNA相對表達(dá)量、CXCL10蛋白表達(dá)、CCK-8吸光值、細(xì)胞遷移數(shù)量、p-PI3K及p-Akt蛋白表達(dá)均顯著低于對照組和si-RNA組（P值均lt;0.05）；CXCL12：si-CXCL12組細(xì)胞CXCL12 mRNA相對表達(dá)量、CXCL12蛋白表達(dá)、CCK-8吸光值、細(xì)胞遷移數(shù)量、p-PI3K及p-Akt蛋白表達(dá)均顯著低于對照組和si-RNA組（P值均lt;0.05）。結(jié)論膽囊癌組織中的CXCL10及CXCL12表達(dá)升高，抑制CXCL10、CXCL12表達(dá)后，膽囊癌細(xì)胞增殖、侵襲受到明顯抑制，其機(jī)制可能與抑制PI3K/Akt通路磷酸化有關(guān)。

關(guān)鍵詞：膽囊腫瘤；趨化因子CXCL10；趨化因子CXCL12；腫瘤浸潤

基金項(xiàng)目：湖北省自然科學(xué)基金（2021CFB001）

Expression of CXCL10 and CXCL12 in gallbladder carcinoma and their mechanism of action in tumor invasion

ZHANG Bohuaa，XU Yana，ZHANG Songb，HU Huaa.（a.Department of Pharmacy，b.Department of Gastroenterology，General Hospital of Central Theater Command，Wuhan 430012，China）

Corresponding author：HU Hua，ydiyaya@163.com（ORCID：0009-0000-0904-2694）

Abstract：Objective To investigate the expression levels of CXCL10 and CXCL12 in gallbladder carcinoma and their mechanism of action in tumor invasion.Methods Tumor tissue samples and adjacent tissue samples were collected from 56 patients with gallbladder carcinoma who underwent surgical resection in General Hospital of Central Theater Command from April 2020 to April 2023.RT-PCR was used to measure the mRNA expression levels of CXCL10 and CXCL12 in cancerous tissue and adjacent tissue，and the correlation of the mRNA expression levels of CXCL10 and CXCL12 in cancerous tissue with clinicopathological parameters was analyzed.The human gallbladder carcinoma cell line GBC-SD was used to construct gallbladder carcinoma cells with low expression of CXCL10 and CXCL12.CCK8 assay was used to observe the effect of low expression of CXCL10 and CXCL12 on the proliferation of gallbladder carcinoma cells，Transwell assay was used to observe the effect of low expression of CXCL10 and CXCL12 on the invasion ability of gallbladder carcinoma cells，and Western blot was used to measure the expression of the PI3K/Akt pathway in gallbladder carcinoma cells.The paired t-test or independent-samples t-test was used for comparison of measurement data between two groups；an analysis of variance was used for comparison between multiple groups，and the least significant difference t-test was used for further comparison between two groups.Results In the patients with gallbladder carcinoma，the relative mRNA expression levels of CXCL10 and CXCL12 in cancerous tissue were significantly higher than those in adjacent tissue（CXCL10：1.857±0.315 vs 1.024±0.203，t=16.342，Plt;0.05；CXCL12：2.038±0.374 vs 1.064±0.221，t=16.778，Plt;0.05）.There were significant differences in the relative mRNA expression levels of CXCL10 and CXCL12 between the patients with different TNM stages，presence or absence of lymph node metastasis or distant metastasis，and tumor diameters（all Plt;0.05）.Compared with the control group and the si-RNA group，the si-CXCL10 group had significantly lower relative mRNA and protein expression levels of CXCL10 and CXCL12，CCK-8 absorbance values，number of cell migration，and protein expression levels of p-PI3K and p-Akt（all Plt;0.05）.Conclusion There are increases in the expression of CXCL10 and CXCL12 in gallbladder carcinoma tissue，and the proliferation and invasion of gallbladder carcinoma cells are significantly inhibited after inhibition of the expression of CXCL10 and CXCL12，which might be associated with the inhibition of the phosphorylation of the PI3K/Akt pathway.

Key words：Gallbladder Neoplasms；Chemokine CXCL10；Chemokine CXCL12；Neoplasm Invasiveness

Research funding：Hubei Provincial Natural Science Foundation（2021CFB001）

膽囊癌是發(fā)生于膽囊系統(tǒng)的一種惡性腫瘤，相關(guān)調(diào)查研究［1］顯示，其發(fā)病率為膽道疾病的0.4%～3.8%。由于膽囊癌患者早期缺乏特異性臨床癥狀，且中晚期患者對各種治療方案的敏感度較低，臨床預(yù)后差，術(shù)后生存率較低［2］。因此，尋找膽囊癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)潛在的新的治療靶點(diǎn)成為膽囊癌規(guī)范化診斷以及臨床治療的重點(diǎn)［3］。趨化因子是一類小分子分泌蛋白，具有趨化細(xì)胞定向移動(dòng)的作用，在多種惡性腫瘤中已被證實(shí)趨化因子具有調(diào)控腫瘤增殖、侵襲以及血管形成等多種作用，在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要調(diào)控作用［4-5］。為了進(jìn)一步了解CXC型趨化因子配體10（CXCL10）及CXCL12對膽囊癌的調(diào)控作用，本研究探討分析CXCL10及CXCL12在膽囊癌組織中的表達(dá)水平及腫瘤侵襲的相關(guān)機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1研究對象選擇2020年4月—2023年4月在本院手術(shù)切除的56例膽囊癌患者腫瘤組織及其癌旁組織標(biāo)本?；颊呔?jīng)臨床病理確診，符合《膽囊癌診斷和治療指南（2015版）》［6］中膽囊癌相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者術(shù)前均未行放療或化療；（2）年齡40～80歲；（3）臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他原發(fā)性惡性腫瘤患者；（2）合并手術(shù)禁忌證患者；（3）合并嚴(yán)重心、肝、腎、肺等機(jī)體重要器官功能障礙患者；（4）合并感染性疾病患者。

1.2細(xì)胞及主要材料人膽囊癌細(xì)胞株GBC-SD購于中國科學(xué)院上海生科院細(xì)胞資源中心；TRIzol試劑購于英國Invitrogen公司；引物購于上海生工生物工程股份有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒購于日本TaKaRa公司；胎牛血清購于英國Invitrogen公司；LipofectamineTM 3000購于美國Invitrogen公司；CCK-8試劑盒購于日本Dojindo公司。

1.3 RT-PCR法檢測癌組織及癌旁組織CXCL10與CXCL12 mRNA表達(dá)采用TRIzol試劑盒提取膽囊癌組織、癌旁組織以及各組膽囊癌細(xì)胞中總RNA，測定其濃度及純度，然后使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。引物序列：CXCL10上游引物，5′-GTGGCATTCAAGGAGTA CCTC-3′；下游引物，5′-TGATGGCCTTCGATTCTGGATT-3′。CXCL12上游引物，5′-ATTCTCAACACTCCAAACTGTGC-3′，下游引物5′-ACTTAGCTTCGGGTCAATGC-3′。GAPDH上游引物，5′-GCAGCCAAAAGGGTCATCACTC，下游引物5′-GAGGGGCCATCCACAGTCT TCT-3′。反應(yīng)體系：2.0μL cDNA、10.0μL SYBR Premix ExTaqⅡ、上下游引物各4μL，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性30 s，95℃10 s、60℃30 s，共完成40個(gè)循環(huán)，75℃延伸5 min。以GAPDH作為內(nèi)參基因，采用2?△△Ct法計(jì)算目的基因相對表達(dá)量。

1.4細(xì)胞培養(yǎng)采用10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)GBC-SD細(xì)胞，培養(yǎng)條件為37℃、5%CO2。待細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%時(shí)使用胰酶消化，進(jìn)行傳代或用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.5構(gòu)建CXCL10、CXCL12低表達(dá)膽囊癌細(xì)胞參照LipofectamineTM 3000說明書，將CXCL10干擾RNA（si-CXCL10）、CXCL12干擾RNA（si-CXCL12）以及干擾陰性對照（si-RNA）分別轉(zhuǎn)染至GBC-SD細(xì)胞中，將未轉(zhuǎn)染細(xì)胞作為對照。將各組細(xì)胞置于37℃、5%CO2孵箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。

1.6 CCK-8法檢測CXCL10、CXCL12低表達(dá)對膽囊癌細(xì)胞株增殖的影響將上述各組處理后的細(xì)胞接種于96孔板內(nèi)，接種密度為2×103個(gè)/孔，每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)48 h后，每孔內(nèi)加入10μL CCK-8試劑，然后繼續(xù)培養(yǎng)2 h后，酶標(biāo)儀下測定各組細(xì)胞450 nm處吸光度值。

1.7 Transwell檢測CXCL10、CXCL12低表達(dá)對膽囊癌細(xì)胞株遷移能力的影響將上述各組處理后的細(xì)胞消化后，采用無血清培養(yǎng)基將細(xì)胞密度調(diào)整至1×105/mL，將細(xì)胞接種于含基質(zhì)膠的Transwell上室，每孔100μL，然后在下室加入500μL含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)在孵箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h后取出Transwell小室，使用棉簽將上室未穿膜的細(xì)胞擦去，然后使用4%多聚甲醛固定，并進(jìn)行結(jié)晶紫染色，在顯微鏡下觀察侵襲細(xì)胞的數(shù)量，隨機(jī)選取10個(gè)視野進(jìn)行遷移細(xì)胞計(jì)數(shù)。每組重復(fù)5次。

1.8 Western Blot檢測各組細(xì)胞中PI3K/Akt通路表達(dá)將上述各組處理后的細(xì)胞消化后收集細(xì)胞，使用含有蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液提取細(xì)胞總蛋白，采用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。每孔取40μg蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳，電壓120 V，電泳完成后，120 V轉(zhuǎn)移150 min至PVDF膜，然后使用5%脫脂奶粉封閉，加入一抗孵育過夜。將孵育后的PVDF膜使用TBST清洗后，加入二抗37℃孵育1.5 h。滴加化學(xué)發(fā)光劑發(fā)光液顯影，在Image J軟件下分析各蛋白灰度值，使用β-actin作為內(nèi)參蛋白，利用凝膠圖像處理系統(tǒng)分析目標(biāo)蛋白相對表達(dá)量。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料采用±s表示，兩組間比較采用配對t檢驗(yàn)或成組t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1一般資料56例膽囊癌患者中男27例，女29例，年齡43～79歲，平均年齡（58.49±10.54）歲。根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ～Ⅱ期患者21例、Ⅲ～Ⅳ期患者35例。

2.2癌組織及癌旁組織CXCL10、CXCL12 mRNA及蛋白的表達(dá)在膽囊癌患者中，癌組織CXCL10、CXCL12 mRNA相對表達(dá)量均顯著高于癌旁組織（P值均lt;0.05），且癌組織中CXCL10、CXCL12蛋白表達(dá)陽性率高于癌旁組織（P值均lt;0.05）（表1，圖1）。

2.3癌組織CXCL10 mRNA、CXCL12 mRNA表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系不同TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及不同腫瘤直徑患者的CXCL10、CXCL12 mRNA比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均lt;0.05）（表2）。

2.4各組細(xì)胞mRNA及蛋白的比較CXCL10：si-CXCL10組細(xì)胞CXCL10 mRNA相對表達(dá)量、CXCL10蛋白表達(dá)均顯著低于對照組及si-RNA組（P值均lt;0.05）；CXCL12：si-CXCL12組細(xì)胞CXCL12 mRNA相對表達(dá)量、CXCL12蛋白表達(dá)均顯著低于對照組及si-RNA組（P值均lt;0.05）（表3）。

2.5各組細(xì)胞增殖和遷移能力的比較CXCL10：si-CXCL10組細(xì)胞CCK-8吸光值與細(xì)胞遷移數(shù)量均顯著低于對照組和si-RNA組（P值均lt;0.05）；CXCL12：si-CXCL12組細(xì)胞CCK-8吸光值與細(xì)胞遷移數(shù)量均顯著低于對照組和si-RNA組（P值均lt;0.05）（表4，圖2）。

2.6各組細(xì)胞PI3K/Akt通路蛋白的比較CXCL10：si-CXCL10組細(xì)胞p-PI3K、p-Akt蛋白表達(dá)均顯著低于si-RNA組及對照組（Plt;0.05）；CXCL12：si-CXCL12組細(xì)胞p-PI3K、p-Akt蛋白表達(dá)均顯著低于si-RNA組及對照組（Plt;0.05）（表5，圖3）

3討論

膽囊癌患者早期無明顯的特異性癥狀，或患者臨床癥狀與慢性膽囊炎相似，因此臨床有著較高的漏診率和誤診率［7-8］，且膽囊癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率較高，對周圍正常組織造成侵襲，臨床預(yù)后極差，嚴(yán)重影響患者生命健康［9-10］。目前研究［11-12］顯示，腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移不僅取決于腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性，同時(shí)也依賴于宿主細(xì)胞以及細(xì)胞外基質(zhì)之間復(fù)雜的相互影響作用。研究［13］表明，在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程中，趨化因子生物軸發(fā)揮著重要作用。CXCL10也被稱為γ干擾素誘導(dǎo)蛋白10，屬于CXC趨化因子家族，具有多種生物學(xué)功能，如促進(jìn)T淋巴細(xì)胞黏附到內(nèi)皮細(xì)胞，抑制骨髓集落形成并抑制血管生成，同時(shí)與炎癥性疾病、自身免疫性疾病以及腫瘤等多種疾病有關(guān)［14］。國外學(xué)者研究［15］發(fā)現(xiàn)，CXCL12及其受體CXC型趨化因子受體4（CXCR4）所構(gòu)成的生物軸在乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，在乳腺癌的原發(fā)病灶以及轉(zhuǎn)移灶組織中，CXCR4表達(dá)明顯升高，而在乳腺癌常見轉(zhuǎn)移灶靶器官，如肝臟、肺、淋巴結(jié)、骨髓等組織中配體CXCL12表達(dá)較高，腫瘤細(xì)胞可沿著趨化因子濃度增加的靶器官進(jìn)行遷移，從而引發(fā)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。近年來，越來越多的研究［16-18］發(fā)現(xiàn)，趨化因子生物軸在腫瘤細(xì)胞及其周圍的間質(zhì)細(xì)胞交互作用中同樣發(fā)揮著重要作用。腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞均可釋放出多種趨化因子，并特異性結(jié)合腫瘤細(xì)胞膜上對應(yīng)的受體，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的激活，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)［19］。此外，趨化因子可通過與細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合來發(fā)揮作用，而這種受體通常位于免疫細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞、單核細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞的細(xì)胞膜上，當(dāng)趨化因子釋放后，周圍的免疫細(xì)胞可被吸引至該區(qū)域，從而達(dá)到招募免疫細(xì)胞的目的［20］。這對于腫瘤發(fā)展初期的免疫殺傷作用具有一定的積極意義。

本研究結(jié)果顯示，在膽囊癌患者中，癌組織CXCL10、CXCL12 mRNA相對表達(dá)量均顯著高于癌旁組織；且膽囊癌患者癌組織CXCL10、CXCL12 mRNA相對表達(dá)量與患者TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及腫瘤直徑有關(guān)。與相關(guān)研究［21］報(bào)道結(jié)果相似，提示在膽囊癌的發(fā)生發(fā)展過程中，CXCL10及CXCL12均發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。

此外，本研究結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染CXCL10干擾RNA以及CXCL12干擾RNA后，膽囊癌細(xì)胞CXCL10、CXCL12 RNA表達(dá)被明顯抑制。同時(shí)，抑制膽囊癌細(xì)胞CXCL10、CXCL12 RNA表達(dá)，顯著抑制了細(xì)胞增殖、侵襲，進(jìn)一步驗(yàn)證了趨化因子對腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲的調(diào)控作用。PI3K/Akt信號(hào)通路是G蛋白耦聯(lián)受體重要的下游通路，多項(xiàng)研究［22-23］顯示，PI3K/Akt通路是膽囊癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵信號(hào)通路，對膽囊癌細(xì)胞增殖、侵襲以及轉(zhuǎn)移均具有重要調(diào)控作用。本研究結(jié)果顯示，抑制CXCL10、CXCL12 RNA表達(dá)后，PI3K/Akt通路中關(guān)鍵蛋白PI3K、Akt磷酸化被抑制，提示抑制CXCL10和CXCL12對膽囊癌細(xì)胞增殖、侵襲的抑制作用可能與抑制PI3K/Akt通路磷酸化過程有關(guān)。

綜上所述，膽囊癌組織中CXCL10及CXCL12表達(dá)升高，且與膽囊癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)；抑制CXCL10、CXCL12表達(dá)后，膽囊癌細(xì)胞增殖、侵襲受到明顯抑制，其機(jī)制可能與抑制PI3K/Akt通路磷酸化有關(guān)，CXCL10、CXCL12有望成為膽囊癌治療的潛在生物學(xué)靶點(diǎn)。

倫理學(xué)聲明：本研究方案于2020年3月10日經(jīng)由中國人民解放軍中部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，批號(hào)：倫（審）-20200315，所納入患者均簽署知情同意書。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：張博華負(fù)責(zé)論文的選題和設(shè)計(jì)，參與資料分析、整理文獻(xiàn)和撰寫論文；胡華負(fù)責(zé)擬定寫作思路，提供指導(dǎo)性意見并最后定稿；徐艷負(fù)責(zé)論文核修，對學(xué)術(shù)問題進(jìn)行解答；張松參與采數(shù)據(jù)集、分析與解釋。

參考文獻(xiàn)：

[1]ROA JC，BASTURK O，ADSAY V.Dysplasia and carcinoma of the gallbladder：Pathological evaluation，sampling，differential diagnosis and clinical implications[J].Histopathology，2021，79（1）：2-19.DOI：10.1111/his.14360.

[2]GIRALDO NA，DRILL E，SATRAVADA BA，et al.Comprehensive mo?lecular characterization of gallbladder carcinoma and potential tar?gets for intervention[J].Clin Cancer Res，2022，28（24）：5359-5367.DOI：10.1158/1078-0432.CCR-22-1954.

[3]LIU ZX，ZHOU SB，ZHANG ZY，et al.SDC1 knockdown promotes in?vasion and migration of gallbladder cancer cells via ERK signaling pathway[J].J Mod Oncol，2021，29（21）：3726-3731.DOI：10.3969/j.issn.1672-4992.2021.21.006.

劉子祥，周少波，張子艷，等.沉默SDC1通過ERK信號(hào)通路促進(jìn)膽囊癌細(xì)胞的侵襲和遷移[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2021，29（21）：3726-3731.DOI：10.3969/j.issn.1672-4992.2021.21.006.

[4]KORBECKI J，KOJDER K，KAPCZUK P，et al.The effect of hypoxia on the expression of CXC chemokines and CXC chemokine receptors-a review of literature[J].Int J Mol Sci，2021，22（2）：843.DOI：10.3390/ijms22020843.

[5]SUN XT，HE XK，ZHANG Y，et al.Inflammatory cell-derived CXCL3 pro?motes pancreatic cancer metastasis through a novel myofibroblast-hi?jacked cancer escape mechanism[J].Gut，2022，71（1）：129-147.DOI：10.1136/gutjnl-2020-322744.

[6]Biliary Surgery Group of Surgery Branch of Chinese Medical Asso?ciation.Guideline for the diagnosis and treatment of gallbladder car?cinoma（2015 edition）[J].J Clin Hepatol，2016，32（3）：411-419.DOI：10.3969/j.issn.1001-5256.2016.03.002.

中華醫(yī)學(xué)會(huì)外科學(xué)分會(huì)膽道外科學(xué)組.膽囊癌診斷和治療指南（2015版）[J].臨床肝膽病雜志，2016，32（3）：411-419.DOI：10.3969/j.issn.1001-5256.2016.03.002.

[7]YUAN B，ZHAO XF，WANG X，et al.Patient-derived organoids for personalized gallbladder cancer modelling and drug screening[J].Clin Transl Med，2022，12（1）：e678.DOI：10.1002/ctm2.678.

[8]LIU YB，CHEN W.Current situation and prospect in the clinical treat?ment of gallbladder cancer[J].Chin J Dig Surg，2023，22（1）：81-88.DOI：10.3760/cma.j.cn115610-20230109-00013.

劉穎斌，陳煒.膽囊癌臨床治療的現(xiàn)狀與展望[J].中華消化外科雜志，2023，22（1）：81-88.DOI：10.3760/cma.j.cn115610-20230109-00013.

[9]KAMAYA A，F(xiàn)UNG C，SZPAKOWSKI JL，et al.Management of inci?dentally detected gallbladder polyps：Society of radiologists in ultra?sound consensus conference recommendations[J].Radiology，2022，305（2）：277-289.DOI：10.1148/radiol.213079.

[10]WANG LM，XU MF，KAO CY，et al.Small molecule JQ1 promotes pros?tate cancer invasion via BET-independent inactivation of FOXA1[J].J Clin Invest，2020，130（4）：1782-1792.DOI：10.1172/JCI126327.

[11]WAN GQ，LIU YH，ZHU J，et al.SLFN5 suppresses cancer cell migra?tion and invasion by inhibiting MT1-MMP expression via AKT/GSK-3β/β-catenin pathway[J].Cell Signal，2019，59：1-12.DOI：10.1016/j.cellsig.2019.03.004.

[12]LEI JJ，ZHANG J，ZHANG D，et al.Research progress of perineural invasion in gallbladder cancer[J].Chin J Dig Surg，2023，22（7）：933-937.DOI：10.3760/cma.j.cn115610-20230606-00266.

雷建軍，張健，張東，等.膽囊癌神經(jīng)浸潤研究進(jìn)展[J].中華消化外科雜志，2023，22（7）：933-937.DOI：10.3760/cma.j.cn115610-20230606-00266.

[13]ZHANG GL，LUO X，ZHANG W，et al.CXCL-13 regulates resistance to 5-fluorouracil in colorectal cancer[J].Cancer Res Treat，2020，52（2）：622-633.DOI：10.4143/crt.2019.593.

[14]YANG YR，LI JY，LEI WR，et al.CXCL12-CXCR4/CXCR7 axis in can?cer：From mechanisms to clinical applications[J].Int J Biol Sci，2023，19（11）：3341-3359.DOI：10.7150/ijbs.82317.

[15]HEIDEGGER I，F(xiàn)OTAKIS G，OFFERMANN A，et al.Comprehensive characterization of the prostate tumor microenvironment identifies CXCR4/CXCL12 crosstalk as a novel antiangiogenic therapeutic target in prostate cancer[J].Mol Cancer，2022，21（1）：132.DOI：10.1186/s12943-022-01597-7.

[16]ZHANG YY，LI J，NIU YX，et al.Expression of CXC chemokine li?gand 13 in cervical cancer and its effect on proliferation and migra?tion of cervical cancer cells[J].Chin J Gerontol，2023，43（10）：2534-2537.DOI：10.3969/j.issn.1005-9202.2023.10.062.

張燕怡，李娟，牛煜欣，等.宮頸癌中CXC趨化因子配體13表達(dá)及其對宮頸癌細(xì)胞增殖和遷移的影響[J].中國老年學(xué)雜志，2023，43（10）：2534-2537.DOI：10.3969/j.issn.1005-9202.2023.10.062.

[17]ZHOU Y，SHEN XN，CHEN ZH，et al.Expression and clinical signifi?cance of CC chemokine receptor 4 in colorectal cancer[J].China Med Herald，2023，20（11）：19-22，36.DOI：10.20047/j.issn1673-7210.2023.11.04.

周元，沈徐寧，陳治橫，等.結(jié)直腸癌中CC趨化因子受體4的表達(dá)及臨床意義[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2023，20（11）：19-22，36.DOI：10.20047/j.issn1673-7210.2023.11.04.

[18]CHANG XD，LI HY，CHEN J，et al.The role and mechanism of hu?man umbilical cord-derived mesenchymal stem cells in invasive of human pancreatic cancer cells[J].Clin J Med Off，2022，50（12）：1211-1214.DOI：10.16680/j.1671-3826.2022.12.01.

常旭東，李宏宇，陳江，等.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對人胰腺癌細(xì)胞侵襲能力調(diào)控作用及機(jī)制研究[J].臨床軍醫(yī)雜志，2022，50（12）：1211-1214.DOI：10.16680/j.1671-3826.2022.12.01.

[19]CHEN DL，SHENG H，ZHANG DS，et al.The circular RNA circDLG1 promotes gastric cancer progression and anti-PD-1 resistance through the regulation of CXCL12 by sponging miR-141-3p[J].Mol Cancer，2021，20（1）：166.DOI：10.1186/s12943-021-01475-8.

[20]D’ALTERIO C，GIARDINO A，SCOGNAMIGLIO G，et al.CXCR4-CXCL12-CXCR7 and PD-1/PD-L1 in pancreatic cancer：CXCL12 predicts survival of radically resected patients[J].Cells，2022，11（21）：3340.DOI：10.3390/cells11213340.

[21]HIRTH M，GANDLA J，H?PER C，et al.CXCL10 and CCL21 pro?mote migration of pancreatic cancer cells toward sensory neurons and neural remodeling in tumors in mice，associated with pain in pa?tients[J].Gastroenterology，2020，159（2）：665-681.e13.DOI：10.1053/j.gastro.2020.04.037.

[22]GLAVIANO A，F(xiàn)OO ASC，LAM HY，et al.PI3K/AKT/mTOR signaling transduction pathway and targeted therapies in cancer[J].Mol Cancer，2023，22（1）：138.DOI：10.1186/s12943-023-01827-6.

[23]EDIRIWEERA MK，TENNEKOON KH，SAMARAKOON SR.Role of the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway in ovarian cancer：Biological and therapeutic significance[J].Semin Cancer Biol，2019，59：147-160.DOI：10.1016/j.semcancer.2019.05.012.

收稿日期：2024-02-28；錄用日期：2024-05-10

本文編輯：林姣

引證本文：ZHANG BH， XU Y， ZHANG S， et al. Expression of CXCL10 and CXCL12 in gallbladder carcinoma and their mechanism of action in tumor invasion[J]. J Clin Hepatol， 2024， 40（11）： 2260-2265.

張博華， 徐艷， 張松， 等 . CXC 型趨化因子配體 10與 12在膽囊癌 組織中的表達(dá)水平及在腫瘤侵襲中的作用機(jī)制[J]. 臨床肝膽病 雜志， 2024， 40（11）： 2260-2265.