王婧璨　柯　學(xué)　劉麗芳

【摘要】 目的 建立補(bǔ)脾益腸膠囊中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量測(cè)定方法。方法Hedera ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱，流動(dòng)相為甲醇∶水（58∶42），檢測(cè)波長(zhǎng)為245 nm。結(jié)果 補(bǔ)骨脂素的線性范圍為0.020~0.30 μg，r=0.999 8 (n=7)，平均加樣回收率為100.61%，RSD為1.86%（n=5）；異補(bǔ)骨脂素的線性范圍為0.038~0.266 μg，r=0.999 9 (n=7)，平均加樣回收率為100.76%，RSD 為1.60%(n=5)。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可以應(yīng)用于補(bǔ)脾益腸膠囊的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵字】 補(bǔ)脾益腸膠囊；補(bǔ)骨脂素；異補(bǔ)骨脂素；高效液相色譜法

Determination of the Psoralen and Isopsorlen in Bupi Yichang Capsules by HPLC

WANG Jing-can1, KE Xue2, LIU Li-fang1*.

1 Department of Chinese Pharmaceutical Analysis, 2 Department of Pharmaceutics China Pharmaceutical University, Nanjing, 210038, China

【Abstract】 Oobjective To establish the method for determination of psoralen and isopsoralen in Bupi Yichang Capsules. Methods The Hedera ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm) was used. The mobile phase consisted of methanol-water (58∶42).The flow rate was 0.8 ml/min.The detection wavelength was set at 245 nm. RESULTS The linear range of psoralen was 0.020-0.30 μg, r=0.999 8,the average recovery was 100.61% with RSD of 1.86%. The linear range of isopsoralen was 0.038-0.266 μg, r=0.999 9, the average recovery was 100.76% with RSD of 1.60%. CONCLUSION It is a simple and accurate method for the quality control of Bupi Yichang Capsules.

【Key words】 Bupi Yichang Capsules;psoralen; isopsoralen；HPLC

補(bǔ)脾益腸膠囊是將原補(bǔ)脾益腸丸中生藥組分經(jīng)提取后制得，由黃芪、補(bǔ)骨脂、黨參、白芍、白術(shù)、延胡索、當(dāng)歸、砂仁、木香、防風(fēng)、赤石脂、甘草等組成，具有補(bǔ)中益氣，健脾和胃，澀腸止瀉，止痛止血，生肌消腫作用。用于脾虛泄瀉癥，臨床表現(xiàn)為腹瀉腹痛、腹脹、腸鳴、黏液血便或陽虛便秘等證，以及慢性結(jié)腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、結(jié)腸過敏見有上述證候者[1]。原補(bǔ)脾益腸丸為胃腸分溶型丸劑，外層在胃中溶散，在腸中吸收，以發(fā)揮全身的作用治其本，而內(nèi)層在腸道中溶散，提高病灶部位的藥物濃度，以提高藥物局部作用治其標(biāo)。補(bǔ)脾益腸膠囊保留了原制劑的這一特點(diǎn)，將胃溶部分提取物包薄膜衣，腸溶部分提取物包腸溶衣后裝入膠囊。

胃溶部分中的黃芪、黨參為方中君藥。腸溶部分中的補(bǔ)骨脂為方中臣藥，除甘草為使藥外，其余均為佐藥。補(bǔ)骨脂具有溫腎助陽，納氣，止瀉作用[2]。現(xiàn)代藥理研究表明，補(bǔ)骨脂提取物具有抗菌、抗病毒作用，其水提液具有增強(qiáng)免疫的作用[3]。此外，補(bǔ)骨脂與赤石脂組成的止血復(fù)方中發(fā)現(xiàn)有效成分為補(bǔ)骨脂素[4]，因此本文以補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素為本方中腸溶部分的指標(biāo)性成分，采用高效液相色譜法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，以控制產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器SHIMADZU LC-10ATvp型高效液相色譜儀（日本島津），SPD-10Avp型紫外檢測(cè)器（日本島津）；Hedera ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱；KQ-100型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BS124S電子天平（德國(guó)賽多利斯）。

1.2 試藥補(bǔ)脾益腸膠囊浸膏（深圳三九醫(yī)藥業(yè)股份有限公司提供），補(bǔ)骨脂素（批號(hào)：110739-200613，中國(guó)藥品生物制品檢定所），異補(bǔ)骨脂素（批號(hào)：110738-200511，中國(guó)藥品生物制品檢定所），色譜純甲醇，純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

流動(dòng)相：甲醇∶水（58∶42）；流速：0.8 ml/min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：245 nm[5]。

2.2 供試品溶液的制備

取補(bǔ)脾益腸膠囊浸膏1 g，精密稱定，置50 ml容量瓶中，加甲醇約45 ml，超聲30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液10 ml即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升各含0.1 mg的對(duì)照品溶液，臨用時(shí)稀釋到適當(dāng)濃度。

2.4 空白對(duì)照試驗(yàn)

按本制劑的處方、工藝提取不含補(bǔ)骨脂藥材的浸膏，按上述2.2方法制備陰性對(duì)照溶液。照上述色譜條件，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀。

結(jié)果見圖1。補(bǔ)骨脂素的保留時(shí)間為10.4 min，異補(bǔ)骨脂素的保留時(shí)間為11.7 min，二者的分離度為3.0，理論塔板數(shù)均在15 000以上，表明補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素能夠良好的分離，且方中的其他成分不干擾補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的測(cè)定。

圖1 HPLC圖譜

A.對(duì)照品溶液（1.補(bǔ)骨脂素 2.異補(bǔ)骨脂素）B.供試品溶液 C.陰性對(duì)照溶液

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系的考察

分別取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，精密稱定后，以甲醇溶解并定容于同一容量瓶中制成每1ml中各含補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素100μg和200μg的混合對(duì)照品溶液作為儲(chǔ)備液。精密吸取儲(chǔ)備液，以甲醇稀釋配制成補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素濃度分別為1.0、2.0、5.0、8.0、10.0、12.0、15.0；1.9、3.8、5.7、7.6、9.5、11.4、13.3 μg/ml的溶液，分別吸取上述對(duì)照品溶液20 μl，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積A為縱坐標(biāo)，溶液濃度C(μg/ml)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。其中，補(bǔ)骨脂素的標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=209 056C+3485.1，r=0. 999 8，線性范圍為0.020~0.30 μg；異補(bǔ)骨脂素的標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=201 857C－33777，r為0.999 9，線性范圍為0.038~0.266 μg。

2.4.2 精密度考察

取對(duì)照品溶液，按上述色譜條件分別重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果補(bǔ)骨脂素RSD為0.20%，異補(bǔ)骨脂素RSD為0.23%，表明該方法的精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性考察

取新鮮配制的供試品溶液分別于0、2、4、6、8、10、24 h進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果補(bǔ)骨脂素RSD為1.10%，異補(bǔ)骨脂素RSD為1.45%，說明供試品溶液在24h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取補(bǔ)脾益腸膠囊腸溶浸膏5份，按2.2方法配成供試品溶液，測(cè)定含量，結(jié)果補(bǔ)骨脂素的平均含量為2.663 mg/g，RSD為2.16%，異補(bǔ)骨脂素的平均含量為1.439 mg/g，RSD為2.79%，說明重現(xiàn)性較好。

2.4.5 加樣回收試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品5份，分別精密加入補(bǔ)骨脂素對(duì)照品和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，按2.2方法制備5份，分別進(jìn)樣，測(cè)定。結(jié)果補(bǔ)骨脂素平均回收率為100.61%，RSD為1.86% (n=5)，異補(bǔ)骨脂素平均回收率為100.76%，RSD為1.60% (n=5)，見表1。

3 討論

在供試品溶液的制備過程中，對(duì)超聲時(shí)間進(jìn)行了考察，在超聲0、10、30 min后樣品中補(bǔ)骨脂素的含量分別為2.363、2.534、2.6 mg/g；異補(bǔ)骨脂素的含量分別為1.221、1.318、1.4 mg/g，再延長(zhǎng)超聲時(shí)間，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量不再增加，因此供試品溶液在制備時(shí)超聲時(shí)間選擇為30 min。

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定補(bǔ)脾益腸膠囊中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量，經(jīng)方法學(xué)考察，本法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可以用于控制補(bǔ)脾益腸膠囊的質(zhì)量。

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